Консультация с изготовлением гистологических препаратов

Изготовление гистологических препаратов с парафиновых блоков (1-2 блока) и консультация

Консультация с изготовлением гистологических препаратов с парафиновых блоков - это исследование образцов тканей, уже заключенных в парафин (как правило, повторное). Применяется для уточнения диагноза.

Показания для консультации

Гистологическое исследование тканей с помощью оптического микроскопа является достаточно точным методом, позволяющим определить характер патологических изменений в ткани. Гистологический анализ используется для дифференциальной диагностики новообразований, отслеживания динамики онкологических заболеваний, диагностики гинекологических заболеваний и заболеваний желудочно-кишечного тракта.

Повторное гистологическое исследование может потребоваться для подтверждения диагноза. Более тщательное исследование проводится с целью определения стратегии лечения, в том числе объема удаляемой ткани при необходимости хирургического вмешательства.

Изготовление гистологических препаратов

Биоматериалом для гистологического анализа являются ткани органов заключенные в парафиновые блоки, полученные ранее в ходе биопсии или при операции. Как правило, в образцах содержится наиболее измененный участок ткани, а также участок, граничащий со здоровой тканью.

С помощью микротома из образцов, заключенных в парафин, получают серийные срезы толщиной 1-50 микрон (0.001-0.05 мм). Чем больше срезов изготовлено для образца ткани, тем точнее будет заключение. Полученные срезы помещаются на предметные стекла и, после окрашивания, заключаются под покровное стекло. При помощи наиболее часто используемой окраски - гематоксилин-эозина - можно получить общие сведения о морфологии тканей и составляющих ее клеток. Существуют и другие варианты окрасок, которые дают дополнительную информацию об исследуемом образце. Готовые гистологические препараты исследует врач-патоморфолог с помощью оптического микроскопа.

Важность исследования

Ежедневно различные наружные и внутренние ткани каждого человека подвергаются негативным факторам. Чаще всего срабатывают компенсаторные механизмы, которые устраняют негативное влияние, поэтому поддерживают функциональность и структуру ткани в норме. Но в некоторых случаях происходят поломки, которые влияют на клетки. Именно такие поломки можно отследить при помощи создания гистологических препаратов с парафиновых блоков, из которых в дальнейшем готовят микропрепараты для оценки клеточной структуры под микроскопом. Важность исследования заключается в следующих пунктах:

• тщательное изучение всей клеточной структуры – мембрана, цитоплазма, органеллы, ядра, ядрышки;
• возможность определения посторонних структур, которые в норме не должны присутствовать в данной ткани – белки, соединительнотканные волокна, патогенные микроорганизмы, атипичные клетки;
• выявление патологических очагов даже в том случае, если негативная симптоматика не проявляется, хотя болезнь уже начала развиваться (например, часто кусочки тканей берут для профилактического обследования в ходе выполнения операции для других целей);
• изучение развития болезни в динамике, если для нее свойственен хронический процесс, на протяжении которого состояние клеток и тканей может ухудшаться или улучшаться.

Существует множество исследований для выявления онкологии. Но все они дают информацию опосредовано. Например, если врач подозревает раковую опухоль, он может изучить онкомаркеры в системном кровотоке. Но они содержатся там и при отсутствии рака. Если выполнить гистологическое исследование, можно изучить клеточную структуру ткани в точности, выявив возможность развития атипичных клеток даже на ранних этапах развития, когда патология еще не влияет системно.

Для чего необходим анализ

Микроскопическое исследование изготовленных гистологических препаратов с парафиновых блоков необходимо для получения важной информации:

• дифференциальная диагностика доброкачественной или злокачественной опухоли, если она была выявлена в ходе других исследований, например, при помощи УЗИ;
• дифференциальная диагностика злокачественной опухоли и других системных заболеваний, которые могут приводить к схожим признакам;
• оценка возможности содержания патологических структур, которые в норме не должны появляться в исследуемых тканях (например, при амилоидозе, бактериальной или грибковой инфекции);
• степень тяжести патологического процесса – легкая, средняя, тяжелая (в зависимости от степени распространения патологических включений);
• подбор оптимальных методов терапии, которые будут применимы для выявленных отклонений (лечение можно назначать сразу же, так как в большинстве случаев гистологическое исследование определяет дифференциальный диагноз);
• эффективность завершенной терапии, гистологическое исследование проводят в случае продолжительного лечения тяжелого заболевания (например, злокачественной опухоли).

Таким образом, анализ необходим для подтверждения точного диагноза, который невозможно определить при помощи других анализов. Также на его основании назначают патогенетические и симптоматические методы терапии.

