ПЦР анализ кала на норовирусы

Анализ фекалий на калицивирусы

Молекулярно-биологическое исследование фекалий, которое позволяет обнаружить фрагменты генетического материала норовирусов, проводится для диагностирования и клинического разграничения острых заболеваний желудочно-кишечного тракта.

За 3 суток до тестирования пациенту следует исключить:

• применение слабительных средств
• введение в прямую кишку тампонов с маслами, ректальных суппозиторий
• прием лекарственных препаратов, которые оказывают влияние на перистальтику кишечника (Пилокарпин, Белладонна) и цвет экскрементов (сернокислый барий, висмут, железо)

Характеристики исследования:

• Тип биоматериала: кал
• Синонимы (rus): ПЦР анализ фекалий на калицивирусы
• Синонимы (eng): PCR analysis of feces for caliciviruses
• Методы исследования: ПЦР диагностика
• Сроки выполнения: 3-5 дней

Norovirus относится к семейству РНК-содержащих кальцивирусов (Caliciviridae). На сегодняшний день данные возбудители являются наиболее частыми «провокаторами» вспышек острого инфекционного гастроэнтерита (воспалительного заболевания желудка и тонкого кишечника). Норовирусная инфекция занимает «почетное» второе место после рота-вирусной среди кишечных патологий у детей первых лет жизни. Вирус впервые был зарегистрирован в 1968 году на территории США. Он спровоцировал вспышку остро протекающего гастроэнтерита среди учеников школы, расположенной в местности Норуолк, в связи с чем и получил свое название. 

Вирусу присуща высокая контагиозность – для инфицирования достаточно десяти вирусных частиц. Для сравнения, для заражения ротовирусом их требуется в 10 раз больше. Норовирус способен поразить организм любого человека, вне зависимости от гендерной принадлежности и возрастных особенностей. Патоген отличается повышенной жизнеспособностью и даже устойчивостью к большинству дезинфекаторов, за исключением тех из них, которые имеют в своем составе хлор. В этой связи норовирус способен вызвать масштабные эпидемии. Вспышки патологии чаще всего возникают в различных учреждениях, где отмечается скопление людей: в школах, детских садах, детских домах-интернатах, домах престарелых, пансионатах, местах лишения свободы.

Источник инфекции – больной человек или носитель вируса, заражение происходит фекально-оральным, контактно-бытовым, пищевым и водным путем. Инкубационный период длится приблизительно двое суток, течение инфекционного процесса легкое (у 70% заболевших) или среднетяжелое (у 30%). 

Норовирусный гастроэнтерит характеризуется появлением симптомов острого респираторного заболевания, быстро начинающейся и прогрессирующей лихорадкой, тошнотой, рвотой, ознобом, диареей, головной болью. Максимальное выделение больным человеком высоко контагиозных вирусов наблюдается в первые два дня после заражения и может продолжаться до 30 дней после исчезновения клинических признаков инфекции.

Для постановки грамотного диагноза практикующие специалисты используют клинические, эпидемиологические данные и результаты лабораторных исследований – серологического скрининга, бактериологического посева фекалий и ПЦР анализ, который обладает высокой специфичностью и чувствительностью и считается наиболее предпочтительным.

Патогенез вируса

Проникая в организм человека, норовирус оказывает негативное воздействие на моторику желудка. В большинстве случаев вирус поражает тонкую кишку, реже наблюдается воспаление толстого кишечника. В первые часы происходит активация неспецифического иммунитета. По прошествии 3-4 суток начинают вырабатываться антитела. При этом устойчивый иммунитет не формируется, в связи с чем по прошествии порядка двух месяцев не исключено повторное заражение пациента.

Когда делают анализ?

Проведение молекулярно-генетического анализа фекалий на калицивирусы необходимо при наличии:

• эпидемических показаний;
• симптомов острой кишечной инфекции;
• клинических признаков острого гастроэнтерита;
• очага групповой инфекции;
• дифференциальной диагностики патологий, сопровождающихся тошнотой, рвотой, диареей, лихорадочным синдромом, абдоминальными болями, судорогами, поражением лимфоидной ткани;
• для контроля эффективности проводимой терапии.

