Мазок на флору, окраска по Граму

Микроскопический анализ мазка на флору

Микроскопическое исследование отделяемого женских половых органов на аэробные и факультативно-анаэробные микроорганизмы «мазок на флору», при выполнении которого используют метод окраски по Граму, проводится для диагностирования бактериального вагиноза и специфических инфекционных процессов, передающихся при интимной близости – гонореи, трихомоноза, кандидоза.

Когда делают анализ?

Микрофлору органов половой системы здоровой женщины составляют около сорока видов микроорганизмов. 95% из них приходится на лакто-бактерии, которые подавляют размножение болезнетворных микробов, остальная часть флоры представлена небольшим количеством:

• факультативных анаэробов – бактероидов, энтеро-, микро- и пепто-кокков, клостридий, вейлонелл, превотелл, фузо-, эу- и кампило-бактерий;
• условно-патогенных микроорганизмов (аэробов) – стафилококков, корине-бактерий, кишечной палочки.
• Уменьшение количества лактобацилл провоцирует активный рост представителей условно-патогенной флоры и развитие дисбиоза, который способствует возникновению воспалительного процесса в матке и ее придатках, бесплодия, эктопической беременности, преждевременного родоразрешения.

Проведение микроскопического исследования отделяемого половых путей женщины необходимо при:

• профилактических обследованиях – для оценивания состава микрофлоры;
• наличии у пациентки клинических признаков дисбиоза влагалища и инфекционно-воспалительных заболеваний мочеполовых органов.

Правила подготовки к анализу

Информативность итоговых данных исследования зависит от уровня подготовки к сдаче биологического материала.

Пациентке следует выполнить следующие требования:

1. Не проходить обследование в период менструального кровотечения.
2. В течение 3-х суток воздержаться от интимной близости.
3. Накануне процедуры взятия мазка исключить спринцевание и использование вагинальных антибактериальных средств.
4. В день исследования отказаться от туалета интимной зоны – все гигиенические процедуры выполняют вечером.
5. За 2 часа до взятия биоматериала не опорожнять мочевой пузырь.

Как берется мазок

Взятие отделяемого половых органов осуществляется в условиях клинико-диагностического центра квалифицированным специалистом. Женщину укладывают на гинекологическое кресло, пользуясь стерильным зеркалом, врач раскрывает влагалище и обнажает шейку матки. С помощью специальной одноразовой палочки или шпателя из заднего свода влагалища, уретрального и цервикального каналов отбирает отделяемый слизистый секрет, который наносят на предметные стекла. Полученные образцы высушивают на открытом воздухе, маркируют и доставляют в лабораторию.

Суть исследования мазка по Граму

Для идентификации микроорганизмов в лабораторных условиях изъятые пробы биоматериала подвергаются окрашиванию по методике, предложенной датским врачом Г. Грамом. Окрашенные препараты промывают спиртом, высушивают и изучают под микроскопом.

Дифференциальную методику, предложенную Гансом Кристианом Грамом еще в конце 19-го столетия, широко используют и в настоящее время для определения биоценоза половых путей женщины и выявления ключевых клеток – слущенных частиц эпителиального слоя, покрытых патогенными бактериями. Принцип данного диагностического способа заключается в приготовлении из отобранного биологического материала мазков и их окрашивании веществами трифенилметанового ряда – становясь нежизнеспособными, бактерии принимают разные оттенки:

• грамположительные, имеющие толстую клеточную стенку – фиолетовый;
• грамотрицательные – розовый. 

Это явление позволяет специалисту достоверно определить преобладающую в мазке микрофлору. 

Большая часть слизистых покровов урогенитального тракта женщины репродуктивного возраста населена палочками Дедерлейна (лакто-бациллами), обеспечивающими производство пероксида и лактата – органических соединений, которые необходимы для обеспечения кислотности внутренней среды и подавления размножения болезнетворных микроорганизмов. Снижение их численности приводит к нарушению баланса микробиоты и росту условно-патогенной флоры, присутствующей во влагалище в умеренном количестве. В случае дисбиоза резкое снижение общей либо местной иммунной защиты, пренебрежение гигиеническими требованиями, нарушение метаболизма и гормонального фона, переохлаждение организма либо бесконтрольное применение антибактериальных препаратов могут спровоцировать развитие инфекционно-воспалительных процессов, осложнениями которых являются заболевания матки и яичников, эктопическая беременность, бесплодие, преждевременное родо-разрешение.

