Ureaplasma spp. (ПЦР Ureaplasma parvum количественный анализ)

Доронин Иван Михайлович
Доронин Иван Михайлович Заведующий отделом ПЦР и генетики,

Количественный анализ ДНК уреаплазм


Количественное молекулярно-генетическое исследование, которое позволяет методом ПЦР определить в отделяемом из уретры ДНК Ureaplasma spp. и уточнить вид Ureaplasma parvum, проводится для диагностирования уреаплазмоза, выявления бессимптомного бактерионосительства и оценивания эффективности  терапии.

ПЦР Ureaplasma parvum количественный анализПодготовка к исследованию:

  • воздержаться от половых контактов;
  • подмываться только вечером теплой водой (утренний туалет не проводят);
  • интравагинальные спринцовки запрещены до анализа;
  • отказаться от приема антибиотиков и гормональных препаратов за несколько дней до анализа;
  • за два часа до манипуляции отбора биоматериала постараться не мочиться.

Тип биоматериала: отделяемое слизистых покровов урогенитального тракта

Синонимы (rus): Тест на уреаплазмоз, анализ отделяемого из уретры

Синонимы (eng):  Test for anaplasmosis, analysis of the discharge from the urethra

Методы исследования: ПЦР

Сроки выполнения: 1-2 дня

Ureaplasma spp. относится к семейству условно-патогенных бактерий, которые обитают на слизистых покровах мочеполового тракта. При определенных обстоятельствах (снижении иммунной защиты, переохлаждении организма, присоединении других патогенов) происходит активное размножение данных микроорганизмов и развитие инфекционно-воспалительного процесса, характеризующегося:
  • патологическими выделениями из урогенитальных путей;
  • болезненностью при мочеиспускании и интимной близости;
  • повышением температуры;
  • зудом и жжением в мочевыводящем канале;
  • общим недомоганием;
  • помутнением мочи.
Ureaplasma parvumУсиливать влияние на человеческий организм болезнетворных бактерий может еще один представитель семейства уреаплазм – Ureaplasma parvum, которая способна:
  • продлить течение острой стадии инфекционно-воспалительного процесса;
  • вызвать более выраженную или атипичную клиническую симптоматику, тем самым затрудняя диагностирование заболевания;
  • осложнить проведение лечебно-профилактических мероприятий – стандартные методы могут быть неэффективны.

Основной путь передачи уреаплазм – половой. Подавляющее большинство случаев уреаплазменной инфекции развиваются после незащищенного полового акта. Менее эпидемиологически значимым, но возможным путем реализации инфекции является контактно-бытовой. Особую опасность представляет вертикальный путь передачи – от матери к ребенку во время беременности или родов, что может вызвать тяжелые последствия для малыша. Последний сценарий встречается относительно часто, так как существует уреаплазмоносительство – состояние, при котором у матери отсутствуют признаки какого-либо заболевания, но она способна быть источником инфекции.

Чем опасен уреаплазмоз?

Если инфекцию вовремя не диагностировать и не провести соответствующее лечение, то острый процесс перетекает в хронический.  Хронический уреаплазмоз протекает с периодами обострения и ремиссии, часто малосимптомно и не дает о себе знать длительное время. Однако рецидивирующие воспалительные процессы ведут к прогрессирующему повреждению внутренних половых органов и замещению их соединительной тканью – фиброзу. Результатом этого может стать как мужское (при повреждении яичек, “закупорке” семявыносящего протока), так и женское (спаечные процессы в области маточных труб, необратимое повреждение яичников) бесплодие. 

Спайки в маточных трубахПомимо этого, хронический воспалительный процесс сопровождается образованием большого количества спаек в просвете матке и маточных трубах. Нарушение проходимости маточных труб является главной причиной развития внематочной беременности, являющейся потенциально жизнеопасным состоянием, и требующим экстренного оперативного вмешательства. 

Наличие уреаплазменной инфекции во время беременности создает высокий риск внутриутробного или интранатального (во время родов) заражения плода. В первом случае возникает опасность антенатальной гибели ребенка, формирования пороков развития, выкидыша, во втором – у новорожденного возникает угроза развития местной или генерализованной уреаплазменной инфекции. Воспаление половых путей женщины во время беременности в результате уреаплазмоза может сопровождаться “расплавлением” нижнего полюса амниотической оболочки, что ведет к самопроизвольному аборту или преждевременным родам. Поэтому во время беременности необходимо обязательно обследоваться на наличие инфекции. 

Так как уреаплазмы передаются половым путем, во всех вышеописанных случаях обследование рекомендуют пройти обоим супругам.

Когда делают анализ?


Количественный анализ ДНК уреаплазм (Ureaplasma spp.) методом ПЦР с определением вида Ureaplasma parvum в отделяемом из уретры проводится при:
  • профилактических обследованиях;
  • планировании рождения ребенка;
  • наличии у пациента признаков уреаплазмоза;
  • нарушении репродуктивной функции.

Методика проведения анализа

Количественный молекулярно-генетический анализ методом ПЦР – самый достоверный и информативный метод лабораторной диагностики множества инфекций на данный момент. Суть метода состоит в многократном копировании определенных участков ДНК возбудителя до таких значений, при которых его анализ и изучение не составляют проблем. Благодаря такому подходу даже минимальная концентрация патогена в биологическом материале будет диагностирована.

Методика проведения анализаСобранный биологический материал помещают в камеру диагностического аппарата – амплификатора. Помимо биоматериала, в камере имеются необходимые для проведения метода ферменты – праймеры и ДНК-полимераза. 

Полимеразно-цепная реакция проходит в 3 стадии: 

1. Денатурация: любая молекула ДНК состоит из двух цепей, связанных между собой водородными мостиками. Температура в диагностической камере амплификатора повышается до 96 градусов. Такие условия способствуют разрушению водородных мостиков и образованию двух независимых между собой цепей генетической информации. 

2. Отжиг: температура в камере понижается до таких значений, при которых праймеры связываются с обеими цепями ДНК. В камере имеется 2 вида праймеров – для двух различных цепей. 

3. Элонгация: фермент ДНК-полимераза связывается с праймерами, которые выступают в качестве посредника, и на основании получаемой от них информации для каждой цепи синтезирует ее вторую пару. 

Исходом такой реакции становится удвоение материала – из одной молекулы ДНК образуется две. После повторения цикла их будет уже 4, затем 8, 16, 32 и т. д., то есть количество материала растет в геометрической прогрессии. Реакция будет продолжаться до того момента, пока количество генома не превысит критическую диагностическую отметку, при которой аппаратура способна его определить. 

Для проведения количественного анализа добавляют специальные красители.  Последние связываются с ДНК и издают флуоресцентный сигнал. По интенсивности сигнала судят о количестве молекул ДНК.

Критерии постановки диагноза 

Уреаплазма – условно-патогенная бактерия. Это означает, что она может присутствовать в половых путях абсолютно любого человека и это не означает, что ему необходимо проводить лечение. Даже наоборот, условно-патогенные бактерии создают физиологический защитный барьер, препятствующий размножению других возбудителей инфекции. 

Однако, присутствие условно-патогенной флоры в организме должно быть в строго определенных границах. Именно для этого назначается количественное определение возбудителя методом ПЦР: верхней границей нормы является концентрация не более 105  ГЭ/мл. При показателе выше этого значения развивается местный дисбактериоз, который обязательно необходимо лечить. При таком состоянии либо сами уреаплазмы вызывают воспалительный процесс, либо способствуют активизации другого инфекционного агента. 

Критерии постановки диагнозаКритериями постановки диагноза уреаплазмоза являются: 

- выявление ДНК уреаплазмы в концентрации более 105  ГЭ/мл; 

- клинические и лабораторные признаки воспалительного процесса половых путей.

Критерием постановки диагноза патологического носительства уреаплазмы является концентрация ДНК возбудителя более 105  ГЭ/мл при отсутствии признаков воспалительного процесса. 

В последнем случае воспаление половых путей отсутствует, но оно может развиться в любой момент. Вдобавок к этому, носители могут заразить своего полового партнера. Поэтому даже патологическое носительство должно подвергаться терапии.

Интерпретация результата анализа


В норме концентрация ДНК уреаплазм Ureaplasma spp. и Ureaplasma parvum составляет менее 103 геномных эквивалентов в 1 мл. Данный результат анализа является отрицательным, свидетельствует об отсутствии у пациента урогенитального уреаплазмоза.
Количество уреаплазм в 104 ГЭ/мл считается допустимым и не требует терапевтического лечения.
При положительном ответе концентрация ДНК более 105 ГЭ/мл и  указывает на текущую уреаплазменную инфекцию.