Комплексное исследование мутаций в генах JAK2, CALR, MPL

Парсункова Кермен Анатольевна
Автор статьи

Парсункова Кермен Анатольевна

Заведующая лабораторией Оптимум, Кандидат медицинских наук,
Цена 11990 *
Срок исполнения до 10 дн. (рабочие дни)
Код услуги HE22
* - Взятие биоматериала оплачивается отдельно

ПЦР анализ мутаций в генах JAK2, CALR, MPL

Комплексное исследование мутаций в генах JAK2, CALR, MPL требуется для определения риска развития миелопролиферативных заболеваний крови, которые развиваются вследствие нарушения эритропоэза.

Такой дефект не развивается в процессе жизнедеятельности, он спровоцирован генетическим фактором. Поэтому его можно легко выявить при помощи полимеразной цепной реакции, для этого достаточно сдать образец венозной крови. Назначение на анализ получают у гематолога, генетика, онколога, репродуктолога или иного специалиста, который заподозрил отклонения.

Тип биоматериала: венозная кровь

Синонимы (rus): выявление мутаций в 12 экзогена янус-киназы

Синонимы (eng): exon 12 JAK2, CALR, MPL

Метод: ПЦР

Для чего необходим анализ

Комплексное исследование мутаций в генах JAK2, CALR, MPLКомплексное исследование мутаций в генах JAK2, CALR, MPL используют для получения следующей информации:

  • дифференциальная диагностика между миелопролиферативными заболеваниями и другими патологиями, которые вызывают схожую симптоматику;
  • потребность в назначении цитостатиков, это тяжелые препараты, которые должны использоваться только по строгим показаниям и в ограниченной дозировке (поэтому без предварительного подтверждения диагноза начинать такую терапию недопустимо);
  • оценка эффективности проведенного лечения, в данном случае анализ рекомендовано проводить через некоторое время после завершения приема всех препаратов для курса химиотерапии;
  • оценка эффективности однократно проведенного курса химиотерапии (анализ рекомендуется повторять после выполнения каждого курса);
  • отслеживание пациентов в стадии ремиссии, чтобы своевременно выявлять риск рецидива и назначать методы терапии до появления явной клинической симптоматики или развития осложнений от опухолевого процесса.

Данное исследование является основополагающим для постановки диагноза и отслеживания эффекта от лечения. Если причина определена, затем проведено лечение, но повторные анализы показали положительный результат, требуется продолжение приема цитостатиков за счет наличия остатков опухолевого клона клеток.

Когда назначают анализ

Выделяют следующие показания, при которых рекомендуется назначать данное исследование:

  • первичная диагностика миелопролиферативного синдрома в случае, если в других анализах крови выявлены отклонения (чаще всего на это указывает уменьшение уровня эритроцитов, увеличение тромбоцитов, продукция повышенного количества юных клеток);
  • оценка эффективности проводимой химиотерапии цитостатиками;
  • наличие стадии ремиссии при миелопролиферативном заболевании, чтобы своевременно выявлять риск рецидива.

Обычно диагностику проводят в лечебных целях, то есть для подтверждения диагноза, отслеживания эффекта терапии и оценки стадии ремиссии. Но также его могут использовать в целях профилактики. Например, при планировании или появлении ребенка в семье, где один из родителей страдает миелопролиферативным синдромом.

Подготовка к анализу

Забор крови из веныПеред проведением лабораторного исследования выполняют предварительную подготовку, чтобы повысить достоверность, исключить риск ложных данных:

  • запрещено начинать химиотерапевтическое лечение до подтверждения результатов;
  • исключены любые препараты, которые могут повлиять на результат (о запрещенных видах лекарств предупреждает лечащий врач при назначении исследования); 
  • запрещено проводить инструментальные исследования с облучением за 7-10 дней, так как они могут повлиять на клеточный состав крови (флюорография, рентгенография, компьютерная или магнитно-резонансная томография);
  • запрещено употреблять алкогольные напитки за 1-2 дня;
  • недопустимо курить за 1 час до сдачи венозной крови.

Все правила устраняются при сдаче венозной крови. Лечение допустимо начинать только после расшифровки полученных данных лечащим врачом, чаще всего это онколог или гематолог. Только он сможет сопоставить данные, симптоматику, назначить правильные методы терапии.

