Бруцелла, ДНК Brucella spp., моча

Анализ мочи на бруцеллы
Молекулярно-биологическое исследование мочи на Brucella spp. проводится с целью выявления у пациента бруцеллеза. Бруцеллез - тяжело протекающее инфекционное заболевание, передающееся человеку от больных животных.
Подготовка к исследованию:
- Пациенту не рекомендуется сдавать анализ на фоне проведения антибактериальной терапии
- Для исследования в стерильную емкость собирают среднюю порцию утренней мочи около 20-30 мл
- Перед мочеиспусканием нужно вымыть половые органы простой водой, женщинам - прикрыть вход во влагалище тампоном
- Женщины не сдают анализ во время менструации
Характеристики исследования:
- Тип биоматериала: моча
- Синонимы (rus): ПЦР анализ мочи на бруцеллы
- Синонимы (eng): PCR urine test for Brucella
- Методы исследования: ПЦР
Характеристика возбудителя
Бруцеллы (Brucella spp.) - мелкие неподвижные бактерии, отличающиеся полиморфизмом. Спор не образуют, являются строгими аэробами. Бруцеллы устойчивы во внешней среде, длительное время сохраняются в почве, воде, продуктах питания. Образуют эндотоксин, который после гибели бактерий вызывает острую интоксикацию организма. Ферменты бруцелл подавляют активность фагоцитов.
Распространяют инфекцию животные, чаще всего крупный рогатый скот. Человек также может заразиться при употреблении в пищу продуктов животного происхождения. Бактерии скапливаются в лимфатических узлах, затем попадают в сосудистое русло и диссеминируют в печень, почки, селезенку, костный мозг, суставы.
Когда делают анализ?
- при симптомах острой формы бруцеллеза - лихорадке, общей интоксикации, артрите;
- при поражении опорно-двигательного аппарата, нервной и сердечно-сосудистой систем у людей, употреблявших термически необработанные молочные продукты;
- при подозрении на бруцеллез у людей из группы риска;
- для выявления латентной инфекции.
Диагностика бруцеллеза затрудняется тем, что заболевание в большинстве случаев протекает без специфических клинических симптомов.
Важность исследования
Бруцеллез поражает многие отделы организма, в наибольшей степени вызывая осложнения для нервной и сердечно-сосудистой системы. Заболевание проявляется негативной клинической симптоматикой, с которой пациент обращается к врачам. Но на основании лишь одних визуальных признаков невозможно подтвердить дифференциальный диагноз. Для этого назначают лабораторный анализ крови методом ПЦР. Только так можно своевременно установить диагноз и провести качественные методы терапии. Если не идентифицировать возбудитель инфекции, развиваются следующие осложнения:
- эндокардит – воспалительный процесс в эндокарде сердца с последующим проникновением микроорганизма вплоть до клапанов, что впоследствии приводит к нарушению их функции (по этой причине наиболее часто наступает летальный исход);
- поражение головного мозга с последующим развитием менингита или энцефалита, что проявляется неврологической симптоматикой и тоже может привести к смерти;
- абсцессы печени, внутри которых накапливается инфекция с продуктами ее жизнедеятельности, что приводит к снижению функциональности органа;
- воспаление селезенки с последующей гипертрофией органа;
- артрит – воспалительные поражения суставов бактериальной природы, что вызывает нарушение их подвижности, скованность движений, болевой синдром;
- поражение внутренних половых органов у лиц обоих полов, что приводит к бесплодию.
Без своевременного обнаружения и устранения патология может протекать длительно, в хроническом режиме. Весь этот период наблюдается сильнейшая симптоматика недомогания, хроническая усталость, периодические подъемы температуры тела. Всех этих осложнений можно избежать, если подтвердить диагноз посредством ПЦР анализа. Так как его результаты приходят быстро, врач может сразу же назначить правильные антибактериальные средства, в отношении которых у возбудителя инфекции имеется чувствительность.
В норме возбудитель бруцеллеза не должен встречаться в организме пациента даже в малейших количествах. Поэтому достаточно лишь качественного проведения анализа. То есть назначают ПЦР для выявления наличия или отсутствия возбудителя. Если приходит положительный результат, всегда назначают препараты на основе антибактериальных действующих веществ.
Для чего необходим анализ мочи на ДНК Brucella spp.
