Антитела к клеткам сосудистого эндотелия (HUVEC), IgG
Кошурин Дмитрий Валерьевич
Анализ на антитела к клеткам сосудистого эндотелия
Серологическое исследование крови, которое позволяет определить уровень содержания аутоиммунных антител изотипа G (IgG) к компонентам собственных клеток сосудистого эндотелия (HUVEC), проводится для диагностирования системных васкулитов и прогнозирования их течения, оценивания активности системной красной волчанки и предположения риска возникновения острой реакции отторжения донорской почки.
Антитела к эндотелию представляют собой специфические белковые молекулы, которые производят лимфоциты для уничтожения компонентов клеток, выстилающих внутренние стенки кровеносных сосудов. Их наличие в человеческом организме обусловлено развитием ряда аутоиммунных патологий – системных васкулитов:
- гранулематоза Вегенера;
- синдрома Чарга-Стросса;
- болезни Кавасаки;
- узловатого полиартериита;
- микроскопического полиангиита;
- облитерирующего тромбангиита.
Анти-эндотелиоциты присутствуют в крови пациентов с ревматическими заболеваниями – системной склеродермией, дерматомиозитом, ревматоидным артритом, системной красной волчанкой. Их обнаружение ассоциируют с развитием волчаночного нефрита и диффузного пролиферативного гломерулонефрита.
Наличие ауто-антител к сосудистому эндотелию встречается у реципиентов донорской почки. Это явление считается неблагоприятным признаком – именно эти иммуноглобулины являются участниками реакции отторжения пересаженных тканей.
Характеристики исследования:
- Тип биоматериала: венозная кровь
- Синонимы (rus): аутоантитела к клеткам сосудистого эндотелия, антитела к эндотелиоцитам (культура эндотелиальных клеток из пупочной вены человека).
- Синонимы (eng): AECA, anti-endothelial cell antibodies.
- Метод исследования: непрямая реакция иммунофлюоресценции.
- Сроки выполнения: 14 дней
Когда делают анализ на антитела к эндотелию?
Анализ крови на анти-HUVEC необходимо при:
1. Наличии у пациента клинических признаков системного васкулита:
- быстрой утомляемости;
- необоснованного снижения массы тела;
- лихорадки;
- высыпаний на кожных покровах;
- частых носовых кровотечений;
- кашля с отделением мокроты с примесью крови;
- артериальной гипертензии;
- судорожного синдрома;
- гематурии.
2. Мониторинге состояния пациентов с системной красной волчанкой.
3. Подготовке к оперативному вмешательству по пересадке донорской почки.
Важность исследования
Если васкулит обусловлен аутоиммунной природой, в системный кровоток могут выделяться различные антитела, которые становятся причиной поражения. Часто можно обнаружить антитела к клеткам сосудистого эндотелия IgG. Если выявить их своевременно, врач сможет назначить иммуносупрессивную терапию, которая устранит повреждающий фактор до развития осложнений. Подобное состояние может обнаруживаться не только при васкулите, но и вследствие повышенной реакции иммунитета после трансплантации почки. Так как антитела не являются специфичными для определенной патологии, требуется проводить комплексную диагностику.
Своевременное проведение исследования для обнаружения антител к клеткам сосудистого эндотелия позволяет определить следующую информацию:
- определение аутоиммунной природы развития воспалительного процесса в стенках сосудов;
- своевременное отслеживание отторжения почки после ее пересадки, что можно определить до развития клинических симптомов, чтобы подавить этот процесс;
- определение осложнения системных заболеваний в виде формирования аутоантител против эндотелия сосудов (например, вследствие узловатого полиартериита, болезни Кавасаки);
- отслеживание степени тяжести системной красной волчанки, которая может осложниться поражением сосудистых стенок;
- оценка потребности в назначении иммуносупрессивной терапии в качестве единственного или комбинированного лечения при обнаружении аутоантител;
- отслеживание причины симптомов, указывающих на сосудистые повреждения (выделение крови с биологическими жидкостями, кровохарканье, гематомы, перепады артериального давления и другие).
Исследование назначает лечащий врач, который заподозрил аутоиммунную природу проявляющихся симптомов. Например, это может быть ревматолог, кардиолог, терапевт. Если выявить отклонения на ранних стадиях, можно нормализовать иммунный статус, держать болезнь под контролем. Но чаще всего полностью устранить продукцию антител нельзя.
Для чего необходим данный анализ
Лабораторное исследование проводится для выявления следующих данных:
- определение причины воспалительных процессов в сосудах мелкого и крупного калибра;
- оценка риска отторжения почечного трансплантата после проведенного хирургического вмешательства;
- определение степени развития системной красной волчанки, риска формирования ее осложнений для почек и сосудов;
- отслеживание пациентов в стадии ремиссии, определение осложнений еще до повторения негативных симптомов, чтобы исключить развитие полноценного заболевания;
- назначение правильных методов терапии, оценка их качества, определение потребности в замене препаратов или их дозировок, применении вспомогательных методик для сдерживания негативных признаков и формирования тяжелых осложнений.
