Иммуногистохимия: рак молочной железы

Рак молочной железы - комплексный иммуногистохимический профиль PR, ER /HER-2/neu/ Ki-67

Иммуногистохимическое исследование при раке молочной железы проводится для полноценной комплексной оценки гормональной активности злокачественной опухоли органа.

Характеристики исследования:

• Тип биоматериала: Образец ткани (биоптат) опухолевого образования молочной железы
• Синонимы (rus): Определение рецепторного статуса рака молочной железы
• Синонимы (eng): Determination of the receptor status of breast cancer
• Метод исследования: Гистологический метод

Рак молочной железы и диагностика рецепторов

Рак молочной железы  - злокачественный процесс, протекающий с инфильтрацией тканей органа, исходящий из железистых клеток. Внешне хорошо заметен, образует грубую деформацию органа. Пальпаторно безболезненный узел, плотно окруженный соседними тканями. Даже при современном уровне медицины, приводит к смерти более 17 процентов пораженных женщин.

Гормональный профиль PR, ER /HER-2/neu/ Ki-67 - это диагностика всех доступных рецепторов, которые отвечают за активность раковой ткани. Включает в себя исследование нескольких показателей.

PR, ER  - это специфические белки-рецепторы, которые реагируют на выработку эстрогенов и прогестерона. Большинство раковых образований молочной железы (около 80 процентов) активно реагируют на изменения фона гормонов. Определение реактивности этих рецепторов играет важнейшую роль при оценке возможностей терапии гормонами.

HER-2/neu  - это генная белковая структура, которая расположена в раковой ткани. Представляет собой рецептор, который реагирует на выработку специфических антител. Исследовать данный параметр целесообразно с точки зрения определения прогноза лечения рака. При высокой активности HER-2/neu опухоль плохо поддается лечению, требуется сначала моноклональная терапия, направленная на подавление активности этой структуры.

Ki-67 - это белковая структура, обладающая способностью активизироваться при активном росте опухоли. Исследование этого показателя дает возможность оценить прогноз для жизни больного. Чем выше экспрессивные характеристики Ki-67, тем меньше опухолевая дифференцировка, тем меньше шансов у больной женщины на выздоровление.

Иммуногистохимическое исследование

Иммуногистохимическое исследование имеет узкую специфику. Применяется только у женщин, имеющих гистологически верифицированный рак молочной железы.

Целью анализа является оценка прогноза выживаемости больной, а также выяснение перспектив лечения гормонами.

Осуществляется прямая биопсия ткани молочной железы. Так как для диагностики HER-2/neu требуется значительное количество материала, то наилучшим способом является открытая биопсия или секторальная резекция ткани опухоли. Процедура только плановая.

После доставки материала в лабораторию, проводится изготовление предметных стекол с материалом для ER и PR, Ki-67. Для исследования HER-2/neu материал фиксируется в парафиновом блоке. Затем обрабатываются ткани специфическими маркерами с антителами, при этом активные рецепторы меняют окраску и четко видны под микроскопом. Врач оценивает их количество.

Важность исследования

Злокачественный процесс в тканях молочной железы распространен среди многих пациенток, часто становится причиной летального исхода при отсутствии своевременной диагностики и проведения методов терапии. Поэтому важно не только установить дифференциальный диагноз рака молочной железы, но и отследить некоторые параметры патологического процесса. Это осуществимо при помощи иммуногистохимического исследования, благодаря которому оценивают степень восприимчивости новообразования к влиянию гормонов прогестерона и эстрогена. Эти вещества часто вызывают опухоли в сочетании с влиянием других факторов, а также способствуют быстрому размножению атипичных клеток.

Если не провести иммуногистохимическое исследование, могут развиться следующие осложнения на фоне неправильно подобранной терапии:

• активное разрастание структуры опухоли, которая впоследствии сдавливает соседние здоровые ткани, ухудшая их функциональность и вызывая повреждения;
• перемещение атипичных клеток по системному кровотоку и лимфе, что способствует развитию метастазов, в данном случае часто наступает летальный исход;
• выход структуры опухоли за пределы капсулы, она начинает прорастать в соседние здоровые ткани, поэтому при выборе хирургического вмешательства необходимо удалять не только новообразование, но и всю молочную железу;
• ухудшение прогноза развития заболевания, может значительно снижаться качество жизни или наступать летальный исход.

Иммуногистохимическое исследование проводят только по строгим показаниям, так как для сбора биоматериала требуется инвазивная процедура. Необходимо получить большое количество тканей, поэтому выбирают открытый доступ. Это болезненное вмешательство, после которого проходит продолжительный восстановительный период. Но только через эту методику можно получить достаточное количество тканей, чтобы провести иммуногистохимическое исследование для полноценной оценки структуры клеток. Полученные данные помогают составить правильный диагноз, определить качественные методы терапии, которые вызовут максимальный эффект и восстановят состояние молочных желез.

