Молекулярно-биологическое исследование на РНК HDV, качественно

Данное исследование применяется для определения возбудителя гепатита D (HDV) в организме человека. В процессе молекулярно-биологических процедур по методу ПЦР (полимеразной цепной реакции) в исследуемом образце крови обнаруживается генетический материал (РНК).

Краткие сведения об исследовании на гепатит D

Вирус гепатита D считается «дефектным», поскольку содержит кольцевидную нить РНК из одной цепочки, а распространение патогенных клеток возможно только при наличии в организме гепатита B, как основного заболевания. В этом случае вирус гепатита D использует клетки гепатита B, как оболочку, что в дальнейшем способствует образованию нового очага и воспалительного процесса.

Путь заражения гепатитом D такой же, как и при гепатите B – парентеральный, а источником является больной человек или носитель вируса. В группу риска попадают все, кто имеет отношение к переливанию крови – доноры, наркоманы, люди с заболеваниями кровеносной системы.

Молекулярно-биологическое исследование на РНК HDV позволяет определить наличие вируса в крови заболевшего человека на самых ранних стадиях – несколько дней от момента попадания вируса в организм. В это время пациент может не ощущать никаких внешних признаков, а антитела на вирус начинают вырабатываться спустя несколько недель, поэтому никакой другой метод не в состоянии обнаружить клетки гепатита D, кроме данной пробы.

Общие сведения о гепатите D

Гепатит D представляет собой заболевание инфекционной природы, при котором в тканях печени протекают воспалительные изменения, сопровождающиеся разрушение печеночных клеток. Симптоматика гепатита D идентична с проявлениями гепатита В, но при этом гепатит D протекает, как правило, более тяжело и его симптомы ярко выражены. Выделяют три периода развития гепатита D:

Инкубационный. Отрезок времени от попадания вируса в человеческий организм и до появления характерных симптомов патологии. Его длительность обычно варьируется от трех недель до 45 суток.
Продромальный (преджелтушный). Продолжительность составляет 4-10 дней. У пациента в это время наблюдается потеря аппетита, повышенная утомляемость, периодически возникающие болевые ощущения в суставах и мышцах, эпизодические подъемы показателей температуры.
Желтушный. Длится 2-6 недель. Присутствуют такие характерные симптомы как пожелтение кожи, белков глаз (желтуха), тошнота, рвота, кожный зуд, потемнение мочи, острые болевые ощущения в области живота.

Острый гепатит D оканчивается выздоровлением пациента или переходом патологии в ее хроническую форму. Для хронического гепатита D, по сравнению с хроническим гепатитом В, характерно более тяжелое течение болезни с высокой вероятностью развития таких осложнений, как печеночная недостаточность, цирроз, злокачественные новообразования печени.

Особенности вируса гепатит D

В строение вируса гепатита D различают белки и молекулы РНК. Организм, воспринимая белки как инородные, потенциально опасные (антигены), начинает производить активную выработку антител anti-HDV. В сравнении с вирусом гепатита В, не способным к уничтожению клеток печени (их гибель происходит ввиду реакции иммунной системы, оказывающей разрушающее действие на клетки, зараженные вирусом), вирус гепатита D самостоятельно уничтожает клетки печени.

Группа риска

Больные гепатитом В. В 100 % случаев пациентов с диагнозом гепатит D изначально были инфицированы гепатитом В.
Больные, которым необходимо переливание крови. Каждый десятый пациент, получающий на постоянной основе препараты крови, оказывается зараженным вирусом гепатита D.
Потребители внутривенных наркотических средств. Подавляющее число наркозависимых лиц (более 80%), употребляющих наркотики путем их внутривенного введения в организм, инфицированы гепатитом D.
Лица, ведущие беспорядочные половые связи. Вероятность заражения вирусом гепатита D после незащищенного полового акта с инфицированным партнером составляет 40%.

Формы заражения гепатитом D

Коинфекция. При таком способе заражения вирус гепатитов D и В в организм пациента поступает одновременно. Это влечет более тяжелое протекание острой формы гепатита В.
Суперинфекция. Инфицирование вирусом гепатита D происходит при наличии у пациента подтвержденного гепатита В. Для данного состояния характерны тяжелые обострения гепатита В, протекающего в хронической форме.

