Определение содержания антител к аквапорину 4 (NMO), IgG

Анализ крови на антитела к аквапорину 4 (NMO), IgG

Иммунологическое исследование крови, которое позволяет определить уровень содержания аутоиммунных антител изотипа G (IgG) к белку водопроводящих каналов аквапорину-4 (NMO), проводится для диагностирования и клинического разграничения нейро-оптикомиелита, оценивания его течения и мониторинга успешности проводимых лечебных мероприятий.

Аквапорин-4 (NMO) представляет собой белок, который образует трансмембранные водные каналы, обеспечивающие перенос жизненно важных веществ через базолатеральную мембрану почечных канальцев в сосуды и оболочки головного мозга. Наибольшее количество аквапорина-4 находится в спинном мозге и гипоталамусе. Иммунная система продуцирует специфические анти-AQP4 – они циркулируют в крови и спинномозговой жидкости, провоцируя:

• увеличение проницаемости гематоэнцефалического барьера;
• нарушение водно-солевого обмена;
• повреждение и демиелинизацию нервных волокон.

Эти явления приводят к развитию оптикомиелита (болезни Девика) – аутоиммунной воспалительной патологии, при которой поражаются зрительные нервы и спинной мозг. Количество антител изотипа G коррелирует с активностью патологического процесса, увеличение их титров наблюдается при рецидиве заболевания.

Характеристики исследования:

• Тип биоматериала: венозная кровь
• Синонимы (rus): антитела к аквапорину 4, аквапорин-4 (NMO)
• Синонимы (eng): NMO(Neuromyelitis Optica) IgG, Aquaporin-4Receptor Antibody;anti-AQP4.
• Метод исследования: Непрямая реакция иммунофлюоресценции.
• Сроки выполнения: 12 дней

Когда делают анализ на анти-AQP4?

Анализ крови на анти-AQP4 необходим при:

• клинической симптоматике воспаления зрительного нерва и спинного мозга;
• обнаружении у пациента признаков поперченного миелита по результатам магнитно-резонансной томографии;
• мониторинге состояния пациентов с оптикомиелито-подобными расстройствами – синдромами, при которых существует высокий риск развития оптикомиелита;
• контроле лечения болезни Девика.

Важность исследования

При продукции аутоиммунных антител к аквапорину 4 в первую очередь страдают нервные волокна головного и спинного мозга. Также у пациентов наблюдаются симптомы водно-электролитного дисбаланса. Данное состояние часто путают с рассеянным склерозом, так как признаки для них схожи, особенно на ранних этапах развития. Поэтому важно провести не только инструментальные исследования, но и лабораторные тесты. Это связано с тем, что при рассеянном склерозе антитела к аквапорину 4 не выделяются. Поэтому тест можно провести для дифференциальной диагностики, чтобы выявить точную причину неврологических симптомов. Также его назначают для достижения следующих целей:

• точное определение болезни Девика, для которой в большинстве случаев характерна продукция антител к аквапорину, поражение зрительного нерва, поперечный миелит;
• отслеживание степени тяжести развития патологии, на начальных стадиях формируется небольшое количество антител, но по мере ее развития их объем становится все больше;
• подбор правильных методов терапии, если обнаруживают антитела, обязательно назначают иммуносупрессивные препараты;
• оценка эффективности комбинированной терапии неврологических расстройств, чтобы своевременно менять препараты, их дозировки, назначать вспомогательные методики по мере нарастания или убывания титра антител.

Без исследования невозможно установить точный диагноз и подобрать правильные методы лечения. На основании одних инструментальных тестов можно определить область поражения, которая вызывает неврологические расстройства. Но только через выявление антител к аквапорину 4 определяют причину на клеточном уровне. Тест назначает невролог, к которому обратился пациент с симптомами. В профилактических целях его используют редко, в основном при негативной наследственности. То есть если у больного имеются близкие родственники с болезнью Девика или другими аутоиммунными патологиями, сопровождающимися продукцией этого вида антител.

Для чего необходим данный анализ

Исследование проводится в неврологии и иммунологии для получения информации:

• своевременное определение поперечного миелита, оптикомиелита, неврита зрительного нерва, которые могут быть вызваны аутоиммунным расстройством;
• наличие схожих симптомов, характерных для оптикомиелита и рассеянного склероза, чтобы установить точный диагноз;
• повторное тестирование, необходимое для оценки степени тяжести патологии и результата лечения.

Важно помнить, что помимо лабораторного анализа на антитела к аквапорину 4 требуется проводить и другие виды исследований. Это связано с тем, что патология поражает нервные волокна не только на клеточном, но и тканевом уровне. Например, периодически выполняют МРТ для выявления очагов поражения.

Исследование допустимо выполнять на основе сыворотки крови. Но наиболее достоверные данные получают при диагностике цереброспинальной жидкости. Так можно оценить точный титр антител в центральной и периферической нервной системе.

Важные критерии

При проведении исследования важно дополнительно учесть ряд критериев:

• помимо лабораторного исследования требуется оценить сведения от результатов МРТ, неврологические тесты, другие лабораторно-инструментальные анализы;
• у пациентов с диагнозом оптикомиелит могут не появляться антитела к аквапорину 4 на начальных стадиях или весь период патологии, поэтому тест рекомендовано повторять даже в случае получения негативного результата;
• точное выявление оптикомиелита требует определения хотя бы одного критерия данной болезни.

При установлении диагноза требуется периодически повторять обследование пациента, в том числе проходить лабораторный анализ на наличие антител к аквапорину 4.

Особенности исследования

Анализ на выявление антител к аквапорину выполняют при помощи непрямой реакции иммунофлюоресценции. Для теста характерны следующие особенности:

• основной вид биологического материала – венозная кровь, но в ряде случаев используют цереброспинальную жидкость;
• для подготовки к анализу используют небольшой перечень рекомендаций, так как на наличие антител влияет минимальное количество факторов;
• в основе теста лежит взаимодействие антител из биологической жидкости пациента и антигенов из реактива;
• сами по себе иммунные комплексы обнаружить невозможно, поэтому в реактив добавляют иммунофлюоресцентную метку, которую определяют по специфическому свечению;
• антитела выявляют при помощи полуавтоматического оборудования, через которое можно подсчитать точную концентрацию иммунных комплексов (в данном исследовании применяют флюоресцентный микроскоп);
• в большинстве случаев нарастание антител характерно для болезни Девика, для других патологий их определяют намного реже;
• период выполнения теста составляет 2-3 дня, при потребности получения экстренных данных направляют специальный запрос, через который результаты приходят уже в течение суток.

В большинстве случаев для диагностики используют венозную кровь, так как процедура ее сбора практически безболезненна, не приносит вреда для пациента. Исследование цереброспинальной жидкости проводят крайне редко, в основном при ее сборе для диагностики неврологических патологий неясного генеза, когда назначают множество лабораторных анализов. Сбор этого вида биоматериала тяжело переносится пациентами на физическом и психоэмоциональном уровне. В некоторых случаях процедура может вызывать осложнения.

Метод проведения анализа

Сразу после сбора биологического материала приступают к поэтапному проведению непрямой реакции иммунофлюоресценции.

1. Центрифугирование. Эту процедуру применяют только в случае, если биологическим материалом является венозная кровь. Для цереброспинальной жидкости этот этап исключают. Кровь в пробирке устанавливают в центрифугу, прокручивая на 1000 оборотах. В конце методики на дно пробирки выделяются форменные элементы, окрашивающие жидкость в красный оттенок. Наверх поднимается полупрозрачная и желтая плазма. Так как жидкости разделены между собой, плазму легко отобрать при помощи шприца. В некоторых лабораториях процедуру центрифугирования заменяют добавлением разделительного геля, тогда жидкости разделяется на две фазы самостоятельно.
2. Смешивание биоматериала и реагента. Плазму крови или цереброспинальную жидкость смешивают с антиглобулиновой сывороткой, меченой флюорохромом. Для ускорения получения иммунных комплексов полученную жидкость инкубируют при слегка повышенной температуре. После завершения метода антитела пациента должны связаться с мечеными антигенами из реактива.
3. Промывка. Полученную жидкость промывают, чтобы удалить оставшиеся антитела, которые не смогли связаться с антигенами.
4. Микроскопия. Жидкость устанавливают под флюоресцентный микроскоп, оценивая наличие или отсутствие иммунных комплексов с флюоресцентной меткой. Если они найдены, подсчитываю точную концентрацию, чтобы у врача была возможность оценить степень тяжести патологии.

Лабораторный бланк выдают в распечатанном виде. В нем будут содержаться референсные значения (пределы нормы), а также концентрация антител пациента.

Как подготовиться к анализу крови?

Исследование рекомендуется проводить до начала иммуносупрессивной терапии. Биологический материал – кровь из вены, для теста используют сыворотку. Венепункция осуществляется в утренние часы (с 8.00 до 11.00), натощак. 

Накануне анализа пациент должен ограничить курение и отказаться от:

• употребления жирной пищи и алкогольных напитков;
• применения обезболивающих и нестероидных противовоспалительных средств;
• физического и психоэмоционального перенапряжения.

Что означают результаты анализа крови?

В норме титр ауто-антител к аквапорину не превышает соотношения 1:10. Этот результат – отрицательный.

Увеличение показателей встречается при:

• оптикомиелите (приблизительно в 80% случаях);
• двустороннем неврите зрительных нервов;
• обширном воспалении тканей спинного мозга;
• изолированном рецидивирующем неврите зрительного нерва;
• оптикомиелито-подобных расстройствах.

Рационально подобранная тактика иммуносупрессивной терапии способствует уменьшению количества аутоиммунных антител. 

При интерпретации результатов исследования учитывают неврологический статус пациента, данные МРТ и дополнительных лабораторных исследований.