ПЦР анализ кала на ДНК аденовирус

Определение ДНК аденовирусов (adenovirus) в образцах фекалий методом ПЦР – лабораторный метод диагностики, благодаря которому своевременно обнаруживают наличие или отсутствие аденовируса в кале, что требуется для назначения правильных методов терапии и предупреждения осложнений вследствие инфекции кишечника. Существует множество микроорганизмов, способных вызвать идентичную симптоматику кишечных расстройств и инфекций, поэтому важно провести дифференциальную диагностику.

Характеристики исследования:

Тип биоматериала: фекалии
Синонимы (rus): аденовирус, серотипы F40/F41, полимеразная цепная реакция в режиме реального времени
Синонимы (рус): Group F adenovirus, AdV, Had V (real time polymerase chain reaction)
Метод исследования: полимеразная цепная реакция в режиме реального времени, ПЦР

Для чего необходим анализ кала на аденовирус

При развитии кишечной инфекции у пациента появляются боли в нижней части живота, постоянная диарея, примесь слизи в кале. Так как подобную симптоматику вызывают разные бактерии и вирусы, требуется провести дифференциальную диагностику. Наиболее качественное и быстрое исследование в этом случае – полимеразная цепная реакция.

Тест необходим для достижения следующих целей:

дифференциальная диагностика между различными вирусами и бактериями, чтобы определить наличие аденовируса;
проверка качества назначаемых препаратов, при их эффективности объем микроорганизма в фекалиях значительно снижается или полностью устраняется;
получение быстрой информации о виде возбудителя в короткие сроки, так как другие методы исследования требуют большего времени (результат от ПЦР приходит в течение суток, после посева – через неделю);
выявление точного вида возбудителя даже в тех случаях, когда симптоматика размыта, наблюдаются лишь незначительные проявления кишечной инфекции.

Влиянию аденовируса подвержены люди разных возрастов, этот микроорганизм часто распространяется в респираторный тракт и кишечник, но не всегда вызывает инфицирование. Выполнять анализ рекомендуется только в тех случаях, когда наблюдается негативная клиническая симптоматика. Но делать это нужно только при появлении первых симптомов, если прошло 5-7 дней, обнаружить возбудитель затруднительно, так как он быстро исчезает из фекалий. В этом случае симптом воспалительных процессов остается даже после исчезновения инфекционного агента.

Назначение на анализ получают от терапевта, педиатра, инфекциониста, гастроэнтеролога. Этот же врач должен заниматься расшифровкой и последующим назначением лечения.

Общее описание ПЦР анализа ДНК аденовируса

Определение ДНК аденовируса в образцах фекалий методом ПЦР – одно из новых направлений в лабораторной диагностике, с точностью определяющее диагноз в короткие сроки.

Для теста характерны следующие особенности:

врачу требуется лишь внести биоматериал в аппарат, оборудование само считывает требующиеся значения;
действия лаборанта минимальные, поэтому риск врачебной ошибки исключается;
приходят точные результаты, можно обнаружить не только аденовирус, но и его точную концентрацию в заданном объеме биоматериала;
ПЦР оборудование выявляет микроорганизм даже в минимальном количестве образца биоматериала;
проведение анализа осуществляется в режиме реального времени, то есть сразу после внесения биоматериала на мониторе оборудования появляется график, по которому врач-лаборант может предположить наличие или отсутствие инфекции;
результаты исследования получают в течение суток, но при запросе экстренных данных их передают врачу уже через несколько часов;
пациенту требуется пройти предварительную подготовку, чтобы анализатор смог выявить микроорганизм, а риск получения ошибочных сведений полностью устранился;
биоматериал пациент собирает дома самостоятельно, но по строгим правилам;
тест можно повторять многократно, так как для получения биоматериала не требуется проведения каких-либо инвазивных процедур (часто повторное исследование назначают после завершения лечения, чтобы подтвердить отсутствие инфекции, эффективность назначенных препаратов).

