Иммуногистохимическое исследование рака желудка

Патологоанатомическое исследование биопсийного материала желудка выполняют с применением определения НER2/neu –статуса и пролиферативной активности Ki-67 и проводится для диагностирования рака желудка.

Характеристики исследования:

Тип биоматериала: Образец ткани (биоптат), помещенный в формалин
Синонимы (rus): рецептор HER2/neu; рак желудка, онкопотенциал опухоли
Синонимы (eng): Histological analysis, immunohistochemical analysis; IHC (ImmunoHistoChemistry); receptor HER2/neu.
Метод исследования: Гистологический метод

Злокачественная опухоль желудка является крайне опасным патологическим процессом – его обнаружение на ранних этапах развития крайне проблематично. Тошнота и болезненные ощущения в животе являются симптомами гастрита или язвенной болезни. Пациенты, страдающие этими недугами, не всегда могут предположить, что развивается рак желудка. К тому же во многих случаях онкопатология может начинаться и вовсе без выраженных клинических признаков.

Современная онкоморфологическая отрасль, занимающая ранней диагностикой новообразований, ведет активный поиск критериев, которые позволяют максимально объективно подтвердить степень злокачественности опухоли. Учитывая пролиферативную активность клеток желудка, в настоящее время иммуногистохимическая диагностика экспрессии рецепторов является необходимым исследованием при онкологических патологиях.

НER2/neu представляет собой мембранный белок, который кодируется геном ERBB2. Повышение его экспрессии имеет важное значение в патогенезе и прогрессировании определенных злокачественных процессов. Тестирование данного рецептора является важным биологическим маркером рака желудка, молочной железы, матки и ее придатков.

Ki-67 – ядерный антиген, состоящий из двух полипептидных цепей и являющийся основной частью нуклеарного матрикса. Его экспрессия позволяет выделить пролиферирующие клетки опухолевидного образования, которые находятся в активной фазе жизненного цикла клетки. Данный маркер позволяет определить фенотип и скорость роста опухоли, риск ее метастазирования, потенциальную ответную реакцию на лечебные мероприятия и исход патологического процесса.

Когда делают анализ?

Проведение иммуногистохимического исследования необходимо при:

определении типа новообразования и лимфо-пролиферативного состояния;
выявлении метастазов;
прогнозировании формирования опухоли и течения злокачественного процесса.

Иммуногистохимические методы

Патологоанатомическое исследование включает несколько этапов:

До лабораторный взятие образца ткани для анализа путем биопсии. Изъятый биоматериал помещается в водный раствор формальдегида и доставляется в лабораторный центр.
В лабораторных условиях из полученного образца готовят гистологические блоки, которые микротомируют – получают из них тончайшие срезы и распределяют на предметных стеклах.
Полученные микропрепараты окрашивают специальными средствами, содержащими определенную концентрацию антител, вступающих во взаимодействие с клетками новообразования. Виды маркеров зависят от предполагаемого типа опухоли.

Важность исследования

Новообразование в желудке Новообразование в желудке значительно ухудшает самочувствие пациента, приводит к тяжелым диспепсическим расстройствам, нарушению пищеварения. Поэтому патологию требуется выявлять на ранних этапах развития, а также следить за ее прогрессированием в динамике. Только так можно добиться качественного эффекта от терапии, повысить шанс пациента на благоприятный исход. Если опухоль выявлена, но динамику ее развития не определяют при помощи иммуногистохимического исследования, разовьются следующие осложнения:

прорастание атипичных клеток в глубокие слои стенок желудка, что приведет к отсутствию возможности проведения хирургического вмешательства, так как потребуется полностью удалить орган;
значительное повреждение структуры желудка за счет сдавления злокачественной опухолью, что снижает функциональность клеток, приводит к кровотечениям;
обильное распространение метастазов через лимфу и кровоток во многие внутренние ткани и органы, так как желудок хорошо кровоснабжается;
неблагоприятный прогноз развития болезни, на первых этапах качество жизни пациента значительно усугубляется, затем развивается летальный исход.

Если своевременно выявлять специфические белки на поверхности тканей желудка, можно контролировать новообразование, корректировать методы терапии. Например, на первых этапах можно провести хирургическое вмешательство, удалив лишь опухоль и часть ткани желудка. Если по результатам иммуногистохимического исследования будет обнаружена повышенная экспрессия генов, может потребоваться дополнительная химиотерапия, чтобы уменьшить степень пролиферации атипичных клеток и объемы самой опухоли.

Важно помнить, что на основании иммуногистохимического исследования не устанавливают дифференциальный диагноз. Для этого применяют другие анализы. Лишь после подтверждения диагноза определяют специфические белки, так как для взятия биоматериала требуется инвазивная процедура.

Для чего необходим анализ

Иммуногистохимическое исследование при раке желудка проводится для определения двух специфических белков – HER-2/neu, Ki-67. Это необходимо для получения следующей информации:

отслеживание степени тяжести развития патологического процесса, так как по исследованию можно определить снижение дифференцировки атипичных клеток, чем она проще, тем хуже становится состояние;
определение формы, типа новообразования, некоторые из них отличаются по методикам лечения;
составление прогноза, который может быть благоприятным при развитии опухоли до 1 или 2 стадии и медленном выделении атипичных клеток, а также неблагоприятным на 3 и 4 стадии, упрощенной дифференцировки и активном размножении клеток;
составление качественных методов лечения, благодаря которым можно удалить опухоль, но сохранить структуру и функциональность желудка, не навредить пищеварительной системе.

Так как для получения кусочков ткани необходимо инвазивное вмешательство, исследование проводят не чаще 1-2 раз за все развитие болезни. Обычно повторный тест применяют в случае, если прогрессирование опухоли не замедлилось, происходит активное поражение ткани желудка, несмотря на лечение.

Особенности анализа

При использовании иммуногистохимического исследования для оценки специфических белков при раке желудка выделяют ряд особенностей:

единственным биоматериалом для исследования являются кусочки ткани опухоли, которые получают в процессе инвазивного вмешