Антирезусные антитела

Изосерология – Антирезусные антитела

Данное исследование направлено на выявление специфических антител к поверхностным белкам эритроцитов (резус-фактору). Анализ проводится для диагностики резус-конфликта между матерью и ребенком, при риске невынашивания беременности, для прогноза вероятности развития гемолитической болезни и перед переливанием крови.

Подготовка к исследованию:

• Кровь сдают не ранее чем через 4 часа после последнего приема пищи
• Забор крови проводят утром перед выполнением других медицинских процедур (физиотерапии, рентгена и УЗИ)

Характеристики исследования:

• Тип биоматериала: венозная кровь
• Методы исследования: реакция агглютинации (непрямая реакция Кумбса)
• Сроки выполнения: 9 дней

Что такое антирезусные антитела?

Резус-фактор представляет собой поверхностный белок мембран эритроцитов. Большинство людей (почти 85%) его имеют и поэтому называются резус-позитивными (Rh+), у некоторых он отсутствует – их называют резус-негативными (Rh-). На состояние человеческого организма отрицательный резус-фактор не оказывает абсолютно никакого влияния. Однако, в том случае, когда будущая мать вынашивает ребенка с противоположной резусной принадлежностью, в ее организме вырабатываются специфические антитела, вступающие во взаимодействие с факторами клеток крови плода – возникает резус-конфликт. 

Несмотря на такую неадекватную реакцию, первенец резус-негативной женщины редко рождается с какой-либо патологией. Это явление обусловлено тем, что иммунная система матери не контактирует с кровью малыша до самого родоразрешения. Антитела, которые были произведены во время первой беременности, обладают способностью преодолевать транс-плацентарный барьер при последующих беременностях и действовать против клеток резус-положительного плода. 

Исследование крови на антирезусные антитела необходимо всем женщин, которые встали на учет по беременности. Резус-негативным будущим мамам тест повторяют на 18-й неделе гестации, затем – каждую неделю. Своевременно проведенная Rh- беременной женщине иммунотерапия анти-D-γ-глобулином позволяет очистить эритроциты ребенка от присутствующих на их поверхности антигенов.   

Для чего используется исследование?

Выявление наличия алло-иммунных антиэритроцитарных антител имеет важное значение в хирургической, акушерской и реанимационной практике – это необходимо для:

1. Подготовки пациентов к гемотрансфузии, пересадки органов и тканей – чтобы предупредить внесосудистый гемолиз, сопровождающийся разрушением эритроцитов в печени и селезенке.

2. Предотвращения резус-конфликта и ассоциированного с ним фетального эритробластоза плода – патологического состояния, которое приводит к:

• распаду эритроцитов;
• повреждению тканей головного мозга и почек;
• увеличению размеров селезенки и печени – в результате ускорения их функциональной деятельности, направленной на выработку новых клеток крови;
• сильной гипоксии, провоцирующей развитие в организме ребенка необратимых нарушений;
• внутриутробной гибели плода или развитию у новорожденного младенца гемолитической болезни, которая обусловлена поступлением в кровяное русло большого количества антител и проявляется желтухой и анемией.

3. Установления причин привычного не вынашивания беременности – потери более 2-х подтвержденных беременностей.

4. Проведения профилактических мероприятий осложнений гестационного периода, приводящих к повышению проницаемости либо нарушению целостности плаценты – это состояние увеличивает вероятность проникновения эритроцитов плода.

5. Контроля эффективности иммунизации пациенток, перенесших гемотрансфузии, травмы живота, инвазивные вмешательства на матке и имевших резус-конфликтные беременности, окончившиеся преждевременным родоразрешением.

Когда обнаружение антиэритроцитарных антител нецелесообразно?

Скрининговый тест, направленный для выявления алло-сенсибилизированных лиц, не проводится в тех случаях, когда:

• резус-негативная женщина вынашивает ребенка от резус-негативного отца – развитие иммунологического конфликта невозможно;
• с момента введения антирезусного иммуноглобулина прошло менее шести месяцев – незначительные концентрации антиэритроцитарных антител не поддаются определению.

Однако, несмотря на перечисленные ограничения, тест обладает высокой прогностической ценностью – его итоговые данные позволяют выявить риск и предупредить развитие резус-конфликта.

Как проводят исследование?

Чтобы обнаружить в образце биологического материала антирезусные антитела используют метод Кумбса – непрямой антиглобулиновый тест. Его выполнение заключается в следующих действиях квалифицированного специалиста:

• маркируется чистая пробирка и вносится в нее 0,1 мл цоликлона анти-D IgG;
• добавляется 0,1 мл 5% эритроцитарной массы, предварительно отмытой физиологическим раствором;
• смесь инкубируется на водяной бане при температуре +37°С в течение получаса;
• пипеткой Пастера добавляется 5 мл физ. раствора;
• пробирка центрифугируется на 1200 оборотах в течение 60 секунд;
• удаляется над-осадок (процедура отмывания эритроцитов повторяется еще 2 раза);
• к полученному осадку добавляются 2 капли анти-глобулиновой сыворотки и перемешиваются;
• дозатором добавляется 5 капель физ. раствора;
• визуально оценивается наличие агглютинации – на отсутствие поверхностного антигена эритроцитов указывает непрозрачная суспензия на дне пробирки, о его наличии свидетельствует присутствие выраженных агглютинатов (склеившихся и выпавших в осадок частиц).

Далее исследуемая сыворотка подвергается титрованию – разведению таким образом, что каждый последующий образец отличается от предыдущего в 2 раза (1:2, 1:4, 1:8, 1:16, 1:32), к каждому из них добавляют резус-позитивные эритроциты. Клетки, которые прореагировали с антителами исследуемого образца, обрабатывают анти-глобулиновой сывороткой. В зависимости от титра разведения сыворотки выдают полуколичественные итоговые данные теста.

Расшифровка результатов исследования

Положительным считают результат при выявлении высокого титра антирезусных антител (титр 1:32).

Отрицательный результат – отсутствие антирезусных антител.

На референсное значение указывает отрицательный результат проведения анализа.

В случае выявления высокого титра антител к резус-фактору следует провести такие дополнительные процедуры:

• Амниоцентез (проведение исследования околоплодных вод);
• Кордоцентез (изучение пуповинной крови).

Что такое резус-конфликт и его последствия?

Резус-конфликтом называют продукцию антител матери с отрицательным резус-фактором к эритроцитам плода с положительным резусом. Это приводит к гемолизу эритроцитов плода с последующим развитием анемического синдрома. Также гемолиз эритроцитов приводит к выделению токсических продуктов, что отрицательно влияют на органы и системы плода.

Последствия гемолитической болезни плода представлены:

• Повреждением паренхимы почек;
• Гипоксией головного мозга;
• Гепатоспленомегалией (увеличение печени и селезенки в объеме);
• Гибелью плода;
• Желтухой или анемией новорожденных (в случае легкой степени резус конфликта).