Кал на микрофлору (чувствительность к бактериофагам)

Анализ кала на микрофлору с определением чувствительности к бактериофагам

Анализ кала на определение микрофлоры проводится с целью диагностики патологических изменений микробного пейзажа и дальнейшей его корректировке при необходимости

Дисбактериоз — это качественное и/или количественное нарушение микробного состава кишечника. Бактериофаги — вирусы, которые убивают определенные виды микробов прицельно, не задевая полезной микрофлоры, в этом их преимущество перед антибиотиками. Перед назначением какой-либо терапии необходимо провести тест на чувствительность найденных патогенных микроорганизмов к различным препаратам фагов: интестибактериофаг, пиобактериофаг, сальмонеллезный, дизентерийный, синегнойный, стрептококковый, колипротейный, клебсиеллезный бактериофаги. Данный анализ проводится в нашей лаборатории.

Подготовка к исследованию:

• исследование проводится утром, натощак;
• с последнего приема пищи должно пройти не менее 8 часов;
• исключить прием алкоголя не менее чем за 24 часа до взятия биоматериала;
• материал забирается до начала лечения антибактериальными и химиотерапевтическими препаратами или через 14 дней после последнего приема препарата.

Характеристики исследования:

• Тип биоматериала: кал
• Синонимы (rus): анализ кишечной микрофлоры с выявлением чувствительности к бактериофагам
• Синонимы (eng): Disbacteriosis, Intestinal dysbiosis.
• Методы исследования: микробиологический метод.

Обследование рекомендуется проходить людям, прошедшим антибактериальную терапию, грудным детям с коликами и нарушениями стула, гипо- и авитаминозами, кожной сыпью неясного происхождения. Патологическое изменение микробного состава толстого кишечника влияет на общее состояние здоровья. При дисбактериозе может нарушаться регулярность стула (понос, запор), меняться его консистенция, цвет и запах, возникает вздутие живота, отрыжка. Пациенты с данной патологией испытывают общую слабость, головные боли и прочие симптомы интоксикации, ухудшается работа печени, может снижаться работоспособность/успеваемость, появляться сонливость или разбитость, развиваются пищевые непереносимости.

Основные жители толстого кишечника — молочнокислые микроорганизмы (лакто- и бифидобактерии) и прочие микробы, ферментирующие лактозу и другие питательные вещества из потребляемой пищи, они способны вырабатывать витамины, обезвреживать токсины, образующиеся в ходе гнилостных и бродильных процессов в кишечнике. Полезную микрофлору называют второй печенью, бактерии способны влиять даже на обмен веществ. Когда нарушается баланс микроорганизмов, на помощь приходят:

1. антибиотики и кишечные антисептики;
2. бактериофаги;
3. селективные деконтаминанты — бактериальные препараты, которые выборочно уничтожают патогенных микроорганизмов.

Важность анализа

В норме в кишечнике каждого человека должна содержаться микрофлора. Обычно ее составляют бифидобактерии, лактобактерии и другие полезные микроорганизмы, которые способствуют перевариванию пищевого комка, всасыванию полезных микроэлементов в кровоток. Если это соотношение нарушается или в ЖКТ попадает патогенный микроорганизм, развиваются заболевания. Например, кишечная инфекция, дисбактериоз. Это негативно сказывается на здоровье пациента, поэтому рекомендуется своевременно проводить микробиологическое исследование кала на микрофлору с определением чувствительности к бактериофагам.

Важно выполнить именно этот тест за счет получения следующих преимуществ:

• определение точного состава микрофлоры;
• выявление сохранности бифидобактерий и лактобактерий, которые в норме должны присутствовать в большом количестве;
• обнаружение увеличения количества условно-патогенных микроорганизмов, способных вызывать дисбактериоз;
• выявление патогенных микроорганизмов, способствующих развитию кишечной инфекции (сальмонеллы, синегнойная палочка, стрептококки, клебсиеллы и другие);
• определение чувствительности бактерий к бактериофагам;
• оценка качества проведенного лечения.

В этом исследовании определяют именно чувствительность к бактериофагам. Это препараты, основанные на вирусах, способных уничтожать определенные виды бактерий. В отличие от антибиотиков, они действуют лишь на ограниченный спектр бацилл, но не уничтожают благоприятную микрофлору. Поэтому бактериофаги чаще всего назначают при дисбактериозе.

