Haemophilus influenzae, ПЦР

Выявление ДНК Haemophilus influenzae (носоглотка)

Молекулярно-биологическое исследование мазков со слизистой оболочки носоглотки на Haemophilus influenza – диагностический анализ, направленный на обнаружение гемофильной палочки, которая может вызывать бактериальное заражение респираторной системы, а также внутренних органов. Патология часто приводит к осложнениям вплоть до летального исхода, поэтому важно своевременно пройти диагностику и получить верное лечение.

Характеристики исследования:

• Тип биоматериала: слизь из носоглотки
• Синонимы (rus): Haemophilus influenzae
• Синонимы (рус): гемофильная палочка
• Метод исследования: полимеразная цепная реакция, ПЦР

Для чего необходим анализ на Haemophilus influenza

Гемофильная палочка относится к условно-патогенным бактериям, она может в норме присутствовать на поверхности слизистой оболочки носоглотки. Однако при ухудшении качества иммунитета или развитии хронических патологий ее количество может резко увеличиваться. В этих случаях развивается острый воспалительный процесс, ухудшающий самочувствие пациента. Если использовать стандартные методы терапии обычной бактериальной инфекции, это может не помочь. Важно своевременно провести молекулярно-биологическое исследование мазка из слизистой оболочки носоглотки, чтобы получить следующие преимущества:

• дифференциальная диагностика гемофильной палочки и других вирусных, бактериальных, грибковых инфекций, которые тоже могут вызывать эпиглоттит, менингит, пневмонию, отит, синусит, гнойный артрит;
• подбор правильных методов терапии, на которые будет реагировать именно гемофильная палочка;
• оценка качества назначенного лечения, если оно правильное, при повторном проведении исследования микроорганизм обнаруживаться не должен;
• выявление повышенного уровня гемофильной палочки даже в тех случаях, когда пациент является бессимптомным носителем или болезнь еще не успела вызвать симптоматику;
• периодическое отслеживание состояния здоровья пациентов, у которых наблюдаются частые рецидивирующие инфекции, вызванные гемофильной палочкой.

Если не провести лабораторное исследование, стандартные методы терапии не помогут. Инфекция будет перемещаться все глубже по респираторному тракту. Например, она может начаться с синусита, затем перейдет в трахеит, бронхит и пневмонию. Вылечить воспаление легких, вызванное гемофильной палочкой, крайне затруднительно. Процент летальных исходов в этом случае высокий. Поэтому врачи советуют своевременно проводить молекулярно-биологическое исследование мазков из слизистой оболочки носоглотки, чтобы не только выявлять причину состояния, но и оценивать терапию.

Общее описание ПЦР анализа

Молекулярно-биологическое исследование проводят посредством полимеразной цепной реакции или ПЦР. Это наиболее информативный тест, который в точности показывает наличие или отсутствие возбудителя, а также его концентрацию по необходимости. 

Для него характерны следующие характеристики:

• для анализа требуется небольшое количество биологического материала от пациента, даже в самой минимальной концентрации можно обнаружить искомый микроорганизм;
• определяют наличие Haemophilus influenzae, даже если в образце содержится ее небольшое количество или лишь фрагменты;
• оценивают не только наличие, но и точную концентрацию микроорганизма, что поможет выявить нормальное количество условно-патогенной микрофлоры или превышение показателей, это будет свидетельствовать о развитии инфекции;
• методика проводится в режиме реального времени, на мониторе врач-лаборант наблюдает графики, по которым уже можно определить результат;
• применяется полуавтоматическое оборудование, врачу достаточно лишь внести образец и указать программу, все остальные действия прибор выполнит самостоятельно;
• аппарат подсчитывает данные быстро, поэтому результат приходит уже на следующие сутки, при потребности проведения экстренного анализа их можно получить уже через несколько часов;
• так как в исследовании определяют наличие и концентрацию бактерий, требуется предварительная подготовка пациента, чтобы получить достоверный результат;
• для проведения методики достаточно взять биоматериал с поверхности слизистых оболочек, применять инвазивные процедуры не требуется, поэтому анализ можно выполнять многократно.

