Антитела к рецептору фосфолипазы А2 - диагностика мембранозной нефропатии, IgG

Анализ антител к рецептору фосфолипазы А2

Серологическое исследование крови, которое позволяет определить количество антител изотипа G (IgG) к рецептору трансмембранного гликопротеина фосфолипазы А-2 (PLA2R), проводится для диагностики и клинического разграничения гломерулонефрита и нефротического синдрома, мониторинга проводимых лечебных мероприятий.

Мембранозная нефропатия (или идиопатический мембранозный гломерулонефрит) представляет собой серьезную патологию почек не воспалительного характера, которая проявляется поражением гломерулярной базальной ламины, обусловленным отложением на ней иммунных комплексов. Это явление «запускает» механизмы гиперпродукции гликопротеинов базальной мембраны и активации глобулярных белков, которые являются частью иммунной системы. Такие изменения в человеческом организме провоцируют деструкцию и нарушение функционирования почечных клубочков, в результате чего в первичную мочу попадает большое количество белка.

Наиболее быстрым, малоинвазивным и достоверным способом дифференциальной диагностики мембранозной нефропатии считается иммуноферментный анализ крови, с помощью которого можно определить титр аутоиммунных антител к рецептору гликопротеина мембраны висцеральных эпителиальных клеток, покрывающих капилляры гломерул – фосфолипазы А-2.

Характеристики исследования:

• Тип биоматериала: венозная кровь
• Синонимы (rus): антитела к рецептору фосфолипазы А2 – диагностика мембранозного гломерулонефрита.
• Синонимы (eng): Anti-PLA2R – membranous nephropathy, membranous glomerulonephritis.
• Метод исследования: Иммуноферментный анализ (ИФА).
• Сроки выполнения: 12 дней

Когда делают анализ крови?

Анализ крови на анти-PLA2R необходимо при:

• клинической симптоматике нефротического синдрома – отечности нижних конечностей и зоны вокруг глаз, увеличения массы тела, асцита, снижения уровня содержания белка на более 3,0 г/л в сутки, гипоальбуминемии, гиперхолестеринемии;
• выявлении при иммуногистохимическом исследовании IgM.

Важность исследования

Выделяют разные формы гломерулонефрита, при которых происходит нарушение фильтрации мочи. В некоторых случаях он обусловлен продукцией аутоиммунных антител. Для каждой формы гломерулонефрита выделяют отличающееся лечение, поэтому важно своевременно провести дифференциальную диагностику. Так можно не только установить диагноз гломерулонефрита, но и определить его точную форму, причину поражения.

Аутоиммунные антитела к рецепторам фосфолипазы А2 чаще всего выделяются при первичном идиопатическом мембранозном гломерулонефрите. Поэтому нефрологи устанавливают именно этот диагноз, если определяют антитела в сыворотке крови. Помимо установления точного диагноза, тест назначают и для достижения других целей:

• оценка степени тяжести развития патологии, так как в момент начала заболевания выделяется минимальная концентрация антител, но они продолжают нарастать со временем (этот показатель коррелирует со степенью поражения мембраны гломерулярного аппарата);
• соотношение уровня антител в сыворотке крови и выделяемого белка с мочой, что тоже свидетельствует о степени нарастания очага поражения;
• подборка правильных методов терапии, если доказана аутоиммунная природа нефротического синдрома, мембранозного гломерулонефрита, помимо симптоматических методик требуется назначать иммуносупрессивную терапию, чтобы ликвидировать антитела (в норме они должны присутствовать в незначительной концентрации или полностью отсутствовать);
• оценка эффективности проводимой комбинированной терапии, в случае положительного влияния уровень антител должен постепенно уменьшаться;
• оценка потребности в увеличении дозировок препаратов или подборе дополнительных лекарственных средств, если антитела продолжают сохраняться и нарастать.

Без данного анализа невозможно установить точную форму гломерулонефрита. В данном случае патология не спровоцирована воспалительными процессами, а вызвана именно антителами. Поэтому при подозрении патологии почек, наличии нефротического синдрома врач-нефролог обязан назначить анализ на антитела к рецепторам фосфолипазы А2, чтобы не ошибиться с диагнозом.

Для чего необходим данный анализ

Выделяют ряд распространенных критериев, по наличию которых судят о необходимости проведения теста:

• наличие симптомов поражения почек, гломерулонефрита, когда требуется определить его точный вид и причину поражения;
• составление прогноза развития болезни;
• оценка степени тяжести патологии;
• оценка потребности и возможности в пересадке почки (хирургическое вмешательство данного вида проводят только в случае значительного снижения функциональности органа, при условии полного подавления аутоиммунной реакции).

Важно провести исследование до иммуносупрессивной терапии, чтобы оценить наличие или отсутствие антител. Если же она начата, на основании теста невозможно поставить первичный диагноз, но допустимо отслеживать эффективность терапии.

Как подготовиться к анализу на анти-PLA2R ?

Иммунологическое исследование следует проводить до начала иммуносупрессивной терапии. Биологический материал – образец крови из вены, для теста используют сыворотку. Венепункцию производят в утренние часы (с 8.00 до 11.00), натощак.