Формы протекания заболевания

• Легкая форма. Является наиболее распространенной. Характерными симптомами выступает повышение температуры (не более чем до 37 градусов), редкая диарея, рвота, открывающаяся до 5 раз в течение суток, слабо выраженные болевые ощущения и признаки интоксикации.
• Среднетяжелая форма. Температура может повышаться до 39 градусов. Отмечается недомогание, общая слабость, частая диарея, многократная рвота, боль в животе, носящая схваткообразный характер.
• Тяжелая форма. Температура увеличивается до 40 градусов, ухудшается состояние, присутствует озноб. Также могут развиться признаки, указывающие на поражение желудочно-кишечного тракта: синдром дегидратации, вздутие живота, выраженный болевой синдром, частая рвота и диарея.

Особенности сбора биологического материала

Для сбора кала необходимо использовать горшок или подкладное судно. Перед использованием емкость следует хорошо вымыть, используя для этого мыло, после чего многократно, тщательно прополоскать ее под проточной водой. Недопустимо использовать при мытье судна или горшка дезинфицирующие средства. Вымытую емкость обдать кипятком после чего оставить на просушивание при естественных условиях. Категорически запрещается собирать образец кала из унитаза.

После сбора кала стерильный контейнер необходимо плотно закрыть крышкой. Доставить кал на исследование рекомендуется незамедлительно. В случае, когда это невозможно, до отправки в медицинскую лабораторию биологический материал необходимо хранить в холодильнике (максимальный срок хранения составляет 5 часов). Однако обязательно кал для анализа требуется доставить в день его сбора.

Подготовка к исследованию

Исследование фекалий на калицивирусы рекомендуется выполнять до начала проведения антибактериальной терапии. В случае приема антибактериальных препаратов, анализ целесообразно проводить по прошествии 14 дней после завершения лечения. В противном случае имеется вероятность получения ложноотрицательного результата.

Методика проведения анализа

Биологическим материалом для исследования является образец каловых масс, собирание которого пациент производит в домашних условиях. С этой целью необходимо приобрести в аптечной сети специальный стерильный контейнер с палочкой.

Образец биоматериала собирают после естественного испражнения, в день его доставки в лабораторный центр. Контейнер должен быть заполнен фекалиями на 1/3 и не содержать примеси урины.

Для выполнения исследования используют метод ПЦР-диагностики с обратной транскрипцией.

Важные дополнения        

Максимальное выделение норовируса с калом наблюдается в первые 1-2 дня с начала острого течения заболевания. В меньшей концентрации выделение вируса может продолжаться еще на протяжении недели. У лиц с иммуносупрессивными состояниями данные сроки удлиняются.

Расшифровка анализа

Показатель нормы: «фрагменты генетического материала, специфичные для Norovirus не обнаружены». Этот результат анализа считается отрицательным и свидетельствует об отсутствии у пациента норовирусной инфекции.
Положительный результат анализа подтверждает факт заражения пациента норовирусами.

Результаты молекулярно-биологического исследования на норовирусы расшифровываются врачом. Отрицательный результат не во всех случаях указывает на отсутствие заражения. Он может быть обусловлен прерывистым выделением вируса или его незначительной концентрацией, находящейся за границей детекции. Окончательный диагноз ставится на основе комплексной оценки состояния пациента, его жалоб, клинической картины и результатов всех исследований.

Значение своевременной диагностики норовируса

Исследование фекалий на калицивирусы (норовирусы) методом ПЦР-диагностики позволяет выявить заболевание на начальном периоде его развития. При своевременной терапии прогноз благоприятный. Это позволит избежать развития осложнений, которые могут быть вызваны норовирусом:

• тромбоз;
• острая почечная недостаточность;
• гиповолемический шок;
• панкреатит;
• желудочно-кишечный рефлюкс.

У детей могут возникать ишемический колит, бронхиолит, афебрильные судороги, некротический энтероколит. Редкими осложнениями выступают ДВС-синдром, энцефалопатия, доброкачественное воспаление печени. В особенности часто негативные последствия заболевания возникают у лиц с иммуносупрессивными состояниями, маленьких детей и пожилых людей.

Профилактика нововирусной инфекции

• Соблюдение личной гигиены, в особенности тщательное мытье рук.
• Употребление безопасной воды (кипяченой, очищенной).
• Термическая обработка продуктов перед их употреблением.
• Тщательное мытье фруктов и овощей.
• Купание грудных детей в кипяченой воде.
• Исключение контактов с лицами с признаками недомогания со стороны системы пищеварения.