Исследование мазка по методике Грама, которая считается «золотым стандартом» диагностики дисбактериоза влагалища (100% достоверности), помогает врачу в:

1. Проведении полуколичественного оценивания общей микробной обсемененности.
2. Изучении состояния эпителиальных клеток.
3. Выявлении воспалительной реакции и установлении степени ее выраженности.
4. Определении состава микробиоты.
5. Обнаружении заболеваний, которые распространяются при интимных контактах. 

Техника окрашивания мазков

Методика исследования по Граму включает несколько этапов:

• нанесение на зафиксированный мазок 0,8 мл генцианвиолента и промывание под проточной водой спустя 60 секунд;
• нанесение на поверхность раствора Люголя на 30 с и промывание, когда препарат не приобретет темно-коричневый оттенок;
• обесцвечивание мазка смесью из этилового спирта 96% и ацетона, промывание под проточной водой через 15 с;
• нанесение на препарат 0,8 мл фуксина Пфейфера на 60 с и смывание излишков краски проточной водой;
• подсушивание препарата, нанесение на его поверхность иммерсионного масла и микроскопирование. 

Нормальные показатели мазка на флору

На слизистых покровах половых путей здоровой женщины должны присутствовать:

• клетки плоского эпителия – их отсутствие ассоциировано с атрофией эпителиального слоя, дефицитом либо избытком половых гормонов;
• лейкоциты – не более 10-12 в поле зрения, увеличение их числа наблюдается при воспалительной реакции;
• слизь;
• лакто-бактерии (до 95%);
• грамположительные кокки. 

Для оценивания итоговых данных исследования мазков, окрашенных по методу Грама, используют критерии Ньюджента – их основу составляет система баллов, подсчет которых позволяет диагностировать и определить степень бактериального вагиноза. С этой целью изучаются представители 3-х морфотипов (бактериальных морфологических видов) микробиома влагалища:

• «А» – лакто-бациллы (большие грамположительные палочки);
• «В» – бактероиды и гарднереллы (мелкие грамотрицательные кокки);
• «С» – мобилункусы (изогнутые грам-вариабельные палочки).

По количеству выявленных в мазке морфотипов начисляются баллы, которые затем суммируют («А» + «В» + «С») – результат:

• от 0 до 3-х баллов – свидетельствует о нормальном состоянии влагалищной флоры;
• от 4-х до 6-ти – промежуточной микрофлоре;
• от 7-и до 10-ти – бактериальном вагинозе.

Точность итоговых данных исследования мазка по Граму обеспечивается изучением сразу нескольких критериев – это снижает возможность получения ошибочных результатов.

Расшифровка анализа

Выделяют 4 вида микроскопической картины женских половых органов:

1. Нормоценоз – грамотрицательная микрофлора отсутствует, преобладают лакто-бациллы, наблюдаются единичные эпителиальные клетки и лейкоциты.
2. Промежуточный – количество лакто-бацилл снижено, обнаруживаются грамотрицательные палочки и грамположительные кокки.
3. Дисбиоз – молочнокислые бактерии практически отсутствуют, преобладает кокковая и палочковая флора, выявляются микоплазмы, гарднереллы, уреаплазмы.
4. Вагиноз – лакто-бактерии не обнаруживаются, может присутствовать большое количество эпителия, лейкоцитов, дрожжеподобных грибков, возбудителей мочеполовых инфекций.

На результат анализа могут оказать влияние антисептические, противозачаточные, антибактериальные и противогрибковые средства.

Микроскопическое исследование урогенитального мазка не позволяет определить восприимчивость микроорганизмов к лекарственным средствам (для этой цели необходимо провести бактериологический посев) и обнаружить наличие микоплазм, хламидий, уреаплазм, герпес- и папиллома-вирусов (для диагностики инфекционных заболеваний, возбудителями которых они являются выполняют иммуноферментный анализ крови либо молекулярно-биологическое исследование с помощью полимеразной цепной реакции).