Мутаций гена CFTR (муковисцидоз)

Доронин Иван Михайлович
Доронин Иван Михайлович Заведующий отделом ПЦР и генетики,

Определение мутаций гена CFTR ассоциированных с муковисцидозом (8 точек), ПЦР


Определение мутаций гена CFTR у больных на муковисцидоз является актуальным исследованием, поскольку раннее выявление заболевания способствует облегчению его течения. Муковисцидоз опасен быстрым поражением респираторной и пищеварительной системы (поджелудочной железы, печени, желчных путей), урогенитального тракта и потовых желез.

Подготовка к исследованию:

  • Перед исследованием необходимо сдать кровь. Если проводится пренатальный скрининг, тогда понадобятся ворсины хориона
  • Необходимо подготовить комплекты ПРОБА-РАПИД-ГЕНЕТИКА и ПРОБА-ГС-Генетика

Тип биоматериала: лейкоциты цельной крови, пятна высушенной крови, ворсины хориона

Синонимы (rus): Изучение частоты и спектра мутации гена CFTR

Синонимы (eng): Study of the frequency and spectrum of mutations in the CFTR gene

Методы: ПЦР, мультиплексна ПЦР, рестрикционный анализ

Сроки выполнения: до 7 дней



Кому назначается данное исследование на определение мутаций гена CFTR?


Данный анализ назначается больным на муковисцидоз, а также их братьям и сестрам, поскольку это аутосомно-рецисивное заболевание.бПеред проведением этого анализа подтверждается диагноз с помощью потового теста, в результате которого концентрация хлоридов составляет более 60 ммоль/л. Согласно результатам анализа приступают к полимеразной цепной реакции с исследованием ДНК.

Молекулярно-генетическое тестирование позволяет идентифицировать 65-75 процентов больных, в итоге даже профилактическое обследование при подозрении на муковисцидоз поможет облегчить структуру заболеваемости.

Данное исследование желательно назначать пациентам при наличии такого комплекса:

  • Отставание ребенка в физическом развитии;
  • есть хроническое заболевание респираторной системы;
  • полипы в полости носа, хронический гайморит;
  • панкреатит с постоянным рецидивом;
  • колит хронического течения;
  • холецистит у родственников.

Описание методики анализа мутаций гена CFTR


Проводится анализ с качественной детекцией методом ПЦР.

Проведение анализа включает:
  • наличие комплекта для определения мутаций гена CFTR;
  • выделение ДНК, используют для этого лейкоциты цельной крови, пятна высушенной крови или ворсины хориона;
  • ферментативный гидролиз протеиназой К с очисткой высаливанием, с помощью хлороформной экстракции и осаждения охлажденным этанолом (96%). Также используют набор реактивов для выделения ДНК;
  • анализ мутаций с помощью ПЦР.

Расшифровка и результаты анализа


Самой частой мутацией у больных на муковисцидоз является мутация в 13 экзоне гена CFTR. К сожалению, примерно 20% составляют не идентифицированные мутации. Это случается из-за несбалансированной экспрессии аллелей гена.

Расшифровка анализа позволяет определить первичность поражения систем и облегчить течение патологии. Так, для больных с двумя мутациями гена CFTR (1 и 2 класс) характерен ранний возраст начала клинических симптомов со стороны пищеварительной системы. Первоначально возникает расстройство работы желудочно-кишечного тракта, потом добавляется колонизация легких Pseudomona aeruginosa.

Также в не зависимости от типа мутаций с медленными аллелями гена микросомальной эпоксидгидролазы, гомозиготностью по нулевому аллелю – течение заболевания ухудшается и осложняется. В этих больных нарушение работы бронхолегочной системы имеет неблагоприятное течение.

Необходимость проведения анализа


ДНК диагностика муковисцидоза необходима для повышения информативности о заболевании семей. Часто бывает так, что когда ребенок заболевает, в первый момент родители и врачи не понимают причины и генезис заболевания. В данном случае, анализ способствует прямым или косвенным методом идентифицировать мутантные алели в больных детей, родителей, а также в братьев и сестер.