Анализ кала на холеру
Анализ кала на Vibrio cholerae методом ПЦР
Анализ кала на Vibrio cholerae методом ПЦР помогает выявить патогенные штаммы и серогруппы холеры (О1 и О139). Метод проводится в биологическом материале (кале) с применением гибридизационно-флуоресцентной детекции.
Сроки выполнения | 1 день |
Синонимы (rus) | Выявление ДНК Vibrio cholerae |
Cинонимы (eng) | Fecal Vibrio cholerae by PCR. Detection of DNA Vibrio cholerae |
Методы | Исследование образцов под микроскопом, определение гистологии тканей |
Единицы измерения | Положительный/отрицательный результат на наличие злокачественных патологий тканей |
Подготовка к исследованию | Нативные фекалии закрывают в пробирке и добавляют физиологический раствор (4 мл). |
Из пробирок переносят 1 мл суспензии в другие пробирки с плотно закрывающей крышкой и центрифугуют на микроцентрифуге на протяжении 5 минут при 12 тыс об/мин. | |
Для экстракции ДНК используют 50 мкл светлой фракции, которая находится между жидкой прозрачной и твердой фракцией фекалий. | |
Светлю жидкость отсасываю с помощью вакуумного прибора и отправляют ДНК на анализ. | |
Тип биоматериала и способы его взятия | Фекалии (1-2 г), мазок содержимого из прямой кишки с глубины 5-6 см, взятым ректальным ватным тампоном (ректальная металлическая петля). |
Кому назначается данное исследование на холерный вибрион?
Анализ кала на Vibrio cholerae методом ПЦР назначают тем пациентам, у которых подозревают заболевание холеру. Отталкиваются от клинических симптомов и эпидемиологической картины региона.
Клинические симптомы холеры зависят от степени поражения (легкой, средней или тяжелой). В любом случае у пациента в наличии жидкий стул до 15-20 раз в сутки, нарастающее обезвоживание. Фекалии напоминают рисовый отвар. Пациент жалуется на сухость во рту, жажду, слабость, дискомфорт и чувство «переливания жидкости» в животе. При средней степени могут наблюдаться судороги, учащенное сердцебиение. При тяжелой степени падает артериальное давление, не выделяется моча, черты лица человека становятся острыми, глаза западают, снижается тургор кожи, уровень общего белка может измениться в сторону увеличения ( (гиперпротеинемия).
Описание методики анализа на холеру
Детальное описание проведения анализа:
- Работу начинают из прогревания лизирующего раствора до полного растворения кристаллов. Отирается необходимое количество пробирок, в каждую вносят 300 мкл лизирующего раствора и маркируют пробирки.
- В каждую из них добавляют 50 мкл отрицательного контрольного образца (ОКО) и 50 мкл проб (фекалии). В отдельную пробирку (ОКО) экстракции вносят 100 мкл (ОКО). На вортексе все перемешивают и центрифугуют 5 секунд на микроцентрифуге.
- Потом вносят 10 мкл внутреннего контрольного образца Vibrio cholerae, перемешывают содержимое пробирок и инкубируют 5 мин. Снва процентрифугировать пробирки и использовать надосадочную жидкость для экстракции ДНК
Расшифровка анализ кала
После окончания исследования, лаборатория выписывает заключение анализа.
Интерпретация результатов:
- значение Ct не больше 2 (образец положительный по наличию вибриона холеры);
- значение Ct – 3 (образец отрицательный);
- Ct больше граничного значения (требуется повторное исследование и экстракцию ДНК);
- Ct меньше граничного значения (недостоверный образец);
- нет значений Ct (требуется повторная экстракция ДНК).
В самом исследовании могут быть следующие показатели:
- V.cholerae O1 токсигенный или не токсигенный ;
- V.cholerae O139 токсигенный или не токсигенный;
- холерные вибрионы не обнаружены.
Результат анализ кала нельзя оценивать самостоятельно без комплексной диагностики заболевания. Дополнительными исследованиями есть посев бактериологического материала на специальный агар для выявления Vibrio cholerae. Кроме того, можно выделить чистую культуру и затем идентифицировать ее, исследовать биохимические свойства выделенного образца и сделать реакцию агглютинации.
В данном случае анализ кала на Vibrio cholerae методом ПЦР является самым точным. Проводится он с особой точностью, и если уже выявлено ДНК холерного вибриона, то следует немедленно начать лечение.