Иммуногистохимия: CD4, CD8, CD20 и CD138

Диагностика хронического эндометрита

Иммуногистохимическое исследование биоптата ткани внутреннего слоя полости матки проводится для диагностирования хронического эндометрита, определения степени его выраженности и пролиферативной активности.

Характеристики исследования:

• Тип биоматериала: Образец ткани (в парафиновом блоке).
• Синонимы (rus): Иммуногистохимическое исследование биоптата эндометрия.
• Синонимы (eng): Immunohistochemical analysis of endometrial biopsies.
• Метод исследования: иммуногистохимический метод.
• Сроки выполнения: 7 дней

Хроническим эндометритом называют воспаление мукозного слоя матки, которое провоцируют различные вирусы или патогенные микроорганизмы. В патологическом очаге происходят морфологические и функциональные изменения эндометрия.

Развитие этого процесса вызывают:

• инфекции органов малого таза, влагалища и цервикального канала;
• внутриматочная спираль;
• ранние интимные контакты;
• радиотерапия тазовых органов;
• хирургическое вмешательство в полость матки;
• злоупотреблением алкоголем и курение.

Практикующие специалисты относят воспалительные процессы, происходящие в органах малого таза, к аутоиммунной патологии. Для определения характера нарушений и выявления пациенток с патологическим ответом иммунной системы, который провоцирует воспаление эндометрия, назначается иммуногистохимическое исследование, которое проводят с использованием панели моноклональных антител:

• CD4 – моно-мерного трансмембранного гликопротеида надсемейства иммуноглобулинов;
• CD8 – трансмембранного белка, который служит ко-рецептором Т-лимфоцитов (супрессоров);
• СD20 – фосфо-протеида, антигена В-лимфоцитов (клеток гуморального иммунитета), ответственного за синтез антител;
• CD138 – мембранного протеина, являющегося кластером дифференцировки плазматических клеток.

Когда делают ИГХ?

Проведение иммуноморфологического анализа необходимо при:

• нарушении репродуктивной функции;
• наличии у пациентки клинических признаков хронического эндометрита;
• воспалительных процессах слизистых покровов маточной полости.

Как проводится анализ?

Иммуногистохимическое исследование представляет собой изучение морфологического состава биопсийных (операционных) материалов, меченных специфическими антителами. Воспаленная ткань экспрессирует патогены, после нанесении на нее антител, происходит иммунная реакция и формируется комплекс «антиген-антитело», который можно визуализировать с помощью особых меток.

Забор образца слизистой полости матки производят с 7 по 10 день цикла.

Важность исследования

Ткань эндометрия матки подвержена негативным реакциям со стороны внутренних параметров организма или посторонних факторов. Часто могут развиваться воспалительные процессы, механические повреждения. Если подобный процесс переходит в хроническую форму, возникает обильное повреждение. Часто оно может приводить к следующим осложнениям:

• спайки, которые приводят к сращению тканей, что может вызвать проблемы с зачатием и дальнейшим вынашиванием беременности;
• обильное разрастание ткани эндометрия;
• чрезмерное разрастание эпителиальных клеток, которые могут перейти в форму доброкачественной опухоли;
• перемещение инфекционного процесса от эндометрия матки к соседним тканям, в том числе может развиться серьезное осложнение в виде перитонита, которое быстро вызывает летальный исход;
• патологии репродуктивной функции – бесплодие, частые выкидыши, преждевременные роды, недостаточная функция плаценты;
• формирование препятствий, вследствие которых сперматозоиды не могут проходить по половым путям, из-за чего не происходит оплодотворение;
• переход инфекционных микроорганизмов в системный кровоток, что вызывает развитие сепсиса, угрожающего состоянию внутренних органов или жизни.

Если же своевременно провести иммуногистохимическое исследования для определения причин хронического эндометрита на основании скопления CD4, CD8, CD20, CD138, можно устранить первичные повреждающие факторы, нормализовать состояние матки. Это не только восстановит репродуктивную функцию, но также предотвратит дальнейшие деструктивные процессы в матке, восстановит функциональность ее тканей.

Для чего необходим анализ

Иммуногистохимическое исследование хронического эндометрита с расширенной панелью моноклональных антител к антигенам иммунных клеток в строме эндометрия проводят для получения следующей информации:

• дифференциальная диагностика хронического эндометрита и других патологий, которые могут протекать с идентичной симптоматикой;
• причина маточных кровотечений, которые происходят вне менструации;
• причина обильных маточных кровотечений при менструальном цикле, которые могут приводить к анемии;
• первичные повреждающие факторы, провоцирующие бесплодие, выкидыши на ранних сроках, преждевременные роды на поздних этапах эмбрионального развития;
• точное разграничение лимфопролиферативных патологий и поражения матки;
• оценка потребности в проведении специфических методов терапии, которые будут воздействовать на повреждающий фактор патогенетически;
• эффективность проведенных методов терапии.

