Иммуногистохимия: CD4, CD8, CD20, CD138+ Ki-67

Расширенный анализ эндометрита

Расширенное иммуногистохимическое исследование мукозного слоя полости матки с использованием панели моноклональных антител (CD138, CD20, CD8, CD4)  и дополнительным изучением экспрессии маркера пролиферации (Ki-67), проводится для выявления хронического эндометрита.

Хронический эндометрит – это воспаление базального покрова матки. Его развитие провоцирует урогенитальная инфекция (микоплазмоз, хламидиоз, трихомониаз и пр.) и патогенные микроорганизмы (стрептококки, стафилококки, энтеровирусы, кишечная и синегнойная палочки и др.).

Благоприятные для активного размножения болезнетворных бактерий условия создают следующие факторы:

• гинекологические инвазивные манипуляции – лечебное выскабливание, кесарево сечение, гистеро-скопия, введение внутриматочного контрацептива;
• проведение ЭКО;
• преждевременное прерывание беременности;
• нарушение гормонального фона;
• ослабление иммунной защиты.

Диагностирование хронического эндометрита основано на анамнезе жизни пациентки, результатах гинекологического осмотра, данных клинического течения и симптоматики патологического процесса. Для определения характера нарушений клеточного состава эндометрия и степени их выраженности практикующие специалисты назначают иммуно-гистохимическое исследование, включающее определение:

• CD4 – моно-мерного гликопротеина надсемейства Ig;
• CD8 – трансмембранного белка, ко-рецептора Т-лимфоцитов;
• CD20 – антигена В-лимфоцитов;
• CD138 – кластера дифференцировки плазмоцитов;
• Ki-67 – антигена опухолевого процесса.

Когда проводят ИГХ?

Иммуноморфологический анализ врач назначает при бесплодии и наличии у пациентки:

• ноющих болезненных ощущений в нижнем отделе живота;
• недомогания;
• общей слабости;
• повышения температуры;
• обильных патологических выделений из полового тракта.

Иммуногистохимическое исследование

Данная лабораторная методика основана на изучении морфологической структуры биоптата, меченного специфическими антителами, под микроскопом. После нанесения на воспаленную ткань, экспрессирующую патогены, антител, происходит иммунная реакция с образованием комплекса «антиген-антитело» - его визуализации способствуют особые метки.

Важность исследования

Хронический эндометрит протекает продолжительно, может переходить от выздоровления к рецидиву. Важно выявить сам патологический процесс, определить его параметры, что становится доступным только при иммуногистохимическом исследовании хронического эндометрита с дополнительным исследованием экспрессии маркера пролиферации:

• степень развития воспалительного процесса;
• разновидность иммунного ответа, который вызвал воспаление в матке (Th-1 иммунный ответ, воздействие токсических лимфоцитов, гуморальный ответ);
• наличие или отсутствие плазматических клеток, которые присутствуют в очаге поражения для продукции специфических антител, направленных против патогенных микроорганизмов;
• наличие или отсутствие пролиферативной активности в ткани, в случае ее появления можно судить об активной фазе воспаления.

Благодаря исследованию можно обнаружить первичное воспаление, подобрать правильные методы терапии, которые будут воздействовать на очаг поражения патогенетически. Если диагностика отсутствует, врач может расценить хронический эндометрит неправильно, из-за чего назначит неверные лекарственные средства и иные методы терапии. Это приведет к осложнениям:

• усиление воспалительного процесса, который локализуется не только в одной точке, но также распространяется на всю матку;
• перемещение воспаления на другие органы половой системы за пределы матки;
• разрастание соединительнотканных волокон, которые приводят к образованию спаек внутри матки, в других половых органах (яичники, фаллопиевы трубы), в соседних участках организма (мочевыделительная система, кишечник, брюшная стенка);
• патологическое разрастание ткани, которая приводит к доброкачественным новообразованиям (например, одиночные или множественные полипы на теле матки);
• обильное размножение инфекционного агента, который приводит к нагноению, распространению на другие участки половой системы;
• переход патогенного микроорганизма в системный кровоток, что провоцирует сепсис (в таком случае прогноз окажется неблагоприятным, так как при отсутствии экстренной помощи наступает летальный исход);
• бесплодие, привычное невынашивание беременности, преждевременные роды на поздних сроках.

Поэтому при подозрении хронического эндометрита с отсутствием достаточной эффективности от методов терапии, а также в осложненных случаях необходимо проводить иммуногистохимическую диагностику.