При назначении диагностики важно выявить титр различных видов антител. Поэтому одновременно оценивают антитела к клеткам сосудистого эндотелия, миелопероксидазе, протеиназе-3.
Как подготовиться к анализу крови?
Биологический материал – образец крови из вены, для исследования используют плазму, лишенную фибриногена. Венепункцию производят в утренние часы (с 8.00 до 11.00), натощак.
Накануне процедуры пациенту необходимо ограничить курение и исключить:
- употребление спиртных и кофеин-содержащих напитков;
- чрезмерные физические нагрузки;
- эмоциональное напряжение.
Биоматериал подвергают исследованию с помощью реакции непрямой иммуно-флуоресценции – для ее выполнения используют культуру клеток эндотелиального слоя, выстилающего пупочную вену (HUVEC).
Особенности исследования
Исследование для определения антител к клеткам сосудистого эндотелия имеет ряд важных особенностей:
- для выявления уровня антител используют непрямую реакцию иммунофлюоресценции;
- основным биологическим материалом является венозная кровь;
- предварительно рекомендуется подготовка, однако на полученные данные влияет минимальное количество факторов, так как внешнее воздействие не может вызвать резкое увеличение или снижение антител;
- основа теста – взаимодействие антител пациента и антигенов из реактива, так как иммуноглобулины в чистом виде выявить невозможно (это связано с тем, что в крови любого человека концентрируется огромное количество разнообразных иммуноглобулинов, что затрудняет поиск требующегося вида);
- оценка иммунных комплексов возможна благодаря содержанию флюоресцентной метки на поверхности антигенов из реактива;
- определение содержания антител осуществляется на основании применения флюоресцентного микроскопа;
- в процессе диагностики оценивают наличие или отсутствие антител к клеткам сосудистого эндотелия, а также их точный титр (так можно судить о тяжести болезни и эффекте лечения);
- средний период проведения анализа – 2-3 дня, но процедуру можно ускорить при запросе, чтобы получить сведения в течение суток после сбора биоматериала.
Анализ избирательно выявляет антитела к клеткам сосудистого эндотелия. Выявляют их точную концентрацию, а также указывают референсные значения. Так пациент сможет самостоятельно сравнить эти данные, чтобы выявить наличие или отсутствие аутоиммунной патологии.
Метод проведения анализа
Непрямая реакция иммунофлюоресценции – это многоступенчатый анализ, который начинают выполнять сразу после получения образца венозной крови.
- Выделение сыворотки из цельной венозной крови. Этап необходим для устранения форменных элементов, которые могут помешать проведению теста. Для этого в пробирку добавляют разделительный гель. Биологическая жидкость самостоятельно разделяется на 2 фазы. Второй метод – это прокручивание пробирки с кровью на центрифуге при 1000 оборотах. Плазма выделяется в верхнюю область пробирки, откуда ее отбирают лабораторным шприцем. Если тест проводят для нескольких пациентов, на каждую пробу меняют наконечник.
- Применение реактива с антигенами. В растворе содержатся антигены, на поверхности которых находится светящаяся метка. Но это свечение можно обнаружить лишь при использовании флюоресцентного микроскопа. Для формирования комплексов антиген-антитело смешивают плазму и реагент. Полученный образец инкубируют, чтобы процесс прошел быстрее.
- Оценка пробы через флюоресцентный микроскоп. Небольшой объем жидкости наносят под микроскоп, просматривая содержимое. Если в пробе выявлено специфическое свечение, дополнительно подсчитывают точную концентрацию антител.
В конце методики распечатывают бланк. Указывают наличие или отсутствие антител к клеткам сосудистого эндотелия. Если их выявляют, прописывают точный титр. Рядом обозначают референсные значения, то есть пределы нормы.
Важные критерии
При назначении анализа, а также его расшифровке следует учитывать ряд важных параметров:
- данные по выявлению антител к клеткам сосудистого эндотелия неспецифичны, характерны для многих патологий, поэтому помимо этого теста проводят и другие виды лабораторно-инструментальных анализов, которые помогут подтвердить диагноз;
- исследование помогает определить аутоиммунную природу патологии;
- антитела могут встречаться не только при аутоиммунных заболеваниях, но и системных патологиях, например, гипертонической болезни, сахарном диабете;
- диагностическое значение имеет только получение положительных данных, когда титр антител находится выше референсных значений (если они содержатся в пределах нормы или полностью отсутствуют, значит, заболевание не выявлено);
- исследование проводят не только после трансплантации почки, но и до хирургического вмешательства, чтобы оценить риск осложнений.
Если выявлена аутоиммунная или иная патология, тест рекомендуется повторять в острый период, а также после наступления ремиссии.
Расшифровка анализа крови
В норме концентрация анти-эндотелиоцитов не превышает соотношения 1:40. Этот результат – отрицательный.
Увеличение показателей характерно для:
- васкулитов и васкулопатий;
- ревматических патологий;
- воспалительного процесса, протекающего в эндотелиальном слое сосудов донорского органа.
При интерпретации результатов анализа учитывают данные клинической картины, инструментального обследования и дополнительных лабораторных тестов.