Определение антител к лейшмании (Leishmania) в крови, (IgG + IgM)

Анализ крови на антитела к лейшмании (Leishmania)

Иммунологический анализ крови, в ходе выполнения которого определяют количество специфических антител классов М и G (IgG + IgM) к простейшему паразиту лейшмании (Leishmania), проводится для диагностирования и клинического разграничения лейшманиоза с другими инфекционными заболеваниями, протекающими с характерными для данной инфекции клиническими признаками.

Лейшманиоз представляет собой зоонозный инфекционно-воспалительный процесс, развитие которого вызывает внутриклеточный паразит Leishmania. В человеческий организм он проникает при укусе мелкого двукрылого кровососущего насекомого – москита. Заболевание проявляется лихорадкой, снижением массы тела, потемнением оттенка кожи, гепатоспленомегалией, интоксикационным синдромом. Инфекционно-воспалительный процесс характеризуется волнообразным течением, тяжелая форма заболевания встречается у детей младшего возраста и лиц с ВИЧ-статусом.

Для дифференциальной диагностики лейшманиоза используют результаты исследований биоптатов, менее инвазивным способом считается иммунологический лабораторный метод. После проникновения в организм человека инфекционного возбудителя, иммунная система производит специфические белки – иммуноглобулины класса М и G, которые является серологическим маркером острой стадии заболевания.

Тип биоматериала: венозная кровь.

Синонимы (rus): возбудитель висцерального лейшманиоза, антитела при лейшманиозе.

Синонимы (eng): L. infantum.

Метод исследования: Иммуноферментный анализ (ИФА).

Антитела класса IgM к Leischmania выступают в качестве маркера острой фазы заболевания. Они формируются иммунными клетками спустя примерно 5 суток с момента инфицирования организма и достигают своих пиковых значений в диапазоне от 1 до 4 недель, после чего постепенно снижаются и через 6-7 недель, к моменту выздоровления пациента, полностью исчезают из русла крови.

Антитела класса IgG к Leischmania вырабатываются медленнее, однако обеспечивают продолжительный ответ иммунной системы на антигенный раздражитель. Их формирование происходит спустя 15-20 дней после поражения организма Leischmania, а своего максимального уровня они достигают по прошествии 2 месяцев. IgG-антитела после выздоровления остаются в крови на протяжении долгих лет, находясь при этом в низкой концентрации и указывая на перенесенную инфекцию.

Для выявления лейшманиоза, установления фазы патологического процесса, важно провести серологическую диагностику, направленную на обнаружение и IgG, и IgM-антител.

Когда делают анализ на антитела к лейшмании?

Анализ крови на антитела к Leishmania необходим при:

• диагностировании лейшманиоза и его клинического разграничения с малярией, лимфогранулематозом, абсцессом печени, туберкулезом, тифом;
• ВИЧ-инфекции;
• лихорадочном состоянии неизвестного происхождения;
• установлении причин поражения висцеральных органов.

Подготовка к анализу крови

Биологический материал – образец венозной крови, для исследования используют сыворотку, лишенную фибриногена. Венепункцию производят в условиях клинико-диагностического центра в утренние часы (8.00-11.00), натощак – «голодный» период должен продлиться не менее 6-ти часов.

Накануне анализа пациенту следует ограничить курение и воздержаться от:

• употребления жирных, острых и жареных блюд, спиртных и кофеин-содержащих напитков;
• чрезмерных физических нагрузок;
• психоэмоционального напряжения.

Рекомендации дя пациента:

• в день анализа допустимо употребление питьевой воды;
• за 10-15 минут до процедуры забора крови обследуемому рекомендуется принять сидячее положение, обеспечив при этом состояние максимального физического и психического покоя;
• после курсовой терапии сдавать кровь следует спустя две недели с даты последнего приема медикаментов;
• после физиотерапевтических процедур, курса массажа, прохождения инструментальных видов диагностики (рентген, флюорография) проводить тестирование можно по прошествии не менее одной недели;
• при приеме любых лекарственных средств о данном факте надлежит сообщать врачу.

Методика проведения анализа

Исследование крови, направленное на обнаружение антител классов IgG и IgM к Leischmania проводится иммуноферментным анализом. В его основу положена взаимосвязь между антигенами и соответствующими антителами, выражающаяся в формировании при их взаимодействии иммунных комплексов «антиген-антитело». Забор венозной крови выполняет квалифицированный лаборант. Необходимый для тестирования объем биологической жидкости составляет 5 мл. Процедура получения пробы крови проводится при строгом соблюдении предписаний асептики и антисептики. Манипуляция безболезненна, обследуемый ощущает небольшой кратковременный дискомфорт. Кровь переносится в пробирку с антикоагулянтом. Исследование выполняется в несколько, последовательно сменяющих друг друга этапов.

Центрифугирование. Пробирка с образцом крови помещается в специальный аппарат, вращающий ее на 1000 оборотах. Вследствие данной манипуляции происходит отделение форменных элементов крови, не представляющих лабораторной ценности, от ее плазмы, которая, собственно, и необходима для исследования.

Работа с полистироловым планшетом. В лунки медицинского планшета при помощи стерильного шприца вносится плазма крови обследуемого и конъюгат, содержащий антигены Leischmania. В случае присутствия в исследуемом образце антител к лейшмании, формируются соответствующие иммунные комплексы.

Инкубация. Полистироловый планшет помещают в специальный прибор для инкубации, температурные условия в котором максимально приближены к температуре тела человека. Это обеспечивает быстрое формирование иммунных комплексов, при наличии в крови искомых антител.

Фотокалориметр. С целью установления уровня антител к Leischmania применяется фотокалориметр – специальный прибор, просвечивающий исследуемую биожидкость, выполняющий автоматический подсчет антител и выдающий полученные результаты на бланке анализа.

Расшифровка анализа крови

В крови здорового человека IgG и IgM к Leishmania не обнаруживаются. Этот результат – отрицательный, который свидетельствует об:

1. Отсутствии у пациента лейшманиоза.
2. Недавнем инфицировании – титр антител еще слишком низкий, поэтому их не удается выявить. При наличии у пациента характерной клинической симптоматики тест рекомендуют повторить спустя 10 дней.

Сомнительный результат выдается в случае концентрации антител менее 10,0 Ед/л – необходимо повторное исследование. Повторный пограничный результат рассматривают как отрицательный.

Наличие в исследуемой пробе специфических антител изотипа к G и M к лейшмании в количестве более 10,0 Ед/л – положительный результат анализа.

Результаты исследования интерпретируются только врачом, инициировавшим проведение анализа, самостоятельная их расшифровка не допустима. При положительном результате, для подтверждения диагноза лейшманиоз рекомендуется повторное выполнение тестирования с интервалом в две недели. На развитие патологического процесса, обусловленного внедрением в организм Leischmania, укажет значительный прирост антител в 4 и более раз. При постановке окончательного диагноза учитывается также анамнез пациента, пребывание в эндемичных районах по инфицированию лейшманиозом (Северная Африка, Средняя Азия, Южная Европа, Ближний Восток), клиническая картина заболевания. 

Вероятность получения ложных значений

Риск получения недостоверных результатов анализа возникает в силу следующих причин:

• отсутствие надлежащей подготовки, не соблюдение пациентом врачебных рекомендации в преддверии исследования;
• нарушения медицинского персонала в ходе забора биологической жидкости и при ее последующей транспортировке (загрязненная пробирка, неприменение антикоагулянта, нарушений условий хранения биоматериала);
• нарушения, допущенные в ходе проведения иммуноферментного исследования (применение конъюгата с истекшим сроком годности, использование цельной крови).

При данных ошибках результаты анализа могут быть как ложноотрицательными, так и ложноположительными. В особенности опасен первый вариант, поскольку в таком случае патологический процесс, в отсутствии надлежащей терапии, может привести к осложнениям и трансформироваться в свою хроническую форму.

Кроме того, ложноотрицательные результаты лабораторной диагностики могут устанавливаться при проведении обследования в отношении лиц, имеющих патологии иммунной системы, проявляющиеся нарушением иммунного ответа. В таком случае при поражении организма Leischmania выработка специфических антител не производится, соответственно ни IgМ ни IgG-антитела не выявляются.

Стоит учитывать, что в эндемических областях существует вероятность перекрестной реакции Leischmania с Trypanosoma cruzi, в связи с чем в данных районах наряду с иммуноферментным анализом рекомендуется для подтверждения диагноза использовать альтернативные методы диагностики лейшманиоза.