Иммуногистохимическое исследование

Парсункова Кермен Анатольевна
Заведующая лабораторией Оптимум,
Иммуногистохимические выявления экспрессии рецепторов к стероидным гормонам при патологических процессах
Биологический эффект гормонов начинается с их связывания со специфическими рецепторами. Все рецепторы, будь то рецепторы стероидов или полипептидов, имеют по два функционально разных домена (участка): первый домен (домен узнавания) связывает гормон, а второй генерирует сигнал, который сопрягает узнавание гормона с определенным внутриклеточным процессом.
Рецепторы к эстрогенам (ЭР) и прогестерону (ПР) относятся к внутриклеточным рецепторам стероидных гормонов. Они присутствуют в различных тканях-мишенях, прежде всего в молочных железах и матке, где участвуют в механизмах гормональной регуляции жизнедеятельности и функциональной активности специализированных клеток. Нарушение рецепторной чувствительности тканей приводит к развитию дисфункциональных нарушений репродуктивной сферы, бесплодию, гиперплазии эндометрия, злокачественным и доброкачественным опухолям матки и молочных желез и др. Поэтому исследование ЭР и ПР используют в диагностике и прогнозе развития данных патологических состояний.
Рецепторы к эстрогенам (ЭР) и прогестерону (ПР) относятся к внутриклеточным рецепторам стероидных гормонов. Они присутствуют в различных тканях-мишенях, прежде всего в молочных железах и матке, где участвуют в механизмах гормональной регуляции жизнедеятельности и функциональной активности специализированных клеток. Нарушение рецепторной чувствительности тканей приводит к развитию дисфункциональных нарушений репродуктивной сферы, бесплодию, гиперплазии эндометрия, злокачественным и доброкачественным опухолям матки и молочных желез и др. Поэтому исследование ЭР и ПР используют в диагностике и прогнозе развития данных патологических состояний.
Исследование состояния эндометрия

Концентрация рецепторов к эстрогенам и прогестерону постепенно нарастает к преовуляторному периоду. До середины лютеиновой фазы сохраняется максимальное содержание рецепторов к прогестерону, тогда как суммарных рецепторов к эстрогенам в этом периоде цикла значительно уменьшается. К концу цикла существенное снижение концентрации цитозольных рецепторов к прогестерону нивелирует возникшую разницу уровней стероидных рецепторов.

Одной из возможных причин неудач в программе экстракорпорального оплодотворения и переноса эмбриона (ЭКО и ПЭ) является нарушение процессов имплантации (прикрепления эмбриона к эндометрию). Для обеспечения успешной имплантации и развития эмбриона огромное значение имеет структура эндометрия, в частности содержание в нем прогестероновых и эстрогеновых рецепторов, а также пиноподий - выростов на поверхности эндометрия, к которым непосредственно прикрепляется эмбрион. В настоящее время доказано, что решающую роль в процессе имплантации играют не столько абсолютное содержание стероидных гормонов и морфологическая структура эндометрия, сколько его рецептивность, т.е количество функционально полноценных рецепторов ткани эндометрия к соответствующим стероидным гормонам.
При нарушении содержания рецепторов в эндометрии и низком количестве пиноподий, даже при нормальных уровнях гормонов в крови, не происходит достаточного развития эндометрия и эмбрион не может прикрепится к матке.
В настоящее время в программе подготовки к ВРТ рекомендован метод диагностики состояния эндометрия, позволяющий определить полноценность его развития и способность обеспечить адекватное развитие эмбриона в полости матки.
Данный метод основан на комплексном изучении эндометрия, включающем:
Не менее важна оценка состояния эндометрия перед назначением высоких доз гормональных препаратов в программах ЭКО. С одной стороны, гормональные препараты оказывают существенное влияние на систему рецепторов, с другой – нарушения в рецепторном аппарате могут привести к недостаточной восприимчивости эндометрия к экзогенному гормональному воздействию.
Нарушение экспрессии рецепторов половых гормонов является одним из ведущих механизмов формирования гиперплазии эндометрия и определяет форму и тяжесть гиперпластического процесса. Рядом авторов было показано, что при простой железистой гиперплазии без атипии наблюдается повышение рецепторов ЭР и ПР в эпителии желез и стромальных элементах с одновременно высокими показателями экспрессии маркера пролиферации Ki-67. При рецедивирующих формах ЖГЭ наблюдается мозаичность картины рецепторной чувствительности эндометрия. Зоны с обедненностью рецепторов к эстроген и прогестерону или полным их отсутствием в эпителии желез могут служить субстратом для развития автономной ткани (Бабиченко И.И., Фролова И.И., 2006).
Данный метод основан на комплексном изучении эндометрия, включающем:
- определение гормонального статуса;
- гистологическое исследование;
- определение содержания прогестероновых и эстрогеновых рецепторов;
- подсчет количества пиноподий.