Полученные данные передают пациенту. Он должен обратиться с ними к лечащему врачу для расшифровки. Он соотнесет их с историей болезни, проявляющимися симптомами. При их учете диагноз будет достовернее, а назначенные препараты эффективны.

Когда назначают анализ

Для назначения ПЦР исследования с целью обнаружения аденовируса требуется наличие следующей клинической симптоматики:

частая диарея, которая в разгар заболевания может наблюдаться после каждого употребления пищи;
наличие посторонних элементов в фекалиях – слизь, кровь, гной;
жидкий стул, отсутствие оформленных каловых масс;
общие симптомы патологии ЖКТ – тошнота, рвота, потеря аппетита, боль в животе;
повышение температуры тела, на первых этапах она может достигать до 39°, потом постепенно снижается до субфебрильных значений;
общие симптомы недомогания – озноб, вялость, усталость, продолжительный сон.

Эти признаки встречаются при всех кишечных инфекциях. При аденовирусе дополнительно могут наблюдаться симптомы воспалительных процессов в респираторной системе. Например, ринит, боль в горле, кашель. Поэтому для подтверждения диагноза требуется провести ПЦР.

Подготовка к анализу

При назначении теста врач предупреждает о потребности предварительной подготовки по следующим этапам:

отсутствие употребления антибиотиков, противовирусных, противогрибковых средств перед анализом при появлении первых симптомов патологии;
отсутствие проведения клизмы для очищения кишечника за 1-2 дня;
за сутки не употребляют жирную, острую, жареную, копченую, чрезмерно соленую еду;
утром накануне исследования проводят туалет наружных половых органов;
заранее покупают стерильный контейнер для фекалий, в комплекте должна идти специальная ложка, которой отбирают требующийся участок кала (запрещено использовать посторонние емкости, так как в них содержатся вещества и микроорганизмы из окружающей среды, которые испортят результат теста);
собирают только свежие фекалии в утреннее время, которые отправляют в контейнере в лабораторию в ближайшее время (образец не должен простоять без исследования свыше 2 часов).

Чем быстрее выполнить перечисленные этапы, тем достовернее полученные сведения.

Методика проведения ПЦР анализа ДНК аденовируса

Сразу после доставки образца фекалий в лабораторию приступают к его обработке и анализу. Действия выполняют по этапам:

смешивают реагенты для получения раствора, содержащего флюоресцентную метку, она должна войти во взаимосвязь со всеми частицами аденовируса, вызвав специфическое свечение, распознанное ПЦР оборудованием;
добавление праймера к раствору, он нужен для идентификации начала и конца амплифицируемого участка;
добавление в лунки лабораторного планшета трех различных компонентов – раствора с флюоресцентной меткой, праймера, образцов пациента (на их взаимодействие может уйти какое-то время, чтобы ускорить этот процесс, планшет можно ненадолго поставить в инкубатор, где температура слегка повышена);
подключение и программирование ПЦР прибора, чтобы он смог распознать именно аденовирус, меченый флуоресцентным компонентом;
добавление полученного раствора в прибор, запуск выбранной программы;
просмотр созданных графиков на мониторе, где уже можно отследить наличие или отсутствие аденовируса в образце;
распечатывание полученных сведений на лабораторном бланке, где содержатся данные пациента, найденное количество аденовируса, а также референсные значения для сравнения.

Важно помнить, что полученные сведения действительны лишь ограниченное время, так как аденовирус быстро перемещается и элиминируется из организма. Поэтому даже полученные отрицательные значения не гарантируют отсутствия заражения в ближайшее время.

Расшифровка анализа

В норме в ЖКТ, а точнее в кишечнике, не должно обнаруживаться любых следов аденовируса. Это посторонний патогенный микроорганизм, не входящий в условно-патогенную микрофлору. Поэтому единственным нормальным значением считается – «не обнаружено». Если выявлено любое количество аденовируса, требуется специфическое лечение кишечной инфекции.

Аденовирус (кал), ДНК Adenovirus spp, кач., ПЦР

Парсункова Кермен Анатольевна