ПЦР анализ мазка на вирус гриппа

Доронин Иван Михайлович
Доронин Иван Михайлович Заведующий отделом ПЦР и генетики,

Анализ мазка на вирус гриппа


Молекулярно-биологическое исследование мазков со слизистой оболочки ротоглотки, которое позволяет обнаружить фрагменты генетического материала вирусов гриппа (Influenza virus) А, B и подтипа А/H1N1, проводится для диагностирования гриппа.
ПЦР анализ мазков на вирус гриппа

Подготовка к исследованию:

  • Накануне необходимо исключить использование антибактериальных средств  для полоскания горла
  •  Утром не чистить зубы, не завтракать и не пить

Тип биоматериала: мазок со слизистой оболочки ротоглотки

Синонимы (rus): РНК-вирусы 

Синонимы (eng): RNA virus

Методы исследования: ПЦР

Сроки выполнения: 1-3 дня


Influenza virus относится к семейству Orthomixoviridae и является оболочечным, имеющим сегментированный негативный РНК-геном, вирусом. На основании различий структуры нуклеопротеидов (комплексов нуклеиновых кислот с белками, содержащихся в каждой клетке и выполняющих функцию хранения и реализации генетической информации) различают 3 серотипа вирусов. Наиболее опасными считаются:
  • А – может инфицировать как человека, так и животного. Именно он несет ответственность за сезонные эпидемии гриппа и пандемию. В соответствии со структурными различиями поверхностных белковых компонентов, данный тип вируса подразделяют на подтипы (на сегодняшний день их известно около 30). Наиболее высоко-патогенным считается вирус свиного гриппа – H1N1, который может привести к летальному исходу.
  • B – вызывает сезонные вспышки гриппа у людей.

В связи с высокой степенью опасности гриппа и скорости его распространения, практикующим специалистам необходимо в кратчайший срок идентифицировать вирус, поставить окончательный диагноз и назначить противовирусное лечение. С этой целью пациенты с симптомами Influenza-ассоциированной инфекции дыхательных путей подлежат исследованию мазков из ротоглотки.

Согласно данным Всемирной организации здравоохранения, в период ежегодных эпидемий гриппа порядка трёх-пяти миллионов жителей земного шара оказываются в тяжелом состоянии, а более полумиллиона больных умирают от данной патологии. 

Особенности клинической картины

Симптомы гриппаДля вируса гриппа характерен непродолжительный инкубационный период, который может варьировать от 10 часов до 9 дней. Источник инфекции – человек. Путь передачи вируса чаще всего воздушно-капельный, реже – контактный. В отличие от других ОРВИ, грипп практически всегда имеет внезапное, острое начало. Инфицирование сопровождается стремительным ухудшением самочувствия, подъемом температуры, сухим кашлем, болевыми ощущениями в горле, ломотой в суставах и болью в мышцах.

В большинстве случаев наблюдается легкое или среднетяжелое течение заболевания. При тяжелой форме поражению подвергаются нижние дыхательные пути, в связи с чем возникает вероятность развития серьезных патологических состояний.

Значение ранней диагностики вируса гриппа

Своевременная диагностика гриппа, проведение противовирусной терапии на начальной стадии развития заболевания улучшает прогноз болезни и снижает вероятность развития возможных осложнений. Достоверно выявить грипп на раннем этапе его развития позволяет молекулярно-биологическое исследование, проводимое методом ПЦР.

Пациенты со здоровой, активно функционирующей иммунной системой, переносят грипп относительно легко. При этом выздоровление наблюдается по прошествии 5-7 дней с момента начала течения заболевания. Однако у людей, входящих в группу риска, грипп часто приобретает тяжелое течение, сопровождающееся развитием серьезных, даже угрожающих жизни, осложнений. Наиболее уязвимыми являются следующие категории населения:

  • дети, возраст которых не превышает 5 лет;
  • пожилые, старше 65-летнего возраста;
  • лица, имеющие хронические заболевания;
  • беременные женщины;
  • ВИЧ-инфицированные;
  • получатели иммуносупрессивной терапии.

Осложнения после гриппа могут быть умеренными (например, развитие отита или синусита) и тяжелыми (бронхит, пневмония). На фоне инфицирования гриппом может протекать воспаление мышц, головного мозга, тканей сердца. Не исключено развитие сепсиса, усугубление процесса протекания имеющихся у пациента хронических патологий. Опасными осложнениями гриппа также являются менингоэнцефалит, менингит.