Особенности анализа

В случае консультации с изготовлением гистологических препаратов парафиновых блоков важно помнить о следующих особенностях:

• диагностику можно осуществить в отношении большинства внутренних органов и тканей, но важно помнить, что их собирают при помощи инвазивной процедуры (изъятие кусочка ткани, аспирация внутренних жидкостей);
• предварительно биоматериал размещают в парафиновые блоки, в процессе создания микропрепарата парафин удаляют (он необходим в целях сохранения полноценной структуры клеток и предотвращения их дальнейшего изменения);
• в первоначальной форме ткани исследовать невозможно, их подвергают последовательной обработке – нарезание на тончайшие срезы, спиртование, окрашивание;
• для изучения микропрепаратов используют только микроскопию, то есть оценивают структуру клеток при помощи разных окуляров микроскопа;
• при подозрении патологического процесса важно изучить как можно больше клеток, поэтому лаборант создает большое количество микропрепаратов (минимально 3 окрашенных стекла);
• в отличие от других методов исследования, в данном случае микропрепараты сохраняют на продолжительное время, чтобы сравнить результаты разных исследований спустя некоторое время;
• в основном гистологическое исследование проводится для выявления доброкачественной или злокачественной опухоли, но в процессе диагностики можно определить и другие данные.

После завершения гистологического анализа оценивают структуру клеток в готовых микропрепаратах. Этим занимается врач-цитолог, в некоторых случаях он подтверждает или опровергает диагноз самостоятельно. Например, такое возможно при обнаружении злокачественного новообразования. Он не только выявляет его, но и указывает разновидность, степень тяжести злокачественного процесса.

Создание микропрепаратов

Парафиновые блоки изготавливают сразу после сбора небольших кусочков тканей. В таком виде их отправляют в лабораторию внутри стерильного контейнера. Уже там парафин полностью удаляют, затем приступают к следующим этапам создания микропрепаратов:

• нарезание полноценного образца ткани на тончайшие срезы, обладающие полупрозрачной структурой;
• подготовка стерильных лабораторных стекол, которые обеззараживают посредством автоклавирования, затем раскладывают на рабочую зону;
• перенос среза ткани на стерильное предметное стекло, нанесение небольшого количества спирта;
• смывание спирта дистиллированной водой;
• поочередное нанесение выбранных красителей, которые оставляют на стекле не менее 30 минут, чтобы каждая клетка приобрела специфическое окрашивание (в первоначальном виде без окрашивания рассмотреть их под микроскопом невозможно);
• просушивание каждого стекла, этот этап выполняется без применения вспомогательных аппаратов.

Стекло подписывают, затем располагают в конверте, на который тоже наносят информацию о пациенте. Затем полученные микропрепараты передают цитологу.

Микроскопия

Оценка содержимого микропрепаратов происходит посредством микроскопии. Цитолог выполняет ее по этапам:

• закрепление окрашенного стекла на предметном столике микроскопа для изучения;
• использование разных окуляров с дальним или ближним приближением с целью изучения расположения, морфологии клеток, выявления патологических очагов, оценки причин их развития;
• детальное описание увиденных здоровых тканей, тщательный перенос информации по любым выявленным отклонением.

Как только диагностика завершается, цитолог вручную описывает увиденные данные в образце ткани. В некоторых случаях он может давать итоговое заключение, которое предоставляет возможность постановки дифференциального диагноза. Эти сведения он передает пациенту или врачу для интерпретации и назначения методов терапии по необходимости.

Расшифровка гистологического исследования

В заключении патоморфолога описана общая морфологическая картина, а также индивидуальные особенности и патологические изменения в исследуемом образце ткани. Для расшифровки полученного заключения необходимы знания в области патологической гистологии и других разделов медицины, поэтому ставить диагноз самостоятельно на основе данного типа исследования не рекомендуется. Интерпретировать результаты может только лечащий врач, опираясь при этом на историю болезни пациента.

Вероятность ошибочного заключения

Чаще всего, ошибки в ходе гистологического исследования связаны с неправильным забором образца ткани - в случае недостаточного объема пораженной ткани в таком образце может быть получен ложноотрицательный результат. Содержание в образце здоровой ткани также влияет на точность анализа. Другими причинами ошибки могут быть неправильная фиксация биологического материала и нарушения в ходе изготовления парафинового блока, а также несоблюдение условий их хранения. В вышеперечисленных случаях необходима повторная биопсия. При ошибке в ходе изготовления препаратов с парафиновых блоков препараты могут быть изготовлены повторно с того же самого блока.