Мазок на флору, окраска по Граму

Кучеренко Лариса Николаевна
Кучеренко Лариса Николаевна Заведующая общеклинического отдела КДЛ,

Микроскопический анализ мазка на флору


Микроскопический анализ мазка на флоруМикроскопическое исследование отделяемого женских половых органов на аэробные и факультативно-анаэробные микроорганизмы «мазок на флору», при выполнении которого используют метод окраски по Граму, проводится для диагностирования бактериального вагиноза и специфических инфекционных процессов, передающихся при интимной близости – гонореи, трихомоноза, кандидоза.

Когда делают анализ?


Микрофлору органов половой системы здоровой женщины составляют около сорока видов микроорганизмов. 95% из них приходится на лакто-бактерии, которые подавляют размножение болезнетворных микробов, остальная часть флоры представлена небольшим количеством:
  • факультативных анаэробов – бактероидов, энтеро-, микро- и пепто-кокков, клостридий, вейлонелл, превотелл, фузо-, эу- и кампило-бактерий;
  • условно-патогенных микроорганизмов (аэробов) – стафилококков, корине-бактерий, кишечной палочки.
  • Уменьшение количества лактобацилл провоцирует активный рост представителей условно-патогенной флоры и развитие дисбиоза, который способствует возникновению воспалительного процесса в матке и ее придатках, бесплодия, эктопической беременности, преждевременного родоразрешения.
Проведение микроскопического исследования отделяемого половых путей женщины необходимо при:
  • профилактических обследованиях – для оценивания состава микрофлоры;
  • наличии у пациентки клинических признаков дисбиоза влагалища и инфекционно-воспалительных заболеваний мочеполовых органов.

Правила подготовки к анализу


Когда делают анализИнформативность итоговых данных исследования зависит от уровня подготовки к сдаче биологического материала.

Пациентке следует выполнить следующие требования:
  1. Не проходить обследование в период менструального кровотечения.
  2. В течение 3-х суток воздержаться от интимной близости.
  3. Накануне процедуры взятия мазка исключить спринцевание и использование вагинальных антибактериальных средств.
  4. В день исследования отказаться от туалета интимной зоны – все гигиенические процедуры выполняют вечером.
  5. За 2 часа до взятия биоматериала не опорожнять мочевой пузырь.

Как берется мазок


Взятие отделяемого половых органов осуществляется в условиях клинико-диагностического центра квалифицированным специалистом. Женщину укладывают на гинекологическое кресло, пользуясь стерильным зеркалом, врач раскрывает влагалище и обнажает шейку матки. С помощью специальной одноразовой палочки или шпателя из заднего свода влагалища, уретрального и цервикального каналов отбирает отделяемый слизистый секрет, который наносят на предметные стекла. Полученные образцы высушивают на открытом воздухе, маркируют и доставляют в лабораторию.


Суть исследования мазка по Граму


Суть исследования мазка по ГрамуДля идентификации микроорганизмов в лабораторных условиях изъятые пробы биоматериала подвергаются окрашиванию по методике, предложенной датским врачом Г. Грамом. Окрашенные препараты промывают спиртом, высушивают и изучают под микроскопом.

Дифференциальную методику, предложенную Гансом Кристианом Грамом еще в конце 19-го столетия, широко используют и в настоящее время для определения биоценоза половых путей женщины и выявления ключевых клеток – слущенных частиц эпителиального слоя, покрытых патогенными бактериями. Принцип данного диагностического способа заключается в приготовлении из отобранного биологического материала мазков и их окрашивании веществами трифенилметанового ряда – становясь нежизнеспособными, бактерии принимают разные оттенки:

  • грамположительные, имеющие толстую клеточную стенку – фиолетовый;
  • грамотрицательные – розовый. 

Это явление позволяет специалисту достоверно определить преобладающую в мазке микрофлору. 

Большая часть слизистых покровов урогенитального тракта женщины репродуктивного возраста населена палочками Дедерлейна (лакто-бациллами), обеспечивающими производство пероксида и лактата – органических соединений, которые необходимы для обеспечения кислотности внутренней среды и подавления размножения болезнетворных микроорганизмов. Снижение их численности приводит к нарушению баланса микробиоты и росту условно-патогенной флоры, присутствующей во влагалище в умеренном количестве. В случае дисбиоза резкое снижение общей либо местной иммунной защиты, пренебрежение гигиеническими требованиями, нарушение метаболизма и гормонального фона, переохлаждение организма либо бесконтрольное применение антибактериальных препаратов могут спровоцировать развитие инфекционно-воспалительных процессов, осложнениями которых являются заболевания матки и яичников, эктопическая беременность, бесплодие, преждевременное родо-разрешение.     