Когда делают анализ?


Мазок на вирус гриппаПроведение ПЦР анализа мазков на вирус гриппа необходимо при наличии у пациента клинических признаков:
  • ОРВИ – лихорадки, головной и мышечной боли, сухого кашля, светобоязни, одышки, болезненных ощущений в горле и грудной клетке;
  • острого диффузного поражения тканей головного мозга (энцефалопатии) во время эпидемической вспышки гриппа – судорог, расстройства координации движений, нарушения сознания.

Подготовка ко взятию биоматериала для исследования

В качестве биологического материала используется мазок со слизистой ротоглотки. Забор биоматериала необходимо проводить до начала лекарственной терапии. При проведении анализа для оценки эффективности лечения, взятие проб выполняется по прошествии не менее двух недель после завершения приема лекарственных средств локального действия и не менее месяца после окончания системной терапии.

При подготовке к забору биологического материала необходимо придерживаться ряда рекомендаций:

  • за 5 суток до процедуры запрещено использование антисептических спреев (мирамистин, хлоргекседин);
  • за 6 часов до взятия мазка не применять лекарственные средства для рассасывания и орошения горла и полости рта;
  • за 3 часа до получения биоматериала исключить прием пищи и употребление любых напитков;
  • в день процедуры нельзя проводить чистку зубов, использовать средства, освежающие дыхание (жевательная резинка, мятные пастилки и т.п.);
  • перед взятием мазка проводится полоскание ротовой полости чистой питьевой водой;
  • в случае, если в полости носа отмечается высокая концентрация слизи, перед забором биоматериала необходимо провести высмаркивание. 

Важные дополнения

Вирус гриппаВ случае неосложненного гриппа, протекающего у иммунокомпетентных лиц, процесс вирусовыделения, происходящий в верхних дыхательных путях, обычно в значительной мере уменьшается после четвертого дня с начала заболевания. В этой связи снижается также вероятность выделения вируса. По этой причине у указанной группы пациентов взятие мазка со слизистой оболочки ротоглотки должно быть проведено в первые 3 дня болезни, когда выделение возбудителя является максимальным. В случае поражения инфекцией нижних дыхательных путей, а также у лиц с ослабленным иммунитетом, выделение вируса продолжается более длительный период времени.

Кроме того, период ожидания результата проведенного молекулярно-биологического исследования или получение его отрицательных значений при выраженной клинической картине не являются основанием для отказа от противовирусной терапии.

Методика проведения анализа


Процедура отбора мазка со слизистых покровов ротоглотки безболезненна, квалифицированный медицинский специалист выполняет следующие действия:
  • осматривает язык, миндалины, зев пациента и определяет место взятия мазка;
  • для улучшения обзора ротоглотки, слегка прижимает корень языка шпателем;
  • осторожно извлекает из пробирки стержень со стерильным ватным тампоном и проводит им по слизистым покровам горла и миндалин;
  • быстро извлекает стержень из ротовой полости и осторожно опускает его в стерильную пробирку.
Для выполнения исследования используют метод полимеразной цепной реакции в режиме реального времени.

Что может оказать влияние на результат?

  • Длительность периода течения болезни (по прошествии 4 суток велика вероятность необнаружения возбудителя гриппа).
  • Исследуемый образец биоматериала – при мазке из ротоглотки, если инфекции подверглись нижние дыхательные пути, вирус может не выявляться. В такой ситуации рекомендовано повторное прохождение исследования, биоматериалом для которого должно являться отделяемое нижних дыхательных путей.

Расшифровка анализа

Расшифровка анализаРезультаты анализа на вирус гриппа должны быть расшифрованы лечащим врачом. Окончательный диагноз ставится на основе обобщенной оценке анамнеза пациента, клинической картины патологии, результатов всех проведенных лабораторных анализов и инструментальных методов диагностики, при наличии таковых. Необходимо учитывать, что обнаруженная вирусная РНК не во всех случаях является свидетельством жизнеспособности вируса или его активного процесса размножения. Самостоятельная интерпретация полученных итоговых значений не допустима, поскольку может привести к неверной их трактовке.

Результат анализа «фрагменты генетического материала, специфичные для Influenza virus А, B и А/H1N1, не обнаружены» - отрицательный, опровергающий заражение пациента одним из серотипов вируса гриппа.
Положительный результат анализа свидетельствует о наличии у пациента Influenza-ассоциированной инфекции.