Выявление и типирование возбудителей грибковых инфекций

Комплексное лабораторное исследование «МИКОЗОСКРИН», позволяющее выявить и идентифицировать представителей семейства дрожжевых грибов (Candida, Saccharomyces, Debaryomyces, Malassezia), проводится для диагностирования и клинического разграничения грибковых инфекций.

Инфекционные заболевания, вызванные дрожжевыми грибками, характеризуются широким спектром клинической симптоматики – от поражения кожи и слизистых покровов мочеполовых, пищеварительных и дыхательных органов до инвазивного микоза и поли-органных патологий, которые могут привести к летальному исходу. Дрожжевые грибы относятся к условно-патогенным микроорганизмам – инфекционно-воспалительные процессы они вызывают лишь при определенных обстоятельствах:

снижении иммунной защиты;
длительном переохлаждении организма;
заражении вирусами;
токсическом поражении;
обострении хронических заболеваний;
негативном влиянии внешней среды.

Основными представителями семейства дрожжевых грибов являются роды:

Candida – их насчитывают больше сотни видов, для человеческого организма опасность представляют albicans, ropicalis, krusei, lusitaniae, kefyr, glabrata, guilliermondii, parapsilosis, famata, auris. Многие из них обладают устойчивостью к воздействию анти-микозных препаратов и являются причиной фугенемии.
Saccharomyces – у здорового человека их можно обнаружить в небольшом количестве на слизистых покровах влагалища и полости рта, в каловых массах и мокроте.
Debaryomyces – наиболее известным является hansenii, который препятствует заживлению поврежденных слизистых покровов кишечника. Их наличие выявляется у пациентов с болезнью Крона – это делает его перспективной мишенью для терапевтических мероприятий.
Malassezia – эти микроорганизмы считаются трудно-культивируемыми, обладающими способностью к образованию новых видов, что приводит к затруднению диагностирования ассоциированных с ними заболеваний. Они являются причиной псориаза, атопического дерматита, нейродермита, микробной экземы.

Патологические процессы, развитие которых провоцируют дрожжевые грибы, практикующие специалисты разделяют на:

поверхностные – микозы кожных покровов и их придатков (волос и ногтевых пластин), слизистых оболочек, поверхностных слоев эпителия, к ним относятся воспалительное заболевание тазовых органов, вульво-вагинальный и оро-фарингеальный кандидоз, послеродовый сальпингит и эндометрит, инфицирование плода;
инвазивные – при которых патогенов выделяют из биологических жидкостей, которые должны быть стерильны, группу риска составляют недоношенные новорожденные младенцы, пациенты с онко-патологиями, реципиенты стволовых клеток.

Своевременная постановка грамотного диагноза и выбор рациональной тактики лечения основаны на корректной видовой идентификации и количественном определении грибов. «Золотой стандарт» - бактериологический посев не предоставляет такой возможности, на сегодняшний день одним из наиболее эффективных методов, которые используют для решения этой задачи, считается молекулярно-биологическое исследование, выполненное с помощью полимеразной цепной реакции.

Показания для проведения анализа

Тактика терапевтических мероприятий зависит от видовой принадлежности и количества возбудителя микоза, именно поэтому важной задачей для постановки диагноза является дифференциальное определение дрожжевых грибов. «МИКОЗОСКРИН» назначается при:

подозрение на микоз – наличии на кожных и слизистых покровах пациента мелких, зудящих, шелушащихся пузырьков, которые самостоятельно лопаются и подсыхают;
колонизации дрожжевыми грибами раневых поверхностей, катетеров, эндо-трахеальных трубок и прочих инвазивных устройств;
инфекционном контроле состояния пациентов, входящих в группу риска;
длительном применении антибактериальных препаратов широкого спектра действия, антацидов (фармакологических средств, уменьшающих агрессивность желудочного содержимого), Н2-блокаторов (лекарственных препаратов, блокирующих гистаминовые рецепторы);
перфорации желудочно-кишечного тракта;
некротизирующем энтероколите новорожденных (тяжелой патологии кишечника, которая возникает после перенесенной острой гипоксии и нарушения состава микрофлоры, приводящего к прободению кишечной стенки, перитониту и некрозу);
перитонеальном диализе (форме заместительной почечной терапии, при которой очищение крови происходит в брюшной полости с помощью внутрибрюшинного доступа);
полном парентеральном питании;
оперативных вмешательствах на брюшных органах.

Как подготовиться к анализу

Исследование проводят до начала противогрибковой терапии. Биологическим материалом может служить венозная кровь, моча, мазок из верхнего отдела дыхательного тракта, мокрота, биоптат, каловые массы, соскоб из мочеполовых путей. Решение об исследовании того либо иного участка принимает лечащий врач, принимая во внимание совокупность клинической картины и предъявляемых пациентом жалоб.

ПЦР относится к прямым методам лабораторного лабораторной диагностики, для получения корректных итоговых данных которого важное значение имеет качество отбора пробы, ее хранение, транспортировка и предварительная подготовка к тестированию. Чтобы избежать получение некорректных результатов были разработаны инструктивно-методические рекомендации, которые регламентируют выполнение следующих требований:

Взятие образца венозной крови проводят в вакуумные пластиковые пробирки типа Vacuette с ЭДТА (антикоагулянтом).
Мокроту собирают в одноразовые стерильные флаконы с завинчивающимися крышками в количестве не меньше 1 мл.
Для анализа требуется 20-30 мл утренней мочи, собранной после ночной задержки. Ее сбор осуществляют в стерильную емкость.
Забор мазков и соскобов производят одноразовыми специальными инструментами – цито-щеточками, зондами или тампонами. Отобранный биоматериал переносят на транспортную среду.
Каловые массы собирают одноразовыми лопаточками и переносят с стерильный контейнер.
Биоптаты тканей помещают в пластиковую пробирку с транспортной средой.
Образцы жидких и плотных сред отбирают с помощью одноразового шпателя или микробиологической петли.

Методика проведения анализа

Для выполнения мультиплексного исследования используют полимеразную цепную реакцию с детекцией итоговых данных в режиме реального времени. В основе метода лежит использование процесса создания множества копий фрагментов ДНК (дезоксирибонуклеиновой кислоты) – серии циклов денатурации ее молекул. Для повышения специфичности и чувствительности теста применяется стандартный набор реагентов, необходимых для создания «горячего» старта реакции – это необходимо для контроля качества выделения генетического материала. Учет и интерпретация итоговых данных реакции осуществляется автоматически. По сравнении с классическим микробиологическим методом, выполнение которого занимает более 2-х суток, данный способ является наиболее быстрым и требует меньшей порции биологического материала.

Интерпретация анализа

Заключение исследования может содержать следующие результаты:

«Обнаружено» - в анализируемом образце найдены фрагменты генетического материала, которые является специфичными для того или иного вида дрожжевого грибка;
«Не обнаружено» - проба биоматериала не содержит генома искомых патогенов либо его количество не достигает показателя КВМ (контроля взятия материала, значение которого должно быть не менее 3,0 Lg).

Преимуществами «МИКОЗОСКРИНА» считаются возможность обследования пациентов различных клинических групп, комплексное выявление широкого спектра возбудителей микозов, тестирование расширенного перечня биологического материала, позволяющего решить различные клинические задачи во многих отраслях медицинской сферы (иммунологии, педиатрии, неонатологии, урологии, гинекологии и пр.), точность итоговых данных исследования (с помощью молекулярно-генетической технологии можно идентифицировать трудно культивируемые дрожжевые грибы), корректность диагностики, обусловленная высокой аналитической чувствительностью метода.