Иммуногистохимическое исследование

Биологический эффект гормонов начинается с их связывания со специфическими рецепторами. Все рецепторы, будь то рецепторы стероидов или полипептидов, имеют по  два функционально разных домена (участка): первый домен (домен узнавания) связывает гормон, а второй генерирует сигнал, который сопрягает узнавание гормона с определенным внутриклеточным процессом.

Рецепторы к эстрогенам (ЭР) и прогестерону (ПР) относятся к внутриклеточным рецепторам стероидных гормонов. Они присутствуют в различных тканях-мишенях, прежде всего в молочных железах и матке, где участвуют в механизмах гормональной регуляции жизнедеятельности и функциональной активности  специализированных клеток. Нарушение рецепторной чувствительности тканей приводит к развитию дисфункциональных нарушений репродуктивной сферы, бесплодию, гиперплазии эндометрия, злокачественным и доброкачественным опухолям матки и молочных желез и др. Поэтому исследование ЭР и ПР используют в диагностике и прогнозе развития данных патологических состояний.

Эндометрий – многокомпонентная сложная система, клеточные элементы которой находятся в сложной динамической взаимосвязи. Циклическая структурно-функциональная перестройка эндометрия обеспечивается главным образом взаимодействием с половыми гормонами, рецепторы которых располагаются в ядре и цитозоли эпителия желез и стромы.

Концентрация рецепторов к эстрогенам и прогестерону постепенно нарастает к преовуляторному периоду. До середины лютеиновой фазы сохраняется максимальное содержание рецепторов к прогестерону, тогда как суммарных рецепторов к эстрогенам в этом периоде цикла значительно уменьшается. К концу цикла существенное снижение концентрации цитозольных рецепторов к прогестерону нивелирует возникшую разницу уровней стероидных рецепторов.

Нарушение рецепторной чувствительности эндометрия может быть следствием воздействия различных этиологических факторов. Наиболее частой причиной, по мнению ряда авторов, является хронический эндометрит, при котором основной проблемой становится снижение экспрессии рецепторов за счет нарушения кровоснабжения, ишемии ткани, склероза и фиброза в стромальном компоненте. При этом дисфункция стероидо-рецепторных систем эндометрия является одним из механизмов нарушения процессов пролиферации и секреторной трансформации слизистой оболочки матки.

Одной из возможных причин неудач в программе экстракорпорального оплодотворения и переноса эмбриона (ЭКО и ПЭ) является нарушение процессов имплантации (прикрепления эмбриона к эндометрию). Для обеспечения успешной имплантации и развития эмбриона огромное значение имеет структура эндометрия, в частности содержание в нем прогестероновых и эстрогеновых рецепторов, а также пиноподий - выростов на поверхности эндометрия, к которым непосредственно прикрепляется эмбрион. В настоящее время доказано, что решающую роль в процессе имплантации играют не столько абсолютное содержание стероидных гормонов и морфологическая структура эндометрия, сколько его рецептивность, т.е количество функционально полноценных рецепторов ткани эндометрия к соответствующим стероидным гормонам.

При нарушении содержания рецепторов в эндометрии и низком количестве пиноподий, даже при нормальных уровнях гормонов в крови, не происходит достаточного развития эндометрия и эмбрион не может прикрепится к матке.

В настоящее время в программе подготовки к ВРТ рекомендован метод диагностики состояния эндометрия, позволяющий определить полноценность его развития и способность обеспечить адекватное развитие эмбриона в полости матки.

Данный метод основан на комплексном изучении эндометрия, включающем:

• определение гормонального статуса;
• гистологическое исследование;
• определение содержания прогестероновых и эстрогеновых рецепторов;         
• подсчет количества пиноподий.

Не менее важна оценка состояния эндометрия перед назначением высоких доз гормональных препаратов в программах ЭКО. С одной стороны, гормональные препараты оказывают существенное влияние на систему рецепторов, с другой – нарушения в рецепторном аппарате могут привести к недостаточной восприимчивости эндометрия к экзогенному гормональному воздействию.

Нарушение экспрессии рецепторов половых гормонов является одним из ведущих механизмов формирования гиперплазии эндометрия и определяет форму и тяжесть гиперпластического процесса. Рядом авторов было показано, что при простой железистой гиперплазии без атипии наблюдается повышение рецепторов ЭР и ПР в эпителии желез и стромальных элементах с одновременно высокими показателями экспрессии маркера пролиферации Ki-67. При рецедивирующих формах ЖГЭ наблюдается мозаичность картины рецепторной чувствительности эндометрия. Зоны с обедненностью рецепторов к эстроген и прогестерону или полным их отсутствием в эпителии желез могут служить субстратом для развития автономной ткани (Бабиченко И.И., Фролова И.И., 2006).

Результаты исследований (Толибова Г.Х, Траль Т.Г. и соавт, (НИИ АГиР им Д.О. Отта) показали, что оптимальный день для проведения ИГХ-исследования рецепторной чувствительности эндометрия к эстрогену и прогесетрону является:

• С 19 по 22 день менструального цикла при 28-дневном цикле  для диагностики эндометриальной дисфункции (оценка экспрессии рецепторов эстрогена и прогестерона, маркеров воспаления)
• С 23 по 26 день менструального цикла при 35 –дневном цикле
• С 19 по 22 день при индуцированном цикле
• Через 4-6 месяцев после неудачной попытки ЭКО

Рак молочной железы является самым распространенным злокачественным образованием у женщин и находится на втором месте среди причин смерти от опухолевых заболеваний. Раннее выявление данного заболевания и применение адекватных методов лечения могут приводить к существенному увеличению выживаемости.

Благодаря успехам молекулярной биологии в настоящее время в арсенале исследователей и клиницистов имеется очень много молекулярно-биологических показателей, которые могут помочь в прогнозе раннего рака и выборе адьювантной терапии при распространенном процессе.

Правила направления материала из полости матки (эндометрия) на ИГХ-исследование:

• Независимо от способа взятия материала, его объем должен быть не менее 1 кубического см. (Г.Х. Толибова, Т.Г. Траль, М.А. Клещев, И.М. Кветной, Э.К.Айламазян. Эндометриальная дисфункция: Алгоритм гистологического и иммуногистохимического исследования.// Журналъ акушерства и женских болезней. 4/2015.)
• 19-22 день цикла является оптимальным для проведения ИГХ исследования (Г.Х. Толибова, Т.Г. Траль, М.А. Клещев, И.М. Кветной, Э.К.Айламазян. Эндометриальная дисфункция: Алгоритм гистологического и иммуногистохимического исследования.// Журналъ акушерства и женских болезней. 4/2015.)
• Гистологическое исследование необходимая часть ИГХ
• При эндометриальной дисфункции, гиперпластических процессах предпочтительна оценка экспрессии рецепторов к ER и PR наряду с маркерами хронического эндометрита (с одним моноклональным телом CD138 или с расширенной панелью антител, позволяющих уточнять выраженность и стадию воспаления СD4,CD8, CD20, CD138) + маркера пролиферации  Ki-67

При гистологическом исследовании рака молочной железы в ООО «Медицинская лаборатория «ОПТИМУМ» (г.Сочи) используется панель антител :

• Рецепторы стероидных гормонов: ER, PR
• Показатели неоангиогенеза (маркеры эндотелиальных клеток)  CD-31,  CD-34
• Чувствительность к препарату Герцептин HER-2-neu (Ventana)