ПЦР анализ кала на ротавирус

Доронин Иван Михайлович
Доронин Иван Михайлович Заведующий отделом ПЦР и генетики,

Анализ фекалий на Rotavirus A


Молекулярно-биологическое исследование фекалий, которое позволяет обнаружить фрагменты генетического материала Rotavirus A, проводится для диагностирования ротавирусной инфекции, клинического разграничения заболеваний желудочно-кишечного тракта и выявления бессимптомных вирусоносителей.

ПЦР анализ кала на ротавирусЗа 3 суток до тестирования следует отменить:

  • Применение слабительных средств.
  • Введение в прямую кишку тампонов с маслами и ректальных суппозиторий.
  • Прием лекарственных препаратов, которые оказывают влияние на перистальтику кишечника (Пилокарпин, Белладонна) и цвет фекалий (сернокислый барий, висмут, железо).

Тип биоматериала: кал

Синонимы (rus): Анализ генетического материала на ротавирус

Синонимы (eng): Analysis of genetic material in the Rotavirus A

Методы исследования: ПЦР

Сроки выполнения: 3-5 дней

Ежегодно во всем мире фиксируются до 25 миллионов случаев ротавирусной инфекции, 1 миллион из которых оканчиваются смертельным исходом. Летальность от ротавируса чаще всего регистрируется у детей в возрасте до 5 лет и у лиц с ослабленной иммунной системой. Очаги заболевания часто возникают в детских садах, школах, домах-интернатах для детей и в домах престарелых. В порядке 80% случаев ротавирусная инфекция развивается по причине недостаточной личной гигиены при банальных бытовых контактах: совместном использовании вещей и предметов, в том числе столовых приборов, игрушек, дверных ручек. К числу иных причин заражения относятся употребление грязных овощей и фруктов, некипяченой воды.

Ротавирусы относятся к семейству Reoviridae, обладающих дву-нитевой сегментированной РНК. На сегодняшний день известно 5 их серотипов. Наиболее распространенным считается Rotavirus A, который является основным «виновником» тяжелого кишечного гриппа у детей. Источник инфекции – больной человек или бессимптомный носитель вируса, заражение происходит фекально-оральным либо воздушно-капельным путем.

Ротавирусная инфекцияРотавирусная инфекция характеризуется сезонными вспышками – чаще всего заболевание развивается в холодное время года. Длительность инкубационного периода – 2 суток. Патологический процесс начинается остро – пациент жалуется на тошноту, рвоту, лихорадку, диарею. Клинические признаки заболевания наиболее выражены у иммуно-некомпетентных лиц, пожилых людей и детей до 2-х лет. Самым опасным последствием кишечного гриппа является длительный период диареи, который приводит к обезвоживанию организма больного, нарушению кислотно-щелочного и водно-солевого баланса.

После перенесенного кишечного гриппа в детском возрасте, повторное заражение рота-вирусами взрослого человека маловероятно. Если это все же происходит, инфекционный процесс протекает без выраженных клинических симптомов, однако больной человек является источником Rotavirus A.

Когда делают анализ?

Молекулярно-генетический анализ  фекалий на ротавирус назначают:

  • при подозрении на наличие у пациента активной рота-вирусной инфекции или носительства вируса;
  • при клиническом разграничении заболеваний, имеющих схожие признаки – пищевого отравления, сальмонеллеза, холеры, кишечной коли-инфекции, дизентерии;
  • при диарее у детей, не достигших трехлетнего возраста;
  • для контроля эффективности проводимой терапии;
  • по требованию эпидемиологов при сложной эпидемиологической ситуации.

Кроме того, при выявлении патологии у нескольких людей в пределах одного коллектива анализ проводится всем членам коллектива.

Симптомы, указывающие на необходимость проведения анализа

Молекулярно-биологическое исследование кала, направленное на обнаружение Rotavirus gr.A целесообразно проводить при наличии следующих патологических признаков:

  • Болит животинтенсивные болевые ощущения в области живота;
  • диарея;
  • кислый запах кала;
  • многократная рвота;
  • лихорадка;
  • общая слабость, утомляемость;
  • потеря аппетита;
  • насморк, болевые ощущения в горле при наличии признаков отравления.

Кто назначает анализ?

Исследование фекалий на Rotavirus gr.A может быть назначено такими специалистами, как:

  • терапевт;
  • педиатр;
  • врач общей практики;
  • гастроэнтеролог;
  • инфекционист.

