Trichomonas vaginalis (количественно)


Молекулярно-биологическое исследование на Trichomonas vaginalis (количественно)


анализ на Trichomonas vaginalis (кличественно) в Сочи (Адлер)Молекулярно-биологическое исследование на Trichomonas vaginalis базируется на обнаружении ДНК микроба в полученном биоматериале, из которого выделяют присущий Trichomonas vaginalis ген способом накопления его в амплификаторе.

Это наиболее чувствительный метод определения инфекционного агента (14ГЭ/мл).

Исследование на трихомонаду проводят


  • для уточненения диагноза при клинических признаках заболевания;
  • при беременности и отягощённом гинекологическом анамнезе;
  • перед хирургическим вмешательством в брюшной полости;
  • для освидетельствования половых партнёров;
  • для скрининга лиц моложе 25 лет, имеющих непостоянного полового партнёра;
  • при оценке исхода лечения трихомониаза.


Подготовка к анализу на Trichomonas vaginalis


Пациенту до сдачи соскоба для анализа на
Trichomonas vaginalis рекомендуется соблюдать следующие правила:

  1. Забор материала не проводится в дни менструаций и в течение 3 дней после у женщин;
  2. За два дня до анализа необходимо воздержаться от сексуальной активности;
  3. Перед исследованием недопустимо подмываться – гигиенические процедуры проводятся вечером накануне исследования;
  4. Интравагинальные спринцовки до исследования запрещены;
  5. За несколько дней до исследования стоит отменить прием антибиотиков и гормональных средств, а также использование вагинальных свечей, если таковые применялись;
  6. Предупредите врача о принимаемых лекарствах, так как некоторые из них могут повлиять на результат анализа;
  7. Рекомендуется не мочиться за 2 часа до анализа.

Метод ПЦР


После 30-45 циклов копирования концентрация ДНК доходит до 109-1011 копий. Для их учёта используются два способа:

  1. Электрофоретический.
  2. Гибридизационно-флуоресцентный.

При электрофорезе наличие гена Trichomonas vaginalis обнаруживается по флуоресцирующей полосе, расположенной на одном уровне с продуктом положительного КО (контрольного образца).

Гибридизационно-флуоресцентный способ  предполагает использование ДНК-зондов.

Флуоресцентный сигнал регистрируют:

  • по "конечной точке" как соответствие уровней сигнала в испытуемом образце  и фонового знака материала, не содержащего ДНК;
  • "в режиме реального времени" ― при регистрации сигналов от каждой зафиксированной мишени появляется кривая, отражающая накопление продуктов ДНК Trichomonas vaginalis.

Анализ результатов на Trichomonas vaginalis


Анализ проводят на основе использования контрольных образцов:

  1. Внутренний КО нужен для контроля за соблюдением параметров амплификации ― если он не выявлен в итоге, значит, анализ необходимо повторить.
  2. Положительный КО контролирует качество амплификации ― если он не выявлен, значит,  для анализа брали некачественные реагенты или неисправная аппаратура.
  3. Отрицательный КО ― не должен содержать ДНК вагинальные  трихомонады.

Нормой считается отрицательный результат ПЦР.

При положительном итоге выдаются количественные данные.

Количественный анализ на Trichomonas vaginalis


Для определения концентрации Tr. vaginalis используют ДНК-стандарты (калибровочные образцы). Их добавляют в каждую реакцию амплификации. По их сигналам выстраивают калибровочную линию ― в сравнении с  ней находят концентрацию возбудителя в клиническом образце. Проводят сравнение кинетики накопления РНК или ДНК в стандартном и исследуемом образцах.

Для количественного ПЦР- или НАСБА-анализов  требуется высокая степень очистки препаратов ДНК или РНК.

Для контроля точности подсчёта применяют калиброванные внутренние КО. Например, коммерческий количественный стандарт Trichomonas vaginalis  ATCC® 30001D (США).