Диагностика оппортунистических инфекций

Диагностика оппортунистических инфекций EBV, CMV, HHV-6 (количественно)
Оппортунистические инфекции включают в себя заболевания, пусковым моментом развития которых является снижение иммунной резистентности (местного или гуморальных звеньев), в результате чего возможно проникновение в организм человека (взрослого или ребенка) вирусов, бактерий или грибов.
- Тип биоматериала: венозная кровь.
- Синонимы (rus): Цитомегаловирус; ЦМВ; вирус Эпштейна – Барр; ЭБВ; герпес-вирус 6-го типа; ВГЧ-6;.
- Синонимы (eng): Cytomegalovirus; CMV; Epstein Barr-Virus; EBV; Human Herpes Virus 6; HHV-6.
- Методы исследования: Полимеразная цепная реакция в режиме реального времени.
Выявление наличия вирусной или бактериальной флоры осуществляется за счет полимеразно-цепной реакции (ПЦР). Диагностика посредством ПЦР является универсальной, анализу могут быть подвергнуты различного рода биологические материалы и среды; исследование позволяет даже при очень низкой концентрации возбудителя в организме определить его наличие в исследуемом материале, посредством обнаружения определенного участка нуклеиновой кислоты (ДНК).
Кого исследуют на оппортунистические инфекции методом ПЦР
- Детей, при частых проявлениях герпетической инфекции (сгруппированные везикулярные высыпания, высокая температура, герпетическая ангина);
- При комплексном обследовании пациентов со злокачественными заболеваниями (лимфопролиферация);
- Беременных женщин;
- У пациентов с иммунодефицитом (ВИЧ-инфицированных, носителей);
- Реципиентов до и после трансплантации органов;
- Любых других пациентов, с целью контроля лечения, определения активности течения инфекции, с целью уточнения диагноза (дифференциальная диагностика с другими герпесвирусными инфекциями).
Оппортунистические инфекции выявляемые посредством ПЦР
EBV (вирус Эпштейна-Барра, вирус герпеса 4 типа) представлен двух-цепочечным ДНК. В виду того, что вирус не вызывает гибель пораженных клеток человеческого организма, а напротив, в ряде случаев усиливает их размножение, для возбудителя характерно вирусоносительство (в 90% случаев). Инфекция передается воздушно-капельным путем, при гемотрансфузиях и трансплантации костного мозга. Ассоциированные с вирусом болезни: инфекционный мононуклеоз, герпетическая ангина, болезнь Ходжкина и другие.
CMV (цитомегаловирус, герпесвирус 5 типа) - также относится к ДНК-вирусам. Он паразитирует в клетках слизистых оболочек рта (слюнных желез), носа (носоглотки), гениталий. Передача инфекции осуществляется контактным путем, воздушно-капельным, бытовым, вертикальным (от матери ребенку), трансфузионным (переливания, внутривенные инъекции). Вирус вызывает развитие цитомегалии.
Результат ПЦР диагностики вышеописанных инфекций количественным способом измерения может интерпретироваться как «ниже порога измерений», либо отрицательный. Первый результат означает, что нуклеиновые кислоты вирусов в биоматериале не обнаружены, но в организме они присутствуют, что может быть проявлением встречи человека с данной группой вирусов в течение жизни. Дать представление, хроническая это инфекция или острая, в данном случае не представляется возможным. Отрицательный результат ПЦР говорит о том, что исследуемый не имел контакта с данной группой вирусов.
Важность исследования
В организм каждого человека постоянно проникают инфекционные микроорганизмы. Это могут быть как бактерии, так и вирусы. Чаще они находятся в спящем состоянии или быстро уничтожаются иммунитетом. Но если на пациента действует повреждающий фактор, подобные инфекции могут быстро активироваться и размножиться, вызывая следующие осложнения:
- быстрое присоединение вторичных вирусных или бактериальных инфекций, сопровождающихся тяжелыми осложнениями для состояния респираторной системы;
- осложнения для других систем организма – сердечно-сосудистая, мочевыделительная, нервная;
- риск присоединения вирусных инфекций, которые могут привести к тяжелым осложнениям вплоть до летального исхода;
- повреждение сетчатки глазных яблок с последующим снижением функции зрения или полной слепотой;
- поражение нервной системы до разной степени тяжести и вида, что может проявляться в периферических или центральных волокнах;
- патологии, возникающие во время беременности – выкидыш, преждевременные роды, задержка внутриутробного развития, нарушения функциональности плаценты, энцефалопатии.
Все эти осложнения можно своевременно предупредить, если выявить возможность развития оппортунистических инфекций. Это осуществляют при помощи ПЦР методики, выявляя отсутствие или наличие микроорганизмов в системном кровотоке. Это означает, что пациенту требуется исключить воздействие негативных факторов, чтобы снизить патологическое воздействие на организм.
Важно помнить, что при помощи анализа выявляют наличие или отсутствие инфекций, но все остальные параметры оценивают при помощи других лабораторно-инструментальных тестов. Например, если у пациента определяют вирус Эпштейна-бар, требуется следить за состоянием респираторной и нервной системы, своевременно корректируя любые отклонения.
Для чего необходим анализ
Основная цель проведения лабораторного анализа – выявление наличия или отсутствия оппортунистических инфекций в виде вируса Эпштейна-Барр цитомегаловируса, вируса герпеса двух типов. На основании данных можно судить о следующей информации:
полное отсутствие вируса, что свидетельствует об исключении контакта человека с носителем данного патогенного микроорганизма;- содержание вируса в системном кровотоке без выявления степени его влияния на организм, так как через ПЦР диагностику можно определить лишь сам факт присутствия микроорганизма;
- соотношение проявляющейся клинической симптоматики и результатов анализа, чтобы понять степень влияния оппортунистической инфекции на организм в целом;
- отслеживание степени влияния вирусов на качество иммунитета, в случае дополнительного влияния негативных факторов его активность будет снижена, поэтому у пациента будут возникать частые инфекции;
- отслеживание потребности в лекарственной терапии выявляемого вируса, но только в совокупности с негативной симптоматикой, так как обычно само содержание инфекции не требует применения лекарств без явного вреда для состояния здоровья.
Если выявлена оппортунистическая инфекция, выполняют другие лабораторно-инструментальные тесты для отслеживания состояния всего организма. Затем назначают лечение, которое используют продолжительным курсом. Если вирус был выявлен ранее, после завершения методов лечения диагностику необходимо повторить. Так отслеживают возможность полного уничтожения или значительного снижения уровня оппортунистической инфекции.
Особенности анализа
При выявлении оппортунистических инфекций используют ПЦР методику. Это сложное исследование, обладающее особенностями:
- для выявления вирусов используют образец венозной крови, так как частицы микроорганизмов циркулируют в свободном виде;
- даже если в образце крови будет содержаться небольшой фрагмент микроорганизма, ПЦР методика выявит его, что невозможно при помощи других анализов;
- идентификация вирусов происходит посредством определения их генетического материала, который присущ только им и не встречается среди других вирусов, бактерий;
- несмотря на сложности проведения теста, результаты можно получить в короткие сроки, так как для обнаружения микроорганизма используют автоматический аппарат;
- предварительно венозную кровь обрабатывает лаборант, в таком виде ее можно исследовать;
- возможность идентификации вируса по небольшому фрагменту появляется за счет многократного копирования генетической информации, чтобы получить ее достаточное количество;
- максимальный период выполнения теста достигает 3 дней, но обычно результаты приходят раньше;
- диагностика безопасна, так как сбор венозной крови для анализа не вызывает негативных реакций.
Если любой вид оппортунистической инфекции проник в организм пациента, он всегда будет присутствовать в нем, но в спящем виде.
Подготовка пациента
Перед проведением анализа требуется выполнение небольшого перечня подготовительных этапов для повышения достоверности данных:
исключение употребления лекарств, которые могут привести к получению недостоверных сведений за 1 неделю;- запрет рентгенографии, компьютерной или магнитно-резонансной томографии за 1 неделю, так как все перечисленные исследования основаны на пропускании облучающих лучей через организм пациента, что может привести к тяжелым заболеваниям;
- рекомендация по проведению диагностики при отсутствии симптоматики системной инфекционной болезни;
- отсутствие употребления алкогольных напитков за 1-2 дня;
- исключение курения за 30-60 минут.
Важно помнить, что посторонние факторы мало влияют на содержание инфекционных микроорганизмов в системном кровотоке. Поэтому в большинстве случаев тесты можно проводить и без предварительной подготовки пациента, шанс на получение достоверных сведений остается высоким.
Метод проведения анализа на оппортунистические инфекции
Лабораторный анализ ПЦР по выявлению оппортунистической инфекции начинают проводить сразу же после получения образца венозной крови.
- Изъятие ДНК из цельного образца венозной крови. Для этого используют специальный набор инструментов, который определяет генетическую информацию искомой инфекции.
- Амплификация. Образец биоматериала размещают в термостат, чтобы достичь температуры, при которой водородные связи в ДНК разрушаются, но остальные ее элементы остаются в целостности.
- Снижение температуры с последующим добавлением реагента. В нем содержится праймер, который встраивается в необходимую структуру генетического материала от начала до конца выбранного участка;
- Идентификация. Применяют оборудование, которое распознает микроорганизм в режиме реального времени. При этом точное определение возможно за счет содержания праймера.
В конце диагностики выдают удобную форму результатов. Их прописывают в печатном виде, поэтому данные может расшифровать лечащий врач или пациент. Этих сведений недостаточно для постановки дифференциального диагноза, выявления точной причины, вызвавшей инфекционный процесс. Но можно предположить первопричину, на основании чего подбирают дополнительные методы диагностики.