Chlamydia psittaci, ПЦР (мокрота)

Chlamydia psittaci в мокроте методом ПЦР 

Определение ДНК хламидий (Chlamydia psittaci) в мокроте методом ПЦР – лабораторный метод диагностики, определяющий наличие или отсутствие фрагментов генетического материала хламидий, распространяющихся после контакта с птицами (орнитоз). Болезнь может проявляться в открытой форме или в виде бессимптомного носительства. Она крайне контагиозна, быстро поражает респираторную систему, может приводить даже к летальному исходу. Поэтому важно своевременно провести лабораторный анализ, чтобы незамедлительно начать лечение.

Характеристики исследования:

• Тип биоматериала: мокрота 
• Синонимы (rus): Хламидия, респираторный хламидиоз, орнитоз
• Синонимы (eng): Chlamydia psittaci, Chlamydia DNA
• Метод исследования: Полимеразная цепная реакция (ПЦР)

Chlamydia psittaci – инфекция, передающаяся от птиц. Реже заболевание переходит между млекопитающими животными. Возбудитель может содержать грамотрицательные РНК или ДНК фрагменты, которые обнаруживают во время лабораторного анализа. Чаще всего заражение происходит от следующих групп птиц:

• голуби;
• домашние птицы – утки, курицы, индейки;
• попугаи разных видов.

Бактерия содержится на различных частях тела птиц. Например, перья, помет, слизь из носовых ходов. Если она попадает на любой участок тела человека, происходит быстрое заражение. В особенности в группу риска входят сотрудники зоомагазинов, зоопарков, птицеферм. Нередко патология передается ветеринарам. Важно своевременно назначать исследование при появлении первых симптомов, так как инфекция быстро проникает в дыхательную систему, переходя вглубь по бронхам к альвеолам легких. Она приводит к развитию тяжелой формы бронхита, пневмонии. В самых тяжелых случаях может развиться даже летальный исход. Если провести анализ, для врача и пациента появляются следующие преимущества:

• своевременная идентификация Chlamydia psittaci среди других вирусов и бактерий, которые могут вызвать инфицирование дыхательной системы (благодаря анализу проводят точную дифференциальную диагностику);
• определение орнитоза даже в тех случаях, когда пациент является носителем, а клинические симптомы у него не проявляются;
• определение ранее пережитого орнитоза даже после завершения инфекции, так как анализатор может выявить даже малейшие остатки фрагментов ДНК, РНК патогенного микроорганизма;
• отслеживание качества назначенного лечения, при котором инфекция должна полностью устраниться, могут обнаруживаться лишь остаточные фрагменты бактерии (в ином случае врач заменит лекарственный препарат более действенным);
• оценка наличия или отсутствия инфекции по прошествию времени после лечения, если у пациента вновь появились симптомы респираторной инфекции.

С помощью ПЦР можно в точности поставить диагноз. Ни одно другое клиническое исследование не позволит с точностью установить наличие или отсутствие орнитоза. Только ПЦР обнаруживает даже незначительные фрагменты ДНК, РНК бактерии в мокроте. Тест назначает терапевт, инфекционист, другой лечащий врач, который предположил диагноз орнитоза.

Общее описание анализа мокроты на Chlamydia psittaci

Для оценки наличия или отсутствия Chlamydia psittaci в мокроте пациента используют методику полимеразной цепной реакции или ПЦР. Это тест, который выполняют на автоматическом оборудовании. 

Для него характерны следующие особенности:

• для диагностики достаточно незначительного количества биоматериала, даже в этом случае можно обнаружить искомый возбудитель инфекции;
• требуется предварительная подготовка пациента, чтобы анализ показал достоверные данные, не пришлось пересдавать биоматериал;
• аппарат самостоятельно идентифицирует инфекцию, врачу-лаборанту достаточно внести биоматериал внутрь, а также запрограммировать прибор;
• исследование происходит в режиме реального времени, результаты можно получить уже в течение суток, но если требуются экстренные данные, при пометке «cito» результат приходит уже через несколько часов;
• анализ можно повторять многократно, так как в качестве биоматериала используют мокроту, для ее сбора не требуется никаких инвазивных процедур;
• достоверность полученных данных достигает практически 100%, ни один другой тест не способен получить схожую информацию;
• результат теста бывает двух видов – положительный при обнаружении инфекции, отрицательный при ее отсутствии.

