ПЦР анализ мокроты на Streptococcus pneumoniae

Доронин Иван Михайлович
Доронин Иван Михайлович Заведующий отделом ПЦР и генетики,

Анализ мокроты на Streptococcus pneumoniae


Молекулярно-биологическое исследование, которое позволяет изучить мокроту (индуцированную мокроту, фаринго-трахеальные аспираты) и обнаружить фрагменты генетического материала Streptococcus pneumoniae, проводится для диагностирования пневмококковой инфекции, клинического разграничения инфекционно-воспалительных и аллергических заболеваний органов дыхательных путей.

Streptococcus pneumoniaeПодготовка к исследованию:

  • Заранее приобрести в аптечной сети специальный стерильный контейнер.
  •  Накануне процедуры в течение суток принимать отхаркивающие средства – это усилит отделение мокроты (по рекомендации врача).

Тип биоматериала: мокрота

Синонимы (rus): Пневмококк, неподвижный ланцетовидный диплококк

Синонимы (eng): Pneumococcus, fixed lanceolate diplococci

Методы исследования: ПЦР

Сроки выполнения: 1-3 дня

Streptococcus pneumoniae (или пневмококк) представляет собой условно-патогенную бактерию семейства стрептококков. Данный микроорганизм локализуется в верхнем дыхательном тракте и провоцирует развитие воспалительных процессов. Инфекция передается воздушно-капельным путем, известны случаи заражения через пищевые продукты и столовую посуду.

В первую очередь бактерии осеменяют слизистые покровы носа и горла, вырабатывая особый антиген, который подавляет функциональную деятельность иммунной системы человека. Пневмококк вызывает развитие хронического бронхита, бронхиальной астмы, внебольничной пневмонии, менингита и сепсиса. Этим патологическим процессам наиболее подвержены:
  • дети;
  • лица пожилого возраста;
  • пациенты с ВИЧ-инфекций;
  • люди, страдающие алкоголизмом и наркоманией.
Для выявления пневмококка практикующие специалисты используют результаты бактериологического посева, микроскопического исследования мокроты, серологического скрининга и цитогенетического тестирования.

Streptococcus pneumoniae у мужчин, по сравнению с женщинами, диагностируются в два раза чаще. В подавляющем большинстве случаев данная бактериальная инфекция возникает на фоне таких заболеваний, как грипп, ветряная оспа, корь, внезапная экзантема, коклюш. Самыми часто встречаемыми клиническими проявлениями пневмококковой инфекции являются пневмонии (до 80%) и остро протекающий средний отит (до 60%). Также Streptococcus pneumoniae могут стать причиной развития синуситов (45%) и менингита (до 26% случаев). Наиболее часто Streptococcus pneumoniae поражает организм детей, возрастом от одного месяца до двух лет. Вспышки пневмоккоковой инфекции нередко наблюдаются в таких учреждениях как: детский сад, школа, детский дом-интернат, тюрьма, дом престарелых и инвалидов, военная часть, то есть в закрытых коллективах.

Факторы риска

Факторы рискаГруппу риска по развитию заболеваний, вызываемых Streptococcus pneumoniae, составляют пациенты, у которых диагностированы:

  • хронические патологии дыхательной и сердечно-сосудистой системы;
  • цирроз печени, сахарный диабет, болезнь Ходжкина;
  • онкогематологические болезни;
  • подтекание спино-мозговой жидкости;
  • серповидно-клеточная анемия;
  • анатомическая аспления.

Когда делают анализ?


Проведение молекулярно-биологического исследования мокроты на Streptococcus pneumoniae методом ПЦР необходимо при наличии у пациента:
  • повышенной температуры;
  • повышенной потливости;
  • общего недомогания;
  • кашля с отхождением мокроты;
  • клинических проявлений внебольничной пневмонии – лихорадки, одышки, болезненных ощущений в грудной клетке, кашля с выделением «ржавого» патологического секрета.

Молекулярно-биологическое исследование на пневмококк проводится:

  • при подозрении на менингит, острый отит, синусит, септическое состояние;
  • для дифференциальной диагностики возбудителя пневмонии или бронхита;
  • при частых инфекциях верхних дыхательных путей;
  • при стертом течении легочной инфекции у лиц, страдающих иммунодефицитом;
  • с целью контроля эффективности проводимой терапии.