Сбор, хранение, транспортировка образца

Для получения достоверных данных пациент должен самостоятельно собрать образец кала по правилам:

• заранее покупают в аптеке стерильный контейнер с крышкой и ложкой, отбирая определенные части фекалий (применять посторонние емкости недопустимо, в них содержится микрофлора, которая может нарушить результат исследования);
• собранные фекалии плотно закручивают крышкой;
• собирают утреннюю порцию кала, так как его важно доставить в короткие сроки, чтобы лаборант смог сразу же приступить к выполнению анализа.

Общее время от сбора до передачи в лабораторию должно составлять не более 2 часов. Иначе микрофлора начнет размножаться, поэтому результаты будут неточными или вовсе недостоверными. Если транспортировать образец невозможно сразу же, его ставят на дверцу холодильника при температуре 4-5°. В процессе хранения и транспортировки на контейнер с фекалиями не должны попадать прямые солнечные лучи. Максимальная температура при этом должна составлять 20-23°.

Ход исследования

Как только пациент передает контейнер с фекалиями в лабораторию, врач сразу приступает к анализу. Его проводят по этапам, в основном всю работу выполняет лаборант без помощи автоматического оборудования.

Подготовка и посев

Перед началом проведения теста лаборант готовит чашку Петри с питательной средой на основе агар-агара. В ней содержатся полезные микроорганизмы, которыми питаются бактерии из образца фекалий, начиная активно размножаться. Чтобы этот процесс проходил еще быстрее, включают инкубатор, устанавливая температуру на 36-37°. Так бактерии вырастут в короткие сроки, на это потребуются не более 3-5 дней.

Этапы посева:

• шпателем отбирают небольшое количество фекалий, аккуратно распределяя по поверхности питательной среды;
• следят, чтобы весь образец распространился по среде тонким и равномерным слоем, тогда колонии бактерий вырастут одинаково по всей поверхности;
• устанавливают питательную среду с образцом в инкубатор, повышая температуру и влажность для ускорения роста.

Так как в фекалиях всегда присутствуют микроорганизмы, рост будет наблюдаться в любом образце. Для обнаружения точного вида бактерий врач просматривает колонии под микроскопом.

Приготовление окрашенного препарата

Определяют точный вид выросших колоний бактерий через микроскопирование. Так как микроорганизмы в естественной среде прозрачные, их невозможно увидеть даже при использовании объектива с максимальным приближением. Поэтому предварительно проводят окрашивание по этапам:

• небольшое количество выросших бактерий переносят на предметное стекло, распределяя их тонким слоем;
• наносят краситель, который должен зафиксировать и прокрасить бактерии в течение 20-40 минут, в зависимости от выбранного препарата;
• смывают краситель физраствором, после чего препарат готов к микроскопированию.

После окрашивания бактерии приобретают разный оттенок. Он бывает красным, бордовым, фиолетовым, коричневым, розовым. Цвет зависит от выбранного красителя. Поэтому по оттенку невозможно идентифицировать микроорганизмы.

Микроскопирование

Готовый препарат устанавливают под микроскоп, приступая к выполнению последовательных этапов:

• выбирают окуляр с дальним приближением, чтобы рассмотреть общий состав микрофлоры, оценить соотношение лактобацил, бифидобактерий, условно-патогенной флоры и болезнетворных микроорганизмов;
• выбирают максимальное приближение для оценки точного вида патогенных бактерий, их идентификации (вид определяют по форме, ядру, количеству цитоплазмы и другим критериям);
• перемещают окуляр микроскопа в шахматном порядке, просматривая микрофлору в 10 полях зрения.

Данные о разновидности бактерий заносят в лабораторный бланк. Указывают соотношение микрофлоры и точные виды болезнетворных бацилл.

Определение чувствительности к бактериофагам

Лабораторные диски пропитывают растворами с бактериофагами, прикладывая их на питательную среду с выросшими колониями бактерий. Спустя несколько часов оценивают степень уничтожения микрофлоры. Если все колонии сохранились, чувствительность отсутствует. При сохранении части бактерии, определяют среднюю чувствительность. Полное уничтожение свидетельствует о максимальной чувствительности. Именно эти препараты рекомендуются к использованию.