ПЦР методика относится к безопасным исследованиям. Для ее проведения необходимо взять небольшой объем мочи после предварительной подготовки пациента. В биологической жидкости определяют факт наличия или отсутствия бактерии. Важно помнить, что в норме для патогенного микроорганизма характерны следующие особенности:
- не входит в состав условно-патогенной микрофлоры мочевыделительного тракта;
- не должен фильтроваться почками в мочу.
Если диагноз уже установлен, ПЦР методику можно повторять для получения другой информации:
- эффективность завершенной терапии, чтобы судить об уничтожении или сохранении инфекции (во втором случае потребуется продолжить антибактериальную терапию, но на этот раз меняют действующее вещество препарата, так как к предыдущему лекарству у микроорганизма наблюдается резистентность);
- проверка риска сохранения бруцеллеза по истечению нескольких месяцев после завершения терапии, чтобы с точностью исключить содержание микроорганизма и последующего развития рецидива.
Важно помнить, что повторный анализ выполняют только после полного завершения методов терапии. В процессе лечения проводить его не рационально, так как исследование качественное. То есть оно определяет наличие или отсутствие инфекции, но не ее точное количество.
Особенности анализа мочи на ДНК Brucella spp.
При выборе ПЦР методики для обнаружения возбудителя бруцеллеза учитывают ряд важных особенностей:
- материалом для исследования служит моча, так как в нее выделяется микроорганизм после фильтрации всех веществ через почки;
- даже если в моче содержится минимальная концентрация или даже фрагмент инфекции, анализатор сможет идентифицировать ее за счет многократного увеличения генетического материала бактерии;
- возможность ложных сведений практически отсутствует, тест всегда показывает достоверные данные;
- после завершения терапии в мочу выделяются фрагменты ДНК возбудителя инфекции, поэтому необходимо выждать небольшой период, только затем выполнять анализ заново;
- для определения бруцеллеза нет необходимости в выявлении точного количества патогенного микроорганизма, так как от этого фактора не зависит степень тяжести патологии, поэтому используют только количественный анализ;
- без предварительной подготовки сдавать анализ нельзя, например, после употребления небольшого объема антибиотиков результат может оказаться ложноотрицательным, что приведет к дальнейшему прогрессированию патологии;
- суть ПЦР диагностики заключается в многократном увеличении объема ДНК патогенного микроорганизма, после чего его разновидность оценивают на автоматическом анализаторе.
Врачи-инфекционисты советуют проводить ПЦР анализ сразу после появления первых симптомов болезни. В этот момент инкубационный период завершился, поэтому бактерии уже выделяются в мочу.
Метод проведения
- Концентрирование мочи. Так собирают весь объем ДНК микроорганизма в небольшой порции (если бактерии присутствуют в образце мочи).
- Денатурация. Нити ДНК взаимосвязаны между собой водородными связями. Для их разрушения температуру биологического материала повышают до 96°. В таких условиях нити ДНК раскручиваются, но не повреждаются.
- Введение праймера. Предварительно температуру снижают до 72°.Вещество содержится в специальном реагенте, который добавляют в образец мочи. Праймер встраивается в каждую ДНК, определяя начало и конец участка, который будет выявлен анализатором.
- Умножение количества генетического материала. Если в образце содержится минимальное количество ДНК, его многократно увеличивают, чтобы получить достаточный объем. В таких условиях выявить патогенные микроорганизмы будет намного легче.
- Детекция. Пробу мочи с реагентом устанавливают в аппарат. Чаще всего используют ДНК-зонды, которые взаимодействуют с ДНК бактерии, формируя комплексы. Затем проводят диагностику ДНК, вычисляя последовательность нуклеотидов. Этим методом в точности вычисляют патогенный микроорганизм, его видовую принадлежность.
Вычисленную информацию указывают на лабораторном бланке в печатном виде. По этим данным можно с точностью определить диагноз бруцеллеза, если присутствует хотя бы минимальное количество бактерии.
Расшифровка анализа
Анализ на присутствие в моче ДНК Brusella spp. является качественным. В бланке лаборатории может быть указан следующий результат:
- "обнаружено" - это значит, что в крови пациента был найден фрагмент бактериальной ДНК Brusella spp.;
- "не обнаружено" - генетический материал возбудителя бруцеллеза в исследуемом образце не выявлен или его концентрация незначительна.