Важно помнить, что для сбора биоматериала требуется инвазивная процедура, при которой изымают небольшой кусочек ткани. Она может вызвать негативные реакции для состояния половой сферы и организма. Поэтому методику используют в крайних случаях, когда невозможно установить диагноз посредством других методов диагностики или врач подозревает тяжелую патологию, которую необходимо выявить до осложнений.

Особенности анализа

Для иммуногистохимического исследования образца ткани из области эндометрия матки характерны следующие особенности:

• биоматериалом для диагностики является небольшой кусочек ткани, который берут из очага поражения в области эндометрия матки;
• врач берет кусочки тканей из разных очагов, чтобы просмотреть большое количество клеток;
• клетки в тканях претерпевают трансформации, поэтому до изготовления микропрепаратов их фиксируют парафином;
• ткани содержатся в парафине до момента изготовления микропрепаратов, после чего его удаляют (это временная мера);
• в ходе подготовки микропрепаратов производят не только окрашивание, но и добавление специфического реагента, чтобы выявить антитела, которые требуется идентифицировать для установки точного диагноза хронического эндометрита;
• в отличие от других видов микроскопии, в данном исследовании невозможно сохранить образцы окрашенных тканей надолго, поэтому в процессе исследования цитолог делает снимки выявленных очагов поражения, чтобы врач смог оценить их и сравнить с новыми анализами;
• иммуногистохимическое исследование может проходить вплоть до 1 недели, так как на подготовку биоматериала и его исследование требуется продолжительное время.

Важно помнить, что для выполнения анализа подбирают день менструального цикла. Если необходимо оценить состояние эндометрия, подбирают фазу пролиферации с 5 по 14 день.

Изготовление микропрепаратов

Изъятые ткани обрабатывают парафином, в таком виде доставляют в лабораторию. Их подвергают следующим трансформациям, чтобы создать микропрепараты:

• удаление парафина, так как при его сохранении невозможно использовать дальнейшие компоненты для создания микропрепаратов;
• нарезание цельной ткани тонкими слоями, чтобы просмотреть клетки на микроскопическом уровне;
• расположение каждого среза на отдельном лабораторном стекле, которое было обработано в автоклаве для удаления посторонних компонентов;
• нанесение реагента, в котором содержатся иммунные клетки, входящие во взаимосвязь с антителами, сосредоточенными в толще эндометрия матки (это приводит к образованию иммунных комплексов антиген-антитело, которые содержат на своей поверхности флуоресцентную метку, светящуюся под микроскопом);
• окрашивание микропрепаратов красителем, который выдерживают на поверхности до 30 минут, затем смывают водой;
• перемещение изготовленного микропрепарата в кабинет цитолога, где проходят следующие этапы диагностики.

Изготовление микропрепаратов занимается врач-лаборант. Самой диагностикой клеточного состава – цитолог.

Микроскопия

Готовые микропрепараты по очереди обследуют при помощи микроскопа. Причем это не обычный микроскоп, а флюоресцентное оборудование, которое способно приближать изображение на максимальном уровне, чтобы оценивать состав клеток, а выявлять иммунные комплексы. Для оценки микропрепарата используют следующую схему:

• расположение микропрепаратов на предметный столик флюоресцентного микроскопа с последующей фиксацией стекла, чтобы предупредить случайные сдвиги во время исследования;
• настройка окуляра, который первоначально воспринимает изображение на дальнем увеличении, чтобы врач мог отследить область расположения специфических иммунных комплексов с флюоресцентной меткой на поверхности (в случае их наличия);
• приближение изображения на максимальном уровне, чтобы в точности изучить клеточный состав нормальных тканей эндометрия, дефектных клеток, а также рассчитать точное количество иммунных комплексов.

Иммуногистохимическое исследование помогает отследить показатель антител в количественных значениях. Но их расчет производится не автоматически, а вручную. Цитолог определяет наличие или отсутствие иммунных комплексов, затем рассчитывает их визуально, учитывая каждое поле зрения микроскопа.

Как только микроскопия будет завершена, цитолог занесет все данные в лабораторный бланк. Только после этого его передают лечащему врачу или пациенту для последующей диагностики.

Расшифровка анализа

Заключение врача-морфолога содержит гистологический диагноз, основанный на степени выраженности реакции моноклональных антител:

• О слабо выраженном хроническом эндометрите в неактивной фазе свидетельствует увеличение показателей в 2 раза.
• Умеренный хронический диффузный эндометрит с высокой степенью активности указывает повышение уровня антител в 3 раза.
• Выраженный хронический эндометрит, имеющий умеренную степень активности, характеризуется увеличением титров в 4-5 раз.

Референсные значения:

• CD4 – до 10 в п/зр.;
• CD8 – до 10 в п/зр.;
• CD20 – до 3 в п/зр.;
• CD138 – отсутствует.

Результат иммуноморфологического анализа интерпретирует лечащий врач пациентки.