Для чего необходим анализ

В процессе проведением иммуногистохимического исследования для оценки гормонального профиля, к которому чувствительна раковая опухоль молочной железы, определяют следующие данные:

• степень чувствительности атипичных клеток к гормонам прогестерону и эстрогену;
• определение диагноза гормонозависимой раковой опухоли;
• составление прогноза, который может быть благоприятным при выявлении патологии на 1 или 2 стадии, или неблагоприятным на поздних этапах, повышенной чувствительности клеток к гормонам, высокой степени агрессивности злокачественного процесса;
• определение оптимальных методов терапии, так как при выявлении гормонозависимой опухоли можно подобрать методы, которые заблокируют влияние гормонов на злокачественные клетки в молочной железе.

Важно помнить, что на основании полученных данных не определяют дифференциальный диагноз. Но эти данные помогают в проведении терапии. Поэтому анализ проводят уже после подтверждения диагноза, обычно в процессе удаления опухоли.

Особенности анализа

Для иммуногистохимического исследования при оценке гормонального профиля характерны следующие особенности:

• биоматериалом служат ткани опухоли, которые получают в ходе открытого хирургического вмешательства, при этом хирургу необходимо изъять кусочки из разных очагов, чтобы не упустить всех данных по параметрам новообразования;
• перед исследованием необходимо провести подготовку, как для стандартного хирургического вмешательства – последний период употребления пищи за 8-10 часов, жидкости за 3 часа, запрет употребления алкоголя за 1-2 дня, отказ от лекарственных средств, указанных лечащим врачом за 1 неделю (чаще всего это гормональные препараты);
• полученные образцы тканей сразу же обрабатывают парафином, так как только в таком виде они сохраняются в первоначальной форме, а клеточный состав не отмирает;
• для создания микропрепаратов первоначально удивляют парафин, затем добавляют реагенты, только на последнем этапе микроскопируют для изучения гормонального профиля и клеточного состава;
• на основании теста не определяют диагноз, обычно он уже подтвержден через другие лабораторно-инструментальные анализы;
• благодаря исследованию можно определить качество назначаемого лечения, своевременно откорректировать действующие вещества и дозы лекарств, поменять консервативные на хирургические тактики;
• суть исследования сводится к обнаружению комплексов антиген-антитело, наличие которых свидетельствует о чувствительности клеток новообразования к различным видам гормонов.

При сдаче биоматериала на анализ важно учитывать, что результаты придут не сразу, а спустя 5-7 дней. Это связано с многоступенчатостью, сложностью методики. Цитологу требуется продолжительный период для полноценного изучения иммунных комплексов под микроскопом.

Создание микропрепаратов

В процессе хирургического вмешательства извлекают большое количество крупных кусочков злокачественной опухоли, которые сразу же обрабатывают парафином. Только в таком виде доступно их перемещение в лабораторию, где приступают к последовательным этапам создания микропрепаратов:

• изъятие тканей из парафина, чтобы появилась возможность дальнейшей обработки, нарезания на тонкие слои;
• расположение каждого среза на отдельное приметное стекло, которое предварительно было стерилизовано в автоклаве;
• добавление реагента с ферментами, которые создают условия для возвращения антигенной активности;
• внесение протеинового блока, чтобы выделить области тканей для окрашивания;
• нанесение реагента на основе антител, чтобы создать комплексы антиген-антитело, но так как они продолжительно связываются между собой, проводят дополнительную инкубацию для ускорения процесса;
• внесение еще одного реагента с системой детекции, после чего проводят очередную инкубацию;
• нанесение гематоксилина на поверхность образца, чтобы он окрасил все клетки для просмотра через микроскоп;
• дегидратация исследуемой ткани;
• закрепление покровочного стекла на образец.

В таком виде содержащиеся клетки и иные компоненты не будут видоизменяться, поэтому врач-цитолог сможет провести полноценную микроскопию.

Микроскопия

Диетолог применяет современный микроскоп, который отслеживает комплексы антиген-антитело при помощи идентификации специфического свечения, которое издает метка. Если обнаружен участок с содержанием подобных комплексов, можно провести фотофиксацию, чтобы сохранить изображение и тщательно изучить его уже после микроскопии.

В процессе изучения микропрепарата под микроскопом выявляют участки с содержанием иммунных комплексов, а также проводят их полноценный расчет. На основании выявленных иммунных комплексов можно составить полноценную картину о гормональном профиле, который включает в себя различные белковые структуры и рецепторы – PR, ER, HER-2/neu, Ki-67. 

Расшифровка анализа

В заключении указываются четыре параметра, включающие оценку экспрессии гормональных рецепторов PR, ER и Ki-67, а также балльное количество HER-2/neu. Помимо этого, четвертой характеристикой является гистологическая структура опухоли. Результат пересылается онкологу, который сопоставляет возможности лечения опухоли и прогноз.