Исследование мазка по методике ГрамаИсследование мазка по методике Грама, которая считается «золотым стандартом» диагностики дисбактериоза влагалища (100% достоверности), помогает врачу в:

  1. Проведении полуколичественного оценивания общей микробной обсемененности.
  2. Изучении состояния эпителиальных клеток.
  3. Выявлении воспалительной реакции и установлении степени ее выраженности.
  4. Определении состава микробиоты.
  5. Обнаружении заболеваний, которые распространяются при интимных контактах. 

Техника окрашивания мазков

Методика исследования по Граму включает несколько этапов:

  • нанесение на зафиксированный мазок 0,8 мл генцианвиолента и промывание под проточной водой спустя 60 секунд;
  • нанесение на поверхность раствора Люголя на 30 с и промывание, когда препарат не приобретет темно-коричневый оттенок;
  • обесцвечивание мазка смесью из этилового спирта 96% и ацетона, промывание под проточной водой через 15 с;
  • нанесение на препарат 0,8 мл фуксина Пфейфера на 60 с и смывание излишков краски проточной водой;
  • подсушивание препарата, нанесение на его поверхность иммерсионного масла и микроскопирование. 
 

Нормальные показатели мазка на флору

На слизистых покровах половых путей здоровой женщины должны присутствовать:

  • Нормальные показатели мазка на флоруклетки плоского эпителия – их отсутствие ассоциировано с атрофией эпителиального слоя, дефицитом либо избытком половых гормонов;
  • лейкоциты – не более 10-12 в поле зрения, увеличение их числа наблюдается при воспалительной реакции;
  • слизь;
  • лакто-бактерии (до 95%);
  • грамположительные кокки. 

Для оценивания итоговых данных исследования мазков, окрашенных по методу Грама, используют критерии Ньюджента – их основу составляет система баллов, подсчет которых позволяет диагностировать и определить степень бактериального вагиноза. С этой целью изучаются представители 3-х морфотипов (бактериальных морфологических видов) микробиома влагалища:

«А» – лакто-бациллы (большие грамположительные палочки);

«В» – бактероиды и гарднереллы (мелкие грамотрицательные кокки);

«С» – мобилункусы (изогнутые грам-вариабельные палочки). 

По количеству выявленных в мазке морфотипов начисляются баллы, которые затем суммируют («А» + «В» + «С») – результат:

  • от 0 до 3-х баллов – свидетельствует о нормальном состоянии влагалищной флоры;
  • от 4-х до 6-ти – промежуточной микрофлоре;
  • от 7-и до 10-ти – бактериальном вагинозе.

Точность итоговых данных исследования мазка по Граму обеспечивается изучением сразу нескольких критериев – это снижает возможность получения ошибочных результатов.


Расшифровка анализа


Образец результата анализа
Выделяют 4 вида микроскопической картины женских половых органов:
  1. Нормоценоз – грамотрицательная микрофлора отсутствует, преобладают лакто-бациллы, наблюдаются единичные эпителиальные клетки и лейкоциты.
  2. Промежуточный – количество лакто-бацилл снижено, обнаруживаются грамотрицательные палочки и грамположительные кокки.
  3. Дисбиоз – молочнокислые бактерии практически отсутствуют, преобладает кокковая и палочковая флора, выявляются микоплазмы, гарднереллы, уреаплазмы.
  4. Вагиноз – лакто-бактерии не обнаруживаются, может присутствовать большое количество эпителия, лейкоцитов, дрожжеподобных грибков, возбудителей мочеполовых инфекций.

На результат анализа могут оказать влияние антисептические, противозачаточные, антибактериальные и противогрибковые средства.

Микроскопическое исследование урогенитального мазка не позволяет определить восприимчивость микроорганизмов к лекарственным средствам (для этой цели необходимо провести бактериологический посев) и обнаружить наличие микоплазм, хламидий, уреаплазм, герпес- и папиллома-вирусов (для диагностики инфекционных заболеваний, возбудителями которых они являются выполняют иммуноферментный анализ крови либо молекулярно-биологическое исследование с помощью полимеразной цепной реакции).