Правила сбора мокроты

Мокрота представляет собой патологический секрет легких, бронхов, гортани и трахеи, отделяемый при кашле. Для правильного получения мокроты, как биологического материала для исследования на Streptococcus pneumoniae, следует соблюдать ряд рекомендаций:

  • Правила сбора мокротысобирать мокроту лучше всего после пробуждения;
  • за 12 часов необходимо исключить употребление пищи и любых напитков, кроме обычной воды;
  • за 2 часа до сбора биоматериала не курить;
  • в день проведения процедуры не допустимо чистить зубы, использовать средства для освежения дыхания;
  • перед получением мокроты ротовую полость нужно основательно несколько раз прополоскать водой;
  • собирать необходимо только мокроту, отделяемую в процессе глубокого кашля;
  • легочный секрет сплевывают в контейнер, после чего емкость плотно закрывают крышкой;
  • в процессе сбора требуется исключить попадание в емкость слюны или носоглоточной жидкости;
  • объем собранной мокроты должен быть как минимум 3 мл для взрослых и порядка 1 мл для детей;
  • биоматериал следует доставить в лаборатории в самые сжатые сроки (максимально допустимое время – 4 часа). При необходимости, его хранение возможно при плюсовой температуре от 2 до 8 градусов. 

Сбор мокроты не рекомендуется выполнять при проведении противовирусной или антибактериальной терапии. Исследование целесообразно выполнять по прошествии двух недель с даты последнего приема антибактериальных или противовирусных лекарственных средств.

Методика проведения анализа


Для выполнения анализа используют методику полимеразной цепной реакции в режиме реального времени. Основные ее преимущества – это отсутствие ложно-позитивных результатов.

Особенности получения индуцированной мокроты  

Индуцированную мокроту, в отличии от обычной мокроты, получают в стационарных условиях после проведения пациенту раздражающей ингаляции. Ее сбор показан в следующих случаях:

  • при наличии симптомов заболеваний бронхов и легких при отсутствии мокроты;
  • при наличии подтвержденных рентгенологическим путем изменениях в легких, сопровождающихся сухим кашлем и скудным выделением мокроты.

Раздражающие ингаляции проводятся при использовании небулайзера, компрессорного или ультразвукового. Ингалируемой смесью выступает пятипроцентный раствор NaCl. Далее, с целью стимуляции процесса отхождения мокроты, специалист проводит постукивания по грудной клетке пациента. После чего пациент откашливает мокроту (в количестве 3 мл для взрослых и 1 мл для детей) в специальный стерильный контейнер.

Особенности получения трахеального аспирата

Методика анализа на Streptococcus pneumoniaeТрахеальный аспират, как биологический материал, в котором могут быть обнаружены Streptococcus pneumoniae, получают через эндотрахеальную трубку в условиях медицинского учреждения.  Перед манипуляцией пациент, по указанию врача, делает 2-3 глубоких вдоха, после чего на несколько секунд задерживает дыхание и с силой выдыхает. Это вызывает продуктивный кашель. В ротовую полость вводится катетер вакуум-аспиратора, предназначенный для забора трахеального аспирата, который предварительно подсоединяют к эндотрахеальной трубке. Провоцируется кашлевой рефлекс и с помощью отсоса проводится получение трахеального содержимого через введенный катетер. Биологический материал в количестве не менее 3 мл помещается в стерильный контейнер.

Расшифровка анализа


Показатель нормы: «фрагменты ДНК, специфичные для Streptococcus pneumoniae не обнаружены». Этот результат анализа отрицательный и свидетельствует об отсутствии у пациента пневмококковой инфекции.

Положительный результат анализа подтверждает инфицирование пневмококком.

Поскольку большое количество пациентов являются бессимптомными носителями Streptococcus pneumoniae, результат молекулярно-биологического исследования может расшифровываться исключительно врачом. При этом при постановке диагноза учитываются лабораторные и клинические признаки патологий, анамнез пациента, а также предъявляемые им жалобы.

Профилактика заболеваний, вызываемых Streptococcus pneumoniae

Единственным эффективным способом профилактики пневмококка является вакцинация. С 2013 года вакцина от пневмококковой инфекции включена в Национальный календарь профилактических прививок. Популярными вакцинами против пневмококка являются «Превенар 13» и «Пневмовакс 23».