Иммуногистохимия: рецепторный статус эндометрия

Хронический эндометрит и диагностика рецепторов

Расширенная иммуногистохимическая диагностика рецепторного статуса эндометрия позволяет оценить функциональную активность маркеров хронического эндометрита (PR, ER, CD56, CD138 и LIF) и проводится для выбора правильного лечения.

Характеристики исследования:

• Тип биоматериала: Образец ткани (в парафиновом блоке).
• Синонимы (rus): ИГХ рецепторного статуса эндометрия, иммуногистохимическое исследование определения рецептивности эндометрия "окна имплантации" (количество ER, PGR, СD56, CD138, LIF); расширенное (фаза секреции (ER/PR/CD138/CD56/LIF).
• Синонимы (eng): immunohistochemical test of endometrial receptivity (advanced).
• Сроки выполнения: 7 дней

Хронический эндометрит представляет собой клинико-морфологический синдром, который проявляется структурными и функциональными изменениями слизистых покровов маточной полости в результате повреждения клеток мукозного слоя инфекционным агентом вследствие:

• инфекционно-воспалительного процесса в тазовых органах;
• бактериального вагиноза;
• инвазивных вмешательств и лучевой терапии в области органов малого таза;
• раннего начала половой жизни;
• вредных привычек – употребления алкоголя и курения.

Данные патологические факторы провоцируют развитие защитной воспалительной реакции в интерстициальной ткани, которая проявляется активацией клеточных медиаторов и приводит к фиброзным изменениям эпителиальной ткани, ее инфильтрации макрофагами, лимфоцитами и плазматическими клетками.

Для чего проводят ИГХ исследование?

Патологоанатомическое исследование считается «золотым стандартом» диагностики хронического эндометрита, который позволяет выявить пациенток с аутоиммунным процессом в мукозном слое и определить тактику их ведения. 

В ходе анализа оценивают состояние рецепторов:

• основных женских половых гормонов, которые присутствуют в полости матки – прогестерона (PR) и эстрогена (ER), под их влиянием формируется комплекс, стимулирующий появление атипичных клеток;
• CD56 – прототипного маркера естественных киллерных клеток, присутствующих на поверхности мышечного и эпителиального слоя и участвующих в процессах внутриклеточной гибели возбудителей инфекционно-воспалительных процессов;
• CD138 – маркера плазмоцитов, продуцирующих в человеческом организме специфические антитела;
• LIF – лейкемия-ингибирующего фактора, который производят Т-лимфоциты для стимуляции синтеза белков острой фазы.

Когда проводят ИГХ исследование?

Иммуногистохимический анализ маркеров хронического эндометрита проводится при:

• нарушении репродуктивной функции;
• воспалении слизистых покровов полости матки;
• оценивании эффективности лечения хронического эндометрита.

Иммуногистохимическое исследование

Данный вид лабораторной диагностики представляет собой изучение морфологического состава биопсийных (операционных) материалов, меченных специфическими антителами. Воспаленная ткань экспрессирует патогены, после нанесении на нее антител, происходит иммунная реакция и формируется комплекс «антиген-антитело», который можно визуализировать с помощью особых меток.

Патоморфолог определяет:

• количество окрашенных маркером клеток и место их локализации в ткани;
• ферменты;
• клеточные компоненты;
• иммуноглобулины;
• гормоны и их рецепторы;
• отдельные гены.

Важность исследования

Для оценки рецепторного статуса эндометрия с маркерами хронического эндометрита проводят иммуногистохимическое исследование. Методику применяют только в случае, если уже выявлен первичный патологический процесс. Но при помощи дополнительного исследования можно оценить степень экспрессии специфических рецепторов, вследствие которых происходит постепенное увеличение очага поражения, повышается риск развития атипичных клеток и последующее прогрессирование злокачественного новообразования.

Если патология уже выявлена, но врач проводит лечение без иммуногистохимического исследования, возможно развитие следующих отклонений:

• постепенное прогрессирование эндометрита, который может проявляться не только в воспалительном процессе, но и развитии атипичных клеток;
• переход воспаления к доброкачественной пролиферации тканей, которая тоже приводит к опасности для структуры матки, так как по мере прогрессирования новообразования постепенно сдавливаются нормальные структуры;
• спаечный процесс, который приводит к нарушению растяжимости органа, что опасно во время беременности;
• нарушение менструального цикла;
• привычное невынашивание беременности, когда женщина может потерять от 2 и более плодов;
• патологии беременности – плацентарная недостаточность, отслойка плаценты, прерывание беременности, осложнения в послеродовой период.

Важно помнить, что методику проводят после установленного диагноза, так как для ее выполнения требуется изъятие фрагментов ткани. Диагностику можно осуществлять как в процессе лечения, так и после полного завершения всех методик, чтобы судить об эффективности и по возможности использовать дополнительные тактики.