При идентификации Chlamydia psittaci не требуется выявлять количественное содержание бактерии. Даже ее минимальное количество может проникнуть вглубь по респираторной системе, быстро вызвав бронхит и пневмонию. Поэтому достаточно получить положительный тест, чтобы сразу приступить к лечению.

Когда назначают ПЦР анализ на Chlamydia psittaci

Назначение ПЦР для обнаружения рекомендовано при наличии следующих симптомов:

• продолжительный кашель, который не устраняется стандартными методами лечения;
• температура тела 37-37,5° по неясным причинам;
• переход инфекции в бронхит и пневмонию, когда стандартные антибиотики не помогают.

Помимо перечисленных симптомов, врач учитывает пациентов из группы риска. К ним относят людей, часто контактирующих с птицами. Например, ветеринары или сотрудники птицефабрик.

Подготовка к анализу

Для получения достоверных сведений перед назначением анализа врач предупреждает о потребности прохождения подготовительных этапов:

• покупка стерильного контейнера с крышкой в аптеке, для этих целей неприемлемы любые емкости, даже если они были предварительно простерилизованы;
• прием отхаркивающих средств за сутки и в течение следующего дня перед сбором мокроты, чтобы усилить ее выведение;
• непосредственно перед анализом не используют антисептики, антибиотики системного, местного действия;
• перед сбором мокроты ополаскивают рот кипяченой водой, откашливаются и сплевывают в купленный контейнер.

На емкости с собранной мокротой указывают фамилию и инициалы пациента. Других дополнительных правил подготовки не требуется, так как даже прием системных антибиотиков не вызовет полного устранения бактерий. Анализатор сможет обнаружить даже малейшие фрагменты РНК или ДНК.

Методика проведения анализа

К непосредственному выполнению анализа приступают сразу после передачи биоматериала в лабораторию. Чем раньше провести его, тем достовернее будут полученные данные. 

Тест проводят по следующим этапам:

• предварительно подготавливают смесь реагентов для выполнения ПЦР в реальном времени, в нее добавляют флюоресцентную метку, которая взаимодействует с искомым биоматериалом, создавая комплексы;
• добавляют праймер, который ограничивает начало и конец амплифицируемого участка;
• к каждой ячейке с праймером добавляют смесь реактивов, а также образец пациента;
• подключают аппарат, который самостоятельно исследует содержимое ячейки, после чего выдает график, по которому можно понять относительную концентрацию субстрата;
• количество ДНК измеряется в режиме реального времени после завершения каждого цикла амплификации.

В отличие от других видов ПЦР, в режиме реального времени выстраивается график. По нему можно отслеживать нарастание флюоресценции каждого вида красителя. Эти данные отображаются на мониторе, поэтому врач-лаборант может следить за ходом реакции.

В конце проведения анализа ПЦР оборудование распечатывает бланк, на котором будут указаны результаты наличия или отсутствия Chlamydia psittaci в образце мокроты.

Расшифровка анализа мокроты на Chlamydia psittaci

Так как для оценки наличия или отсутствия возбудителя не требуется идентификации его точного количества, достаточно получения следующей информации.

1. Положительно. В мокроте обнаружена бактерия Chlamydia psittaci, что свидетельствует о заражение возбудителем. Патология может протекать в скрытой форме, без симптомов. Но чаще она развивает тяжелую клиническую симптоматику инфекции дыхательных путей. Может появляться трахеит, бронхит и пневмония.
2. Отрицательно. Бактерии в мокроте не обнаружено, поэтому носительство или открытая форма орнитоза невозможны.

Если врач или пациент сомневаются в полученных результатах, биоматериал был собран не по правилам, можно повторить анализ. Так же его рекомендуется проводить повторно после завершения терапии, чтобы удостовериться в отсутствии инфекции.

В отличие от других методов исследования, при правильном сборе биоматериала тест выдает точные и достоверные данные. Если в содержимом присутствуют молекулы ДНК или РНК возбудителя, аппарат всегда найдет их.