Методика проведения анализа

Для секвенирования патологически измененных генов используют полимеразную цепную реакцию. Это сложное и многоступенчатое исследование, которое начинают сразу после получения крови.

  1. Подготовка образца крови. В норме вне сосудов кровь быстро сворачивается, образуя тромбоцитарные сгустки. Для предотвращения подобного процесса в пробирку добавляют антикоагулянт. В таком виде биологическая жидкость может находиться продолжительно, поэтому лаборанту легче производить анализ.
  2. Смешивание крови с реагентами. Из полного образца крови берут лишь 1 мл, размещая в отдельную пробирку. Подмешивают праймер, чтобы определить начало и конец участка ДНК, подлежащего секвенированию. Для начала формирования реакции используют ДНК-полимеразу. В ходе такой реакции цепь ДНК раскручивается, туда встраиваются нуклеотиды. Именно эти нуклеотиды стимулируют завершение реакции после полной раскрутки цепей.
  3. Внесение реагентов в полиакриламидный гель. Кровь вместе с добавленными реагентами переносят на поверхность геля. Это стимулирует начало реакции, направленной на раскрутку и определение участка ДНК, подлежащего исследованию.
  4. Диагностика на анализаторе. Используют аппарат для ПЦР, в отделение которого размещают полученный биоматериал. Запускают оборудование, считывающее расположение нуклеотидов в цепях ДНК. Эти данные регистрируются, затем выстраиваются в виде графиков. На них будут выделены пики разных цветов, эти сведения должен расшифровать лечащий врач. Для упрощения диагностики в конце исследования выдают лабораторные бланки, где указывают наименование выявленных генов.

Несмотря на сложность проведения теста, данные получаются максимально информативными. Через диагностику с точностью определяют наличие или отсутствие генов JAK2, CALR, MPL. Так можно с точностью подтвердить риск развития миелопролиферативных заболеваний, составить правильный прогноз и приступить к лечению.

Расшифровка анализа

Методика проведения анализаЕсли выявлены положительные данные, это свидетельствует о риске развития миелопролиферативного заболевания. Но для полноценной диагностики и оценки состояния кровеносной системы требуется провести дополнительные лабораторные тесты. Если данные по ПЦР анализу и другим исследованиям специфичны для миелопролиферативных заболеваний, назначают химиотерапию цитостатиками.

Повторный анализ назначают после завершения первичного курса химиотерапии. Если данные крови восстановлены до пределов нормы, лечение прекращают. В ином случае у пациента наблюдается дальнейшее прогрессирование опухолевого клона клеток. Тогда назначают еще один курс химиотерапии.

Также анализ рекомендуется проводить в процессе ремиссии. Если она продолжается, данные анализа отрицательные. При положительных результатах можно говорить о рецидиве.

Миелопролиферативные заболевания

Миелопролиферативные заболевания – это группа патологий, которые образуются вследствие генетических мутаций, вызывающих нарушение работы красного костного мозга. В итоге происходит дефектный эритропоэз, то есть образование эритроцитов. В кровь поступают не зрелые, а юные клетки. Подобный злокачественный процесс делится на следующие виды:

  • истинная полицитемия – поражение миелоидного ростка кроветворения, что провоцирует злокачественный процесс;
  • эссенциальная тромбоцитемия – отклонение в продукции гемопоэтических стволовых клеток, вызывающее увеличение уровня тромбоцитов;
  • первичный миелофиброз – отложение соединительнотканных волокон в красном костном мозге, что сопровождается увеличением параметров селезенки, анемией, а также выделением видоизмененных и патологических эритроцитов.

Поломки в генетическом аппарате вызывают нарушение регуляции кроветворения. Происходит обильное выделение клеток красного костного мозга, которые чаще всего являются патологически измененными. Например, в кровоток поступают не зрелые, а юные клетки, что и является симптомами злокачественного процесса.

Подобные отклонения могут встречаться при мутации большого количества генов, но чаще всего поломки случаются в зонах JAK2, CALR, MPL. Эти участки кодируют информацию по структуре и функциям костного мозга, поэтому негативная симптоматика развивается в этой области.