Для чего необходим анализ

Иммуногистохимическую диагностику рецепторного статуса эндометрия с маркерами хронического эндометрита выполняют для получения информации:

• степень влияния аутоиммунного процесса на ткани, отслеживание распространения воспалительного процесса;
• причина бесплодия или постоянного невынашивания беременности, несостоявшихся попыток ЭКО;
• выявление первичных повреждающих факторов, которые спровоцировали активный воспалительный процесс, вызвав обильное поражение эндометрия;
• степень поражения эндометрия, так как под микроскопом можно рассмотреть нормальные и патологически измененные клетки одновременно;
• влияние хронического инфекционно-воспалительного процесса на фоне вторжения различных микроорганизмов в ткани;
• отслеживание нормальной или патологической экспрессии маркеров, так как они могут встречаться и при отсутствии патологии, поэтому необходимо отследить показатели в процентном соотношении;
• отслеживание эффективности лечения в динамике, чтобы появилась возможность своевременно корректировать методы терапии, определять прогрессию или регрессию эндометрита.

Для методики необходимо взять кусочек ткани с поверхности патологического очага. Поэтому исследование назначают при уже выявленном заболевании, чтобы отследить его параметры.

Особенности анализа

При выборе иммуногистохимической диагностики рецепторного статуса эндометрия с маркерами хронического эндометрита учитывают важные особенности:

• методику проводят лишь в крайних случаях, когда патология постепенно прогрессирует, несмотря на своевременно назначенные методы терапии, так как для сбора биоматериала требуется изъять небольшие кусочки тканей;
• сохранить полную структуру ткани, предупредить гибель клеток можно при помощи предварительной обработки тканей парафином;
• парафин на поверхности тканей сохраняют до момента создания микропрепаратов, затем его удаляют;
• в первоначальном виде ткани обследовать невозможно, выполняют их обработку в виде фиксации и окрашивания клеток, до добавления специальных реагентов для создания иммунных комплексов (именно их отслеживают в микроскопе для определения маркеров);
• саму диагностику проводят при помощи современного микроскопа, через который одновременно определяют иммунные комплексы, структуру клеток, а также фиксируют изображение в виде фото или видео;
• благодаря фотофиксации увиденные данные может диагностировать не только цитолог, но и другой врач, например, гинеколог, онколог, инфекционист;
• через иммуногистохимическое исследование не определяют дифференциальный диагноз, а отслеживают уже выявленную патологию в динамике, оценивают причины ее развития;
• при идентификации результатов оценивают одновременно структуру нормальных клеток, степень экспрессии патологических маркеров, распространение патологических элементов.

Важно помнить, что в процессе исследования врач определяет не только уровень иммунных комплексов, но также многие другие компоненты. Среди них выделяют гены, ферменты, клетки. Так можно составить полную картину участка эндометрита, составить правильный диагноз и методы терапии.

Создание микропрепаратов

Для создания микропрепарата для проведения иммуногистохимического исследования придерживаются следующих этапов:

• удаление парафина с последующим созданием тонких срезов из цельной ткани;
• нанесение всех срезов по отдельным предметным стеклам, которые предварительно были простерилизованы;
• возвращение нормальной структуры клеток при помощи реагента на основе ферментов, которые наносят на поверхность среза ткани;
• применение реагента, который вызывает образование комплексов антиген-антитело, для упрощения их детекции дополнительно вводят раствор с системой детекции, так появляется метка на поверхности;
• увеличение температуры биологической жидкости, чтобы иммунные комплексы с меткой появились быстрее;
• окрашивание ткани гематоксилином, чтобы врач рассмотрел клеточные структуры и посторонние элементы;
• повторное удаление жидкости из ткани с нанесением покровочного стекла.

После подготовки можно тщательно исследовать все участки препарата, оценив одновременно нормальные и патологические элементы, а также компоненты, которые не должны встречаться в исследуемой ткани эндометрия.

Микроскопия

Как только микропрепарат подготовлен, начинают исследование через микроскопию. Для этого применяют современный и новейший микроскоп с многократным увеличением. Первоначально рассматривают ткани на дальнем увеличении, чтобы оценить их общую структуру. Определяют патологические очаги, где находятся скопления дефектных клеток и посторонних элементов. Эту зону оценивают тщательно через максимальное приближение микроскопа. Выявляют наличие или отсутствие искомых маркеров благодаря содержанию специфических иммунных комплексов с меткой на поверхности.

Важно помнить, что белки PR, ER, CD56, CD138 могут присутствовать в норме, но их число должно содержаться в референсных значениях. Выход за эти пределы свидетельствует о развитии воспалительного процесса слабой, умеренной и сильной выраженности. Детекцию осуществляют в отношении всех маркеров теста, после чего врач-патоморфолог записывает увиденные данные в лабораторный бланк.

Расшифровка анализа

Результаты иммуногистохимического исследования содержит описание использованных красящих средств и морфологической структуры микропрепарата. Заключение врача-патологоанатома интерпретирует квалифицированный специалист, направивший пациентку на анализ.