Выявление Helicobacter pylori (H. pylori) методом ПЦР

Молекулярно-биологическое исследование биоптата слизистой желудка на хеликобактер пилори (Helicobacter pylori) ДНК (реал-тайм ПЦР) – метод лабораторной диагностики, направленный на точную идентификацию болезнетворной бактерии, которая вызывает воспаление, эрозию и язву желудка, двенадцатиперстной кишки. На основании теста можно с точностью подтвердить диагноз, чтобы назначить правильные методы терапии.

Характеристики исследования:

Тип биоматериала: биоптат слизистой желудка
Синонимы (rus): Хеликобактер (полимеразная цепная реакция в режиме реального времени)
Синонимы (eng): H. pylori, Helicobacter pyloridis, DNA (real-time polymerase chain reaction)
Метод исследования: Полимеразная цепная реакция в режиме реального времени.

Helicobacter pylori Исследование назначают для получения следующей информации:

подтверждение точного диагноза хеликобактериоза;
дифференциальная диагностика заражения хеликобактер пилори с другими патологиями, которые могут вызывать схожую клиническую симптоматику;
оценка причин воспалительных процессов в разных отделах пищеварительного тракта (гастрит, дуоденит, гастродуоденит);
причины язвенного поражения участков ЖКТ (язвенная болезнь желудка и двенадцатиперстной кишки);
причины других патологий пищеварительного тракта – гастроэзофагеальная рефлюксная болезнь, диспепсия без язвы, лимфома или рак желудка;
потребность в назначении специфической антибактериальной терапии, направленной против хеликобактер пилори;
эффективность проведенной лекарственной терапии, чтобы судить о выздоровлении или назначении вспомогательных тактик;
причины негативной клинической симптоматики – боль в верхнем участке живота, тошнота, рвота, отрыжка, изжога, отсутствие аппетита, тяжесть в животе, нарушение формирования стула, кровь в рвоте или кале, недомогание.

Если не установить точную причину негативной симптоматики, лечение может быть назначено неправильно. Это приведет к обильному размножению хеликобактер пилори, которая распространяется не только в желудок, но также в двенадцатиперстную кишку. Это значительно ухудшает процесс пищеварения, приводит к риску образования крупных язв, которые могут кровоточить внутри ЖКТ или приводить к прободению с последующим выходом содержимого в брюшную полость.

Helicobacter pylori

Helicobacter pylori – патогенная бактерия, которая вызывает хеликобактериоз в пищеварительном тракте человека. При этом она поражает не все отделы, а только желудок и двенадцатиперстную кишку. Там бактерия образует обильные очаги колоний, которые первоначально приводят к воспалительному процессу. При отсутствии лечения он переходит в эрозии, затем в язвы.

Для бактерии хеликобактер пилори характерны следующие особенности:

миниатюрные размеры с длиной 3,5 микрон, шириной 0,5 микрон;
по телу располагаются жгутики, при помощи которых микроорганизм перемещается по слизистой оболочке желудка, а затем закрепляется в разных участках тканей;
в процессе жизнедеятельности бактерии выделяют продукты обмена веществ, которые меняют кислую среду на щелочную, что ухудшает работоспособность ткани в пораженной зоне желудка или кишечника (щелочная среда служит защитным фоном, который предупреждает гибель бактерий в кислой среде желудка);
процесс заражения происходит контактно-бытовым путем, через продукты питания или воду, при контакте с биологическими жидкостями зараженного человека (например, в процессе поцелуя).

Хеликобактер пилори может располагаться в пищеварительном тракте многих людей, но она не всегда приводит к воспалительным процессам и дальнейшему поражению слизистой оболочки. Обычно на пациента влияют дополнительные повреждающие факторы. Например, неправильное питание, снижение функции иммунитета, вредные привычки. Тогда бактерия начинает обильно размножаться, поражая ткани ЖКТ.

