Гельмо-скрин

Молекулярно-биологическое исследование фекалий «Гельмо-скрин»

«Гельмо-скрин» представляет собой набор для выявления ДНК возбудителей паразитарных инфекций. Диагностика позволяет обнаружить генетический материал нескольких гельминтов: аскарид – возбудителей аскаридоза, остриц – возбудителей энтеробиоза, ленточных червей – возбудителей дифиллоботриоза, плоских червей – возбудителей описторхоза и свиного цепня – возбудителя тениоза. В качестве материала для исследования берутся фекальные образцы и ректальные мазки. Применяется методика полимеразной цепной реакции (ПЦР). Разработчиком набора «Гельмо-скрин» является ООО «АльфаЛаб». Тест-система зарегистрирована в качестве медицинского изделия, предназначенного для качественного исследования на наличие гельминтозов путем обнаружения ДНК паразитов (Opisthorchis fel., Enterobius verm., Ascaris lumb., Diphyllobothrium lat., Taenia sol.) с помощью полимеразной цепной реакции.

Преимуществами «Гельмо-скрин» и ПЦР-метода являются:

• возможность оперативно получать информацию о наличии ДНК гельминтов;
• точная идентификация;
• молекулярно-биологическая технология, обеспечивающая высокую специфичность и чувствительность теста;
• стандартизация исследования и минимальное влияние человеческого фактора, в связи с чем отпадает необходимость в микроскопических методиках, требующих высокой квалификации врача-лаборанта;
• возможность применения «Гельмо-скрина» для скринингового обследования людей, имеющих неспецифические симптомы;
• ПЦР в реальном времени, обеспечиваюшая оперативность получения результатов.

Показания для проведения анализа

К показаниям для проведения «Гельмо-скрина» относятся различные нарушения функционирования органов и систем, в основном пищеварительного тракта и иммунной системы.

Проявления со стороны желудочно-кишечного тракта:

• диарея неясного происхождения, болевые ощущения в животе;
• хронические патологии кишечника;
• симптомы тошноты в течение длительного периода, ухудшение аппетита;
• дисбактериоз;
• анемия, признаки гиповитаминоза, изменения метаболизма;
• нарушение кишечной проходимости при скоплении большого количества паразитов.

Признаки аллергии и нарушений со стороны иммунной системы:

• субфебрилитет неясной этиологии;
• наличие иммунодефицита;
• кашель, одышка, бронхиальная астма, обструктивный бронхит;
• зуд и гиперемия кожи, дерматит, экзема, нейродермит, крапивница;
• головные боли, утомляемость;
• стойкая эозинофилия, возможны лейкоцитоз или диспротеинемия;
• токсико-аллергические реакции.

Нервно-психические расстройства (особенно при наличии сопутствующих симптомов со стороны ЖКТ):

• нейроциркуляторная дистония;
• снижение настроения, вплоть до депрессии;
• отставание в развитии у детей.

Гельмо-скрин может проводиться не только при наличии проблем со здоровьем, но и в рамках профилактического обследования.

Как подготовиться к тесту

Исследование не требует специальной подготовки. Для теста берется кал, собираемый из нескольких участков фекалий сразу после дефекации. Забор образцов производится в специальные одноразовые контейнеры емкостью не выше 100 мл. Количество забираемого биоматериала должно занимать не более 1/5 объема контейнера. В образце не должны присутствовать посторонние примеси (моча, вода, отделяемое половых органов и т. п.). Рекомендуется исследовать образец сразу же. При необходимости он может храниться в течение суток в холодильнике при температуре 4–8° С.

Методика проведения анализа

В основе исследования лежит полимеразная цепная реакция, в ходе которой происходит увеличение числа копий специфических участков ДНК. Одновременно с амплификацией происходит определение результатов в режиме реального времени. Если при помощи полимеразной цепной реакции выявляется видоспецифическая ДНК или РНК, это подтверждает наличие патогенов и позволяет диагностировать гельминтоз. В основе ПЦР лежит многократное копирование определенного участка нуклеиновой кислоты, специфического для вида паразитов. Этим объясняется высокая чувствительность методики. В ходе анализа применяются инициаторы амплификации, являющиеся синтезированными короткими участками ДНК – праймерами. В этих затравках-праймерах последовательность нуклеотидов точно соответствует исследуемым фрагментам ДНК-мишеней. С этим связана высокая специфичность метода ПЦР.

На сегодняшний день тест-системы для ПЦР-диагностики могут использоваться как для качественного анализа образцов биоматериала, так и для количественной оценки с целью подсчитать абсолютное или относительное содержание патогена. «Гельма-скрин» относится к тест-системам для качественного определения присутствия возбудителей в биоматериале. Высокая информативность этого лабораторного теста обусловлена тем, что он относится к мультипраймерным диагностикумам, позволяющим искать сразу несколько возбудителей в одном образце.

Диагностическая процедура достаточно проста в выполнении и при необходимости может быть многократно повторена для мониторинга течения болезни и контроля эффективности лечения. Время, требуемое для процедуры ПЦР, не превышает 5 часов. Может проводиться работа сразу с несколькими клиническими образцами. При проведении анализа используются автоматические станции, позволяющие выделять ДНК и подготавливать реакционные смеси.

Молекулярно-биологическая диагностика обеспечивает выявление микст-инфекций. Она эффективна даже при легкой тяжести гельминтоза и при бессимптомных формах. В таких ситуациях популяция гельминтов в организме невысока и зачастую не может быть обнаружена методами овоскопии. Высокий показатель чувствительности выгодно отличает ПЦР-метод от других лабораторных тестов для выявления гельминтов.

К сложностям применения молекулярно-биологических методов в диагностике гельминтозов относится адекватность пробоподготовки. В образцах фекалий, собранных для выявления гельминтов, содержится большое число ингибиторов ПЦР. Для решения этой проблемы могут применяться сорбентные методики экстракции ДНК. Они помогают удалить примеси из образцов, в том числе при работе с фиксированными биоматериалами. На этапе выделения ДНК яйца паразитов могут обладать устойчивостью к воздействию лизирующих агентов. Повысить эффективность извлечения генетического материала из яиц гельминтов удается путем специальной химической обработки или с помощью циклов заморозки и нагреваний образцов.

Интерпретация «Гельмо-скрина»

ДНК каждого из патогенов, входящих в «Гельмо-скрин», обнаруживается с помощью самостоятельной постановки ПЦР, поэтому в случае необходимости тест может быть применен для обнаружения только одного из гельминтов. В бланке результатов «Гельмо-скрина» будут указаны данные для каждого из определяемых видов паразитов: обнаружена или не обнаружена искомое ДНК. Исследование обладает высокими показателями чувствительности и специфичности, поэтому позволяет подтвердить или исключить глистную инвазию с высочайшей степенью точности.

Окончательный диагноз устанавливает врач, основываясь на совокупности данных: жалоб, анамнеза, объективного осмотра, результатов дополнительных исследований. Гельмо-скрин может назначаться как самостоятельное исследование или совместно со стандартными тестами, применяемыми для диагностики гельминтозов. Оптимальным считается комплексное лабораторно-инструментальное исследование, включающее прямые, косвенные и специальные методы. К прямым относятся методики непосредственного поиска гельминтов, личинок, яиц (овоскопия, соскоб, анализ дуоденального содержимого). Под косвенными методами подразумевают диагностику вторичных изменений, обусловленных жизнедеятельностью гельминтов (иммуноферментный анализ, ультразвуковое исследование, рентгеноскопия). К специальным методам относятся полимеразную цепную реакцию, кожные пробы и другие.