Нарушение экспрессии рецепторов половых гормонов является одним из ведущих механизмов формирования гиперплазии эндометрия и определяет форму и тяжесть гиперпластического процесса. Рядом авторов было показано, что при простой железистой гиперплазии без атипии наблюдается повышение рецепторов ЭР и ПР в эпителии желез и стромальных элементах с одновременно высокими показателями экспрессии маркера пролиферации Ki-67. При рецедивирующих формах ЖГЭ наблюдается мозаичность картины рецепторной чувствительности эндометрия. Зоны с обедненностью рецепторов к эстроген и прогестерону или полным их отсутствием в эпителии желез могут служить субстратом для развития автономной ткани (Бабиченко И.И., Фролова И.И., 2006).

- С 19 по 22 день менструального цикла при 28-дневном цикле для диагностики эндометриальной дисфункции (оценка экспрессии рецепторов эстрогена и прогестерона, маркеров воспаления)
- С 23 по 26 день менструального цикла при 35 –дневном цикле
- С 19 по 22 день при индуцированном цикле
- Через 4-6 месяцев после неудачной попытки ЭКО
Ранняя диагностика рака молочной железы
Благодаря успехам молекулярной биологии в настоящее время в арсенале исследователей и клиницистов имеется очень много молекулярно-биологических показателей, которые могут помочь в прогнозе раннего рака и выборе адьювантной терапии при распространенном процессе.
ООО «Медицинская лаборатория «ОПТИМУМ» (г.Сочи) проводит гистологические исследования эндометрия и молочной железы с определением иммуногистохимическим методом экспрессии рецепторов к стероидным гормонам (эстрогену и прогестерону) при различных патологических процессах.
Правила направления материала из полости матки (эндометрия) на ИГХ-исследование:
- Независимо от способа взятия материала, его объем должен быть не менее 1 кубического см. (Г.Х. Толибова, Т.Г. Траль, М.А. Клещев, И.М. Кветной, Э.К.Айламазян. Эндометриальная дисфункция: Алгоритм гистологического и иммуногистохимического исследования.// Журналъ акушерства и женских болезней. 4/2015.)
- 19-22 день цикла является оптимальным для проведения ИГХ исследования (Г.Х. Толибова, Т.Г. Траль, М.А. Клещев, И.М. Кветной, Э.К.Айламазян. Эндометриальная дисфункция: Алгоритм гистологического и иммуногистохимического исследования.// Журналъ акушерства и женских болезней. 4/2015.)
- Гистологическое исследование необходимая часть ИГХ
- При эндометриальной дисфункции, гиперпластических процессах предпочтительна оценка экспрессии рецепторов к ER и PR наряду с маркерами хронического эндометрита (с одним моноклональным телом CD138 или с расширенной панелью антител, позволяющих уточнять выраженность и стадию воспаления СD4,CD8, CD20, CD138) + маркера пролиферации Ki-67
При гистологическом исследовании рака молочной железы в ООО «Медицинская лаборатория «ОПТИМУМ» (г.Сочи) используется панель антител :
- Рецепторы стероидных гормонов: ER, PR
- Показатели неоангиогенеза (маркеры эндотелиальных клеток) CD-31, CD-34
- Чувствительность к препарату Герцептин HER-2-neu (Ventana)