Показания для анализа

Молекулярно-биологическое исследование биоптата слизистой желудка на хеликобактер пилори путем методики ПЦР проводят при наличии показаний:

воспалительные процессы, эрозии, язвы в желудке и двенадцатиперстной кишке;
гастроэзофагеальная рефлюксная болезнь, которая не поддается лечению привычными лекарственными средствами;
хронические диспепсические расстройства, которые развиваются без язвенного поражения;
лимфома или злокачественное новообразование желудка, которое может развиваться на фоне хронического воспаления или язвенного поражения, вызванного хеликобактер пилори;
причины диспепсических расстройств, нарушения процесса пищеварения, диареи или запора, если другие методы диагностики не предоставили достоверных данных;
подтверждение хеликобактериоза, если другие методы диагностики не подтвердили диагноз, но симптоматика указывает на данную патологию.

Методику не проводят в профилактических целях. Это связано с тем, что для проведения анализа необходима инвазивная процедура, в процессе которой получают биоптат из желудка и двенадцатиперстной кишки. Поэтому предварительно требуется проходить обследование у гастроэнтеролога или иного специалиста. Только затем проводят процедуру по получению биоптата, затем выполняют анализ ПЦР.

Как подготовиться к анализу

Перед проведением молекулярно-биологического исследования биоптата слизистой оболочки желудка на хеликобактер пилори пациент должен пройти последовательные этапы подготовки:

передача перечня употребляемых лекарственных препаратов лечащему врачу с исключением тех из них, которые могут повлиять на состояние слизистой оболочки желудка и двенадцатиперстной кишки (например, антибиотики, гормональные средства) за 1 неделю;
запрет употребления новых лекарственных препаратов, о которых заранее не был предупрежден лечащий врач минимум за 1 неделю;
запрет распития алкогольных напитков за 2 суток;
исключение жирной, острой, жареной, чрезмерно соленой, копченой пищи за 3-5 дней;
исключение ситуаций, которые могут вызвать стресс и нервное напряжение за 2-3 дня;
запрет чрезмерной физической активности за 3 дня;
последний период употребления пищи за 10 часов до анализа, а жидкости за 4 часа (в процедурный кабинет приходят строго натощак).

Без предварительной подготовки проводить процедуру недопустимо, так как она инвазивная, сопровождается выполнением общего наркоза.

Метод исследования

Метод исследования Первоначально для выполнения процедуры под общим наркозом проводят сбор небольшого кусочка ткани из очага поражения, в котором предполагается наличие хеликобактер пилори. Собранный биоматериал размещают в стерильный контейнер и отправляют в лабораторию. ПЦР анализ выполняют незамедлительно, чтобы содержащаяся микрофлора не успела видоизмениться. Для этого из цельной ткани получают взвесь клеток, которую подвергают этапам анализа.

Денатурация. Это процедура, во время которой биоматериал подвергают нагреванию до 96°. В таких условиях водородные связи в цепочках ДНК разрушаются, поэтому они разъединяются на отдельные нити.
Отжиг. Температуру биоматериала понижают до 72°. Затем вводят праймеры, которые встраиваются в отдельные нити из цепочек ДНК. Именно эти зоны подвергаются дальнейшему исследованию.
Элонгация. Температуру биоматериала повторно повышают, затем добавляют фермент, который приводит к повторному синтезу нитей из ДНК. Копирование проводится многократно, чтобы получилось достаточно биоматериала для дальнейшего обследования.
Идентификация патогенного микроорганизма. Используют автоматический анализатор, который определяет точную разновидность бактерии. В данном случае выявляют именно хеликобактер пилори.

Результаты указывают на лабораторном бланке, затем направляют пациенту или лечащему врачу для подтверждения диагноза и назначения дальнейших методов терапии.

Расшифровка анализа

В организме здорового человека не должно содержаться бактерии хеликобактер пилори, поэтому в норме результат может быть только отрицательным. Это свидетельствует об отсутствии инфицирования, поэтому дальнейшее обследование и назначение методов терапии не требуется.

Причины положительного результата:

инфицирование хеликобактер пилори, которая приводит к активному инфекционному процессу;
ранее инфицирование хеликобактер пилори, но на данный момент пациент состояние ремиссии.

Причина отрицательного результата:

отсутствие хеликобактера пилори ЖКТ;
качественно проведенная терапия, после которой хеликобактериоз полностью устранился.

Важно помнить, что ложноотрицательный результат может развиться под влиянием антибиотиков и гормонов, о чем заранее предупреждает лечащий врач.

Helicobacter pylori, ДНК (реал-тайм ПЦР)

Парсункова Кермен Анатольевна