Накануне процедуры пациенту рекомендуют ограничить курение и исключить:

• употребление соков, жирной пищи, кофеин-содержащих, сладких газированных и спиртных напитков;
• применение нестероидных противовоспалительных и обезболивающих средств;
• чрезмерные физические нагрузки;
• психоэмоциональное напряжение.

Особенности исследования

Исследование на определение антител к рецепторам фосфолипазы А2 проводят при помощи иммуноферментного анализа. Для него свойственны следующие особенности:

• основной вид биологического материала – венозная кровь, из которой в процессе лабораторного исследования получают только плазму;
• сами по себе антитела обнаружить невозможно, поэтому в плазму венозной крови добавляют реагент, который избирательно связывается именно с антителами к рецепторам фосфолипазы А2;
• плазма и реагенты связываются друг с другом, что приводит к образованию иммунных комплексов антиген-антитело внутри полученной жидкости;
• для идентификации иммунных комплексов используют фотокалориметр, прибор пропускает световые лучи заданного диапазона, которые отражаются только от искомого показателя, что и считывает датчик;
• максимальная продолжительность проведения анализа составляет 3 суток, но обычно данные приходят раньше;
• при запросе экстренного исследования от врача результаты можно получить уже в течение суток (например, если у пациента наблюдается критическое состояние, требующее быстрого назначения методов лечения).

Исследование быстрое, но одновременно информативное и достоверное. С его помощью можно определить не только наличие антител к рецепторам фосфолипазы А2, но и их точный титр. Так судят о динамике развития болезни, составляют прогноз, определяют эффективность терапии.

Метод проведения анализа

Первоначально требуется получить образец венозной крови. Для этого пациент приходит в кабинет медсестры с утра, натощак. Руку кладут на стол, под локоть подкладывают валик. Накладывают жгут, работают кулаком. Локтевую ямку обрабатывают спиртом, затем вводят стерильную иглу, через нее кровь поступает в одноразовую пробирку с антикоагулянтом. Так биологическая жидкость сохраняется в первоначальной форме, не сворачивается. Иммуноферментный анализ для выявления антител к рецепторам фосфолипазы А2 выполняют по последовательным этапам.

1. Получение плазмы из цельной венозной крови. Для этих целей используют один из двух методов – цетрифугирование или добавление разделительного геля. Форменные элементы опускаются на дно пробирки, плазма поднимается в верхнюю часть. Именно плазму отбирают шприцем с одноразовым наконечником, перемещая в лунку планшета.
2. Использование реагента. К плазме подливают небольшое количество реагента. В нем содержатся антигены, специфически связывающиеся только с антителами к рецепторам фосфолипазы А2.
3. Инкубирование. Процесс формирования иммунных комплексов антиген-антитело происходит продолжительно, поэтому для ускорения получения результатов лабораторный планшет устанавливают в инкубатор, повышая температуру.
4. Фотокалориметрия. Готовый образец перемещают в кювету фотокалориметра. На приборной панели задают длину волны, с которой можно оценить антитела. Запускают оборудование, которое пропускает световые лучи через кювету. Если они находят иммунные комплексы, происходит светоотражение, которое фиксирует датчик. Так подсчитывают каждый комплекс антиген-антитело.

Фотокалориметр распечатывает выявленные данные на бланке. Его отдают пациенту или лечащему врачу. Расшифровкой должен заниматься только специалист, так как он учитывает не только сведения лабораторного анализа, ну и другие выявленные данные.

Важные критерии

В процессе диагностики учитывают важные сведения:

• если получен положительный анализ на наличие антител, можно предположить наличие первичного идиопатического мембранозного гломерулонефрита, но подтвердить диагноз допустимо только после проведения биопсии почек;
• дополнительно учитывают историю болезни, проявляющиеся симптомы, данные по УЗИ и КТ почек, другие лабораторные тесты;
• при выявленной патологии анализ требуется повторять каждые 2-3 недели в острую фазу, а затем каждые 3 месяца при переходе в ремиссию.

Пациентам с первичным идиопатическим мембранозным гломерулонефритом рекомендовано проходить полноценное комплексное обследование, даже если острая фаза на данный момент отсутствует. Если повторное выделение антител выявить на ранних стадиях, можно предотвратить повторное поражение гломерулярного аппарата.

Что означают результаты анализа?

В норме уровень ауто-антител к PLA2R не превышает соотношения 1:10. Этот результат считается отрицательным, который характерен для:

• ремиссии патологического процесса;
• гломерулонефрита с другой этиологической причиной.

Увеличение количества специфического IgG к рецептору фосфолипазы А-2 – положительный результат, который подтверждает факт наличия у пациента мембранозной нефропатии. Титр анти-PLA2R снижается при рационально выбранной тактике лечения, его повышение сопровождает рецидив заболевания.

Результат анализа интерпретируют в сочетании с итоговыми данными комплексного обследования пациента, включающего инструментальные методы, биопсию почек и дополнительные лабораторные исследования.