Правила сбора биологического материала

Перед проведением исследования кала необходимо за сутки исключить употребление алкоголя и продуктов питания, отличающихся повышенной жирностью. Фекалии необходимо собирать после естественного опорожнения кишечника. Применение клизмы категорически запрещено. У женщин не подлежит исследованию кал, полученный в дни менструации.

Перед дефекацией необходимо провести гигиенические процедуры – вымыть промежность (без применения ароматизированных, дезинфицирующих средств) и просушить ее.   Сбор кала следует проводить с чистой, не склонной к впитыванию влаги поверхности. Можно воспользоваться чистым листом бумаги, горшком или подкладным судном. В последних двух случаях емкость предварительно хорошо вымывают, ополаскивают и обдают кипятком. Собирать фекалии из унитаза недопустимо. При сборе кала необходимо исключить попадания в биологический материал посторонних примесей, в качестве которых могут выступать моча, вода, выделения из половых органов. Заполнив контейнер необходимым количеством кала, необходимо плотно закрыть емкость крышкой. Биоматериал необходимо доставить в лабораторию в максимально короткий период времени. Хранение кала допустимо в течение не более 5 часов, биологический материал требуется в таком случае в холодильнике. Замораживание кала запрещено.

При поражении ротавирусной инфекцией в подавляющем большинстве случаев наблюдается изменение структуры фекалий. Так, кал в значительной степени светлеет и в нем часто обнаруживаются такие посторонние компоненты, как примеси крови или слизи.

Методика проведения анализа


Как собрать кал для анализаБиологическим материалом для исследования является образец каловых масс, собирание которого пациент производит в домашних условиях. С этой целью необходимо приобрести в аптечной сети специальный стерильный контейнер с палочкой.
Образец биоматериала собирают после естественного испражнения в день его доставки в лабораторный центр. Контейнер должен быть заполнен фекалиями на 1/3 и не содержать примеси урины.
Для выполнения исследования используют метод ПЦР-диагностики с обратной транскрипцией.


Проведении исследования в динамике

При динамическом наблюдении рекомендуется каждый раз сдавать анализ при идентичных условиях: в том же медицинском учреждении и тем же самым методом, без изменения тестовой системы. Это необходимо для обеспечения максимальной достоверности результатов.


Оптимальное время для проведения исследования

Анализ фекалий на ротавирусы целесообразно проводить на четвертые сутки после возникновения первых симптомов заболевания. В данный период концентрация вируса в кале достигает своих пиковых значений, после чего она будет постепенно снижаться. На девятые сутки патологические микроорганизмы могут вообще не обнаруживаться в биоматериале или же выявляться в незначительном количестве.

Расшифровка анализа


Показатель нормы: «фрагменты генетического материала, специфичного для Rotavirus A, не обнаружены». Это отрицательный результат анализа, который опровергает инфицирование пациента. Положительный результат анализа свидетельствует об активной ротавирусной инфекции.

Для постановки окончательного диагноза учитываются как результаты исследования фекалий на ротавирусы, так и иные сведения, касающиеся состояния пациента: анамнез, общая клиническая картина, итоговые значения иных проведенных анализов. Обязательной оценке подлежат изменения, произошедшие в крови и моче. Так, моча, как правило, приобретает темные тона, а в крови определяется лейкоцитоз.

Что может повлиять на результат?

Профилактика ротавирусной инфекцииНа достоверность исследования на ротавирусы может оказать влияние предшествующая антибиотикотерапия. Она может явиться причиной ложноотрицательного результата. В этой связи анализ с целью оценки проведенного лечения рекомендуется проводить по прошествии как минимум двух недель с момента последнего приема антибактериальных препаратов.

Наряду с этим, результат исследования может быть искажен при использовании для сбора кала нестерильной емкости, при нарушении требований к хранению биоматериала, его позднем доставлении в медицинскую лабораторию. Изменить итоговые значения может и значительное количество алкогольных напитков, выпитых накануне проведения анализа и употребление перед исследованием жирной пищи.

Профилактика ротавирусной инфекции

В целях предотвращения развития ротавирусной инфекции необходимо придерживаться ряда рекомендаций:

  • частое основательное мытье рук (после пребывания на улице, после посещения общественных мест, перед едой);
  • тщательное мытье овощей и фруктов перед их употреблением;
  • регулярная влажная уборка дома, частое проветривание помещения;
  • своевременная замена нательного белья, постельных принадлежностей;
  • использование только индивидуальных средств гигиены;
  • употребление кипяченой или очищенной воды.