Как только анализатор подсчитает искомое значение, данные будут распечатаны на лабораторном бланке. В них содержатся результаты пациента и референсные значения, с которыми проводят сравнение. Бланк передают пациенту, который должен проконсультироваться с этими сведениями у лечащего врача.

Когда назначают анализ на Haemophilus influenza

Забор мазка из слизистой оболочки носоглотки для определения концентрации Haemophilus influenzae требуется осуществлять в следующих случаях:

• симптомы, которые могут на указывать на гемофильную инфекцию дыхательной системы – высокая температура, озноб, слабость, затрудненное глотание, повышенное слюнотечение, затрудненность дыхания, синюшный оттенок кожи, кашель, першение в горле, светобоязнь и многие другие;
• отсутствие эффективности терапии стандартными антибиотиками и противовирусными средствами;
• отсутствие купирования высокой температуры жаропонижающими препаратами;
• контакт с пациентом, зараженным гемофильной палочкой;
• наличие гемофильной инфекции в других отделах организма (почки, суставы, сердечно-сосудистая система);
• оценка качества назначаемого лечения, при котором объем гемофильной палочки должен постепенно нормализоваться.

Показания для назначения теста определяет терапевт, инфекционист, пульмонолог, отоларинголог или другой лечащий врач, который заподозрил гемофильную инфекцию.

Подготовка к анализу

Для получения достоверных сведений перед проведением анализа пациент должен подготовиться по правилам:

• отсутствие употребления любых новых лекарственных средств за неделю до теста, о которых не был предупрежден лечащий врач;
• запрет употребления системных антибиотиков за 1 неделю до исследования;
• запрет использования местных антибиотиков и антисептиков за 1-2 дня до забора биоматериала;
• последний прием пищи вечером накануне исследования, с утра ее употреблять недопустимо;
• утром перед тестом можно чистить зубы, но есть и пить нельзя, чтобы сохранить целостность микрофлоры.

Если все этапы подготовки пройдены правильно, пациент должен явиться в лабораторию утром. Как только биоматериал будет изъят, запрет употребления пищи и питья снимается.

Методика проведения ПЦР анализа на Haemophilus influenza

Как только биоматериал со слизистой оболочки носоглотки был собран, его отправляют в лабораторию. Чем раньше приступить к исследованию, тем достовернее результаты. 

Молекулярно-биологический анализ проводят по этапам:

• предварительная подготовка реагентов для ПЦР-аппарата, в раствор врач-лаборант добавляет жидкость с содержанием флюоресцентной метки, специфичной для микроорганизма Haemophilus influenzae (они свяжутся между собой, вызвав свечение, которое распознает анализатор);
• добавление праймера, требующегося для ограничения начала и конца амплифицируемого участка;
• заполнение лабораторного планшета реагентом, праймером и образцом пациента, все эти компоненты должны вступить во взаимосвязь;
• подключение анализатора, сканирующего содержимое с целью выявления комплексов, вызывающих флюоресцентное свечение;
• просмотр построенного графика на мониторе, в этот момент тоже можно предположить, повышенное количество гемофильной палочки в биоматериале;
• распечатывание полученных данных на лабораторном бланке.

Полученные данные пациент должен передать лечащему врачу, так как самостоятельно он не сможет разобрать, есть ли у него гемофильная инфекция. Haemophilus influenzae входит в состав условно-патогенной микрофлоры, поэтому анализатор выявляет ее практически у каждого пациента. Однако эти сведения требуется соотнести с симптомами и историей болезни.

Расшифровка анализа

В норме гемофильная палочка может присутствовать в образце в умеренных количествах. Ее объем не должен превышать показатель 1*104. Если бактерия наблюдается свыше этих значений, микроорганизм начал активно размножатся среди условно-патогенной микрофлоры. Пациенту требуется лечение, чтобы не допустить переход инфекции вглубь по респираторному тракту.