Для чего необходим анализ

На основании иммуногистохимического исследования хронического эндометрита с дополнительным исследованием экспрессии маркера пролиферации определяют следующие данные:

• наличие или отсутствие маркеров хронического эндометрита;
• определение факторов, которые приводят к частым кровотечениям из матки без менструального цикла, хронической боли в нижней части живота;
• комплексная оценка всех факторов, которые могут привести к бесплодию или прерыванию беременности (причем прерывание возможно как на ранних сроках, так и в 3 триместре);
• выявление стадии развития воспалительного процесса в матке – острая, хроническая, ремиссия;
• риск продукции защитных иммунных клеток, которые поглощают собственные элементы организма (например, подобная реакция может развиваться при аутоиммунном процессе);
• подготовка к экстракорпоральному оплодотворению в случае, если предыдущие попытки были не удавшимися или присутствует негативный анамнез по патологиям матки (в частности это касается хронического эндометрита).

Методику проводят только по строгим показаниям, в профилактических целях ее не назначают. Необходимость в проведении теста определяет гинеколог, репродуктолог. Предварительно требуется пройти другие методы диагностики, чтобы оценить состояние матки.

Особенности исследования

Для иммуногистохимического исследования хронического эндометрита с дополнительным исследованием экспрессии маркера пролиферации выделяют ряд особенностей:

• для проведения диагностики предварительно берут небольшой кусочек ткани из патологического очага матки (вне организма он претерпевает быструю трансформацию, поэтому его обрабатывают парафином);
• цельный кусочек ткани исследовать невозможно, поэтому проводят предварительную нарезку на тончайшие слои, каждый из которых распределяют по отдельному стерильному предметному стеклу;
• в ходе диагностики первоначально оценивают структуру клеток при помощи гистологического исследования, только затем выполняют иммуногистохимический анализ для вычисления специфических маркеров воспаления – CD4, CD8, CD20, CD138, Ki-67.

Для диагностики используют флюоресцентный микроскоп, который может максимально приближать изображение, выполняя снимки увиденных данных.

Подготовка к анализу

Для проведения иммуногистохимического исследования необходим сбор кусочка ткани из матки. Предварительно пациентка должна пройти этапы подготовки, чтобы изученные сведения получились достоверными:

• исключение всех лекарственных средств, которые запретил лечащий врач за 1 неделю до анализа (в особенности это касается препаратов, влияющих на половую систему или степень активности иммунитета);
• запрет введения местных препаратов в область влагалища, так как многие из них могут повлиять на состояние матки (например, лекарства, вводимые в виде спринцевания, супозиториев, сидячих ванночек);
• подбор фазы менструального цикла в период пролиферации, обычно это 5-10 день;
• запрет употребления алкогольных напитков за 1 день;
• запрет половых актов за 1-2 дня.

Даже если врач проводит исследование повторно, требуется в точности придерживаться этапов подготовки.

Создание микропрепарата

Иммуногистохимическое исследование проводят на основании микропрепаратов, которые изготавливают из кусочков тканей, изъятых из матки. Процедуру выполняют по этапам:

• удаление парафина;
• нарезание ткани на тончайшие слои, каждый из которых устанавливают на отдельное предметное стекло;
• обезвоживание ткани посредством дегидратации;
• распределение реагента на основе специфических иммунных клеток, которые будут избирательно связываться только с маркерами CD4, CD8, CD20, CD138, Ki-67;
• добавление еще одного реагента с ферментами, которые вступают в иммунные комплексы, вызывая специфическое свечение через флуоресцентную метку;
• окрашивание, при помощи которого становится видно не только иммунные комплексы, но и структуру клеток эндометрия.

В подобном виде микропрепараты отправляют к цитологу, который оценивает клетки и другие компоненты при помощи современного микроскопа.

Микроскопия

Микропрепарат устанавливают в микроскоп, затем изучают на разных увеличениях. Первоначально просматривают клетки издалека, чтобы выявить патологические очаги и свечение искомых комплексов. Затем максимально приближают разрешение для оценки структуры ткани, иммунных комплексов в поле зрения. Для CD4, CD8, CD20, CD138, Ki-67 проводят расчеты, указывая их в лабораторном бланке. В таком виде результат отправляют лечащему врачу для расшифровки и назначения методов терапии.

Расшифровка анализа

Референсные значения:

• CD138 – отсутствует;
• CD20 – <3 в п/зр.;
• CD4 и CD8 – <10 в п/зр.;
• Ki-67 – не определяется.

В зависимости от увеличения данных показателей врач-морфолог составляет заключение о степени выраженности патологического процесса во внутреннем слое матки:

• о слабо выраженных изменениях (неактивной фазе эндометрита) свидетельствуют двукратное увеличение параметров;
• умеренный диффузный эндометрит высокой степени активности характеризуется троекратным повышением значений;
• на выраженный хронический эндометрит умеренной степени активности указывает возрастание показателей в 4-5 раз.

Итоговые данные анализа интерпретируются лечащим врачом.