Trichomonas vaginalis (количественно)

Молекулярно-биологическое исследование на Trichomonas vaginalis базируется на обнаружении ДНК микроба в полученном биоматериале, из которого выделяют присущий Trichomonas vaginalis ген способом накопления его в амплификаторе.

Это наиболее чувствительный метод определения инфекционного агента (14ГЭ/мл).

Исследование на трихомонаду проводят

• для уточненения диагноза при клинических признаках заболевания;
• при беременности и отягощённом гинекологическом анамнезе;
• перед хирургическим вмешательством в брюшной полости;
• для освидетельствования половых партнёров;
• для скрининга лиц моложе 25 лет, имеющих непостоянного полового партнёра;
• при оценке исхода лечения трихомониаза.

Пациенту до сдачи соскоба для анализа на Trichomonas vaginalis рекомендуется соблюдать следующие правила:

1. Забор материала не проводится в дни менструаций и в течение 3 дней после у женщин;
2. За два дня до анализа необходимо воздержаться от сексуальной активности;
3. Перед исследованием недопустимо подмываться – гигиенические процедуры проводятся вечером накануне исследования;
4. Интравагинальные спринцовки до исследования запрещены;
5. За несколько дней до исследования стоит отменить прием антибиотиков и гормональных средств, а также использование вагинальных свечей, если таковые применялись;
6. Предупредите врача о принимаемых лекарствах, так как некоторые из них могут повлиять на результат анализа;
7. Рекомендуется не мочиться за 2 часа до анализа.

Метод ПЦР

После 30-45 циклов копирования концентрация ДНК доходит до 109-1011 копий. Для их учёта используются два способа:

1. Электрофоретический.
2. Гибридизационно-флуоресцентный.

При электрофорезе наличие гена Trichomonas vaginalis обнаруживается по флуоресцирующей полосе, расположенной на одном уровне с продуктом положительного КО (контрольного образца).

Гибридизационно-флуоресцентный способ  предполагает использование ДНК-зондов.

Флуоресцентный сигнал регистрируют:

• по "конечной точке" как соответствие уровней сигнала в испытуемом образце  и фонового знака материала, не содержащего ДНК;
• "в режиме реального времени" ― при регистрации сигналов от каждой зафиксированной мишени появляется кривая, отражающая накопление продуктов ДНК Trichomonas vaginalis.

Анализ результатов на Trichomonas vaginalis

Анализ проводят на основе использования контрольных образцов:

1. Внутренний КО нужен для контроля за соблюдением параметров амплификации ― если он не выявлен в итоге, значит, анализ необходимо повторить.
2. Положительный КО контролирует качество амплификации ― если он не выявлен, значит,  для анализа брали некачественные реагенты или неисправная аппаратура.
3. Отрицательный КО ― не должен содержать ДНК вагинальные  трихомонады.

Нормой считается отрицательный результат ПЦР.

При положительном итоге выдаются количественные данные.

Количественный анализ на Trichomonas vaginalis

Для определения концентрации Tr. vaginalis используют ДНК-стандарты (калибровочные образцы). Их добавляют в каждую реакцию амплификации. По их сигналам выстраивают калибровочную линию ― в сравнении с  ней находят концентрацию возбудителя в клиническом образце. Проводят сравнение кинетики накопления РНК или ДНК в стандартном и исследуемом образцах.

Для количественного ПЦР- или НАСБА-анализов  требуется высокая степень очистки препаратов ДНК или РНК.

Для контроля точности подсчёта применяют калиброванные внутренние КО. Например, коммерческий количественный стандарт Trichomonas vaginalis  ATCC® 30001D (США).