Показания для исследования РНК HDV

Молекулярно-биологический анализ назначается в следующих случаях:

дифференциальная диагностика различных видов гепатитов;
качественное определение гепатита Д;
контроль эффективности проводимой терапии;
постановка диагноза и окончательный исход заболевания;
волнообразное прогрессирование гепатита Б, когда ремиссии сменяются рецидивами течения заболевания;
резкий рецидив патологии печени на фоне полного здоровья;
хронические стадии течения вирусных гепатитов;
обследование людей, которые имели прямые контакты с заболевшими вирусными гепатитами, в частности Б и Д;
контроль за течением заболевания, когда одновременно присутствуют три вида гепатита.

Особенности ПЦР методики и ее преимущества

При ПЦР диагностики объектом исследования является вирусная РНК. Метод обеспечивает выявление РНК вируса на самой ранней стадии, когда другие методики обнаружить его еще не могут. Среди других достоинств ПЦР метода отмечают следующие:

Прямое обнаружение вируса гепатита D (при исследовании обнаруживается непосредственно возбудитель патологии, а не специфические белки, указывающие на присутствие инфекционных агентов);
Высокая чувствительность (94-100%). Исследование позволяет выявить даже единичные вирусные клетки.
Высокая специфичность. Выявляемая вирусная РНК характерна только для вируса гепатита D.

Кто назначает исследование

Анализ крови на вирус гепатита D может быть назначен следующими медицинскими специалистами:

терапевт;
гепатолог;
инфекционист.

Подготовка к исследованию

Забор крови производиться в пробирку с фиолетовой крышкой (ЭДТА) до метки.

Рекомендации для пациента:

забор биоматериала проводится в утреннее время, с 8 до 11 часов;
сдаче анализа должно предшествовать ночное голодание (предельно допустимое время ужина – 21 час);
в день исследования пациенту можно только употреблять негазированную воду;
за час до анализа необходимо не курить;
за 24 часа до забора крови не допустимы повышенные физические нагрузки, эмоциональные всплески, употребление жареной и жирной пищи, спиртосодержащей продукции;
рекомендуется непосредственно перед сдачей биоматериала (за 10-15 минут) спокойно посидеть, расслабиться;
после инструментальных методов диагностики, физиотерапевтических лечебных мероприятий, медицинских вмешательств сдавать кровь следует по прошествии как минимум недели;
после приема антибиотиков анализ проводится спустя 2 недели после окончания курса антибактериальной терапии;
на время проведения исследования рекомендуется на время прекратить прием лекарственных препаратов (допустимо только после консультации специалиста).

Проведение исследования и расшифровка результатов

В качестве биологического образца используется венозная кровь в объеме 7-10 мл. Процедура представляет собой забор материала и дальнейшее его исследование путем обнаружения вирусных клеток гепатита D.

Расшифровка результатов дает предельно ясную картину:

отрицательный результат – клетки вируса не обнаружены;
положительный результат – пациент заражен гепатитом D.

Однако, имеется определенные погрешности, когда при отрицательном результате возможно носительство вируса без патогенного очага в организме.

Ошибочный положительный результат возможен при нарушении хранения и транспортировки в лабораторию образца крови.

Причины отрицательного результата

В организме пациента вирус гепатита D отсутствует.
Имеет место ранняя стадия инфицирования (инкубационный период).
Исследуемый является носителем инфекции, при этом размножение вируса не происходит.
Достигнуто выздоровление пациента.

Дополнительная информация

Исследование на вирус гепатита D в крови проводится во всех случаях выявления гепатита В.
Вирус гепатита D оказывает подавляющее воздействие на активность вируса гепатита В в печени, то есть имеет место феномен вирусной интерференции.

Ложноотрицательные результаты

Вероятность получения ложноотрицательных значений крайне низкая. Это может быть обусловлено приемом пациентом на момент проведения исследования противовирусных препаратов или наличием в образце крови гепарина – вещества, затрудняющего свертываемость крови. Кроме того, ложноотрицательные значения могут быть связаны с нарушением технологии проведения исследования, использованием некачественных реактивов.

Гепатит D

Доронин Иван Михайлович