FISH - исследование для дифференциальной диагностики

 FISH тест

Цитогенетический анализ, который выполняется с помощью метода флуоресцентной гибридизации (FISH – исследование), позволяет обнаружить хромосомные аномалии и ем самымдиагностировать злокачественные патологии.

Характеристики исследования:

• Тип биоматериала: Образец ткани, образец ткани в парафиновом блоке.
• Синонимы (rus): FISH-анализ, флуоресцентная гибридизация in situ, FISH-тест
• Синонимы (eng): FISH test, fluorescence in-situ hybridization
• Метод исследования: флуоресцентная гибридизация in situ.
• Сроки выполнения: 16 дней

FISH-тест (fluorescence in-situ hybridization) является самой современной методикой определения изменений хромосом. В его основе лежит использование специально синтезированных фрагментов дезоксирибонуклеиновой кислоты, различающихся по своему составу. Для выявления хромосомных аномалий специфические ДНК-пробы направляют к целым хромосомам и конкретным локусам нативных ДНК тестируемого образца биоматериала. Процесс гибридизации позволяет связаться существующим аберрантным хромосомам с ДНК-пробой, данное явление фиксирует флуоресцентный микроскоп – это положительный результат анализа.

Специалист оценивает количество выявленных измененных хромосом в клетке и изучает строение их генетических структур. При отсутствии в исследуемом образце хромосомных перестроек (инверсий, дупликаций, транслокаций и делеций) флуоресцентный сигнал не фиксируется – это отрицательный результат.

По сравнению с другими цитогенетическими тестами FISH-исследование характеризуется массой преимуществ:

1. Его применяют к неделящимся клеткам.

2. Для изучения могут использоваться различные образцы биологического материала:

• биоптаты;
• венозная и капиллярная кровь;
• аспираты;
• эякулят;
• амниотическая жидкость;
• гистологические блоки;
• фрагменты хориона;
• повторные препараты.

3. Способность определять микро-делеционный синдром (запускающий аномалию).

Именно поэтому FISH-тест широко применяют в дифференциальной диагностике онко-гематологических заболеваний, выборе тактики лечебных мероприятий и прогнозирования течения лимфо- и миело-пролиферативных патологий.

Когда делают FISH-исследование?

FISH-исследование назначают при:

1. Наличии у пациента таких патологий, как:

• хронический миело- либо лимфо-лейкоз;
• острый промиелоцитарный лейкоз;
• рак грудной железы;
• нейро-или ретино-бластома;
• карцинома мочевого пузыря либо толстой кишки.

2. Пренатальном и преимплантационном скрининге.

Правила подготовки к анализу

От пациента не требуется выполнения сложных подготовительных мероприятий.

Накануне отбора биоматериала необходимо:

• исключить употребление спиртных напитков;
• ограничить курение и физическую активность;
• исключить психоэмоциональное напряжение.

Важность исследования

Злокачественные новообразования характеризуются появлением атипичных клеток, которые первоначально локализуются лишь в очаге поражения, затем могут мигрировать в другие участки организма, вызывая метастазы. Если выявить патологию на ранних этапах развития, можно использовать своевременные методы терапии, чтобы добиться стойкой ремиссии. Если пролиферативные заболевания крови или опухоли в тканях не выявить на ранних этапах развития, могут развиться следующие осложнения:

• уменьшение степени дифференцировки клеток, что приводит к усилению агрессивности злокачественного процесса;
• разрастание опухоли в тканях, которая по мере увеличения сдавливает нормальные клетки, нервные волокна, сосуды (из-за этого снижается функция органа, возникает болевой синдром, кровотечения);
• перемещение злокачественных клеток из первичного очага в другие отделы организма, что провоцирует метастазы, поэтому прогноз становится неблагоприятным (то есть в короткое время наступает летальный исход без возможности торможения или устранения патологического процесса).

Практически все злокачественные процессы подлежат лечению на 1 и 2 стадии. Если заболевание запущено, возможность качественного лечения снижается. В этих целях рекомендуется проводить FISH-исследование, через которое в точности оценивают риск развития злокачественных процессов крови или солидных органов. На основании исследования выявляют следующие данные:

• наличие в исследуемой ткани или биологической жидкости аберратных хромосом, которые могут присутствовать при злокачественном процессе;
• отсутствие аберратных хромосом, что свидетельствует об отрицательном результате по поводу обнаружения злокачественного процесса.

То есть исследование качественное, определяет лишь наличие или отсутствие дефектных хромосом. Этого достаточно, чтобы оценить риск развития злокачественного новообразования. Также методику используют для выявления некоторых других данных, которые определяет лечащий врач.

Для чего необходим анализ

FISH-исследование необходимо в клинической практике для получения следующей информации:

• риск развития хромосомных патологий плода еще во время беременности, обычно выявляют трисомию по 13, 18, 21 хромосоме, при дефекте которых развиваются тяжелые заболевания, влияющие на физические или психоэмоциональные параметры организма;
• оценка нарушения в половых хромосомах, которые тоже приводят к врожденным дефектам (синдром Клайнфельтера, Тернера);
• первичная диагностика и отслеживание динамики развития онкологических заболеваний;
• эффективность химиотерапии при диагностированной злокачественной патологии;
• оценка степени приживаемости красного костного мозга, процедуру проводят при выявлении злокачественных патологий крови.

Эти данные в ходе выполнения FISH-исследования оценивает врач-генетик, онколог.

Особенности исследования

Для FISH-исследования выделяют ряд особенностей, которые делают тест основополагающим среди других видов детекции хромосом:

• материалом для исследования могут служить различные структуры организма человека, так как в них содержатся хромосомы;
• необходима простейшая предварительная подготовка биоматериала, чтобы выполнить исследование;
• суть теста сводится к совмещению биоматериала пациента и специфического реагента, который издает флюоресцентный сигнал при взаимодействии с хромосомами;
• в качестве основного инструмента для отслеживания искомого маркера используют флюоресцентный микроскоп со специальными фильтрами для отслеживания свечения;
• результаты анализа приходят уже на следующий день, лишь в некоторых случаях может потребоваться не более 2-3 дней до момента получения результата;
• на результаты исследования практически не влияют внешние факторы, так как диагностируют именно хромосомы;
• методику допустимо проводить для оплодотворенных яйцеклеток еще до имплантации (при использовании процедуры экстракорпорального оплодотворения), чтобы оценить риск хромосомных поломок, которые могут привести к врожденным заболеваниям;
• основное направление FISH-исследования заключено в обнаружении злокачественных новообразований, а также генетических дефектов в период преимплантации или уже после оплодотворения.

В случае выявление хромосомных патологий анализ проводят лишь однократно. Если же обнаружено злокачественное новообразование, методику рекомендуется повторять для отслеживания болезни в динамике. Так оценивают степень тяжести, эффективность разных тактик лечения.

Подготовка к анализу

Специфических методов подготовки к исследованию не требуется. Достаточно выполнить общие советы:

• исключение проведения инструментальных методов диагностики, которые сопровождаются облучением организма – рентгенография, компьютерная или магнитно-резонансная томография (за 7-10 дней до анализа);
• запрет психоэмоционального напряжения и повышенной физической нагрузки за 2-3 дня;
• приход в кабинет медсестры натощак в случае, если биоматериалом для анализа служит венозная кровь (обычно период голодания составляет 8 часов).

Если диагностику повторяют, каждый раз необходимо придерживаться перечисленных этапов, чтобы данные были достоверными.

Метод исследования

Как только лаборатория получает биоматериал, приступают к последовательным этапам лабораторной диагностики FISH-исследования:

• сбор клеток, которые требуется идентифицировать;
• фиксация клеток при помощи спиртсодержащих реагентов, чтобы исключить длиннейшую трансформацию и некроз;
• деконденсация хроматина, то есть удлинение и уменьшение хромосом в период телофазы митоза;
• внесение зонда на зону препарата, который подвергают методике гибридизации;
• гибридизация, которая позволяет оценить разновидность и количество хромосом, а также определить хромосомные аномалии;
• нанесение реагента на основе флюоресцентного красителя, который будет встраиваться в структуру хромосом, подлежащих идентификации (это необходимо для создания светящейся метки на поверхности Х-хромосомы, в случае ее наличия);
• размещение обработанного биоматериала под флуоресцентным микроскопом, чтобы оценить наличие или отсутствие специфического свечения.

Суть методики сводится к тому, что первичный генетический материал соединяют со специфическими зондами, которые встраиваются лишь в те участки хромосом, которые необходимо идентифицировать. Только при наличии патологических хромосом определяют специфическое свечение. Если же аномалия или искомая патология отсутствует, свечение выявлено не будет.

Дальнейшая диагностика с врачом генетиком или онкологом требуется только в случае, если выявлено специфическое свечение. Однако важно помнить, что наличие негативной симптоматики может свидетельствовать не только о хромосомных патологиях и злокачественных новообразованиях, но также и других заболеваниях. Поэтому помимо FISH-исследования могут потребоваться другие лабораторно-инструментальные методы диагностики.

Расшифровка FISH-исследования

1. Наличие в тестируемой пробе биоматериала аберрантных хромосом считается позитивным результатом.
2. Негативный результат FISH-исследования является свидетельством отсутствия хромосомных аномалий.

Заключение анализа интерпретируется с учетом данных комплексного обследования пациента, включающего инструментальные методы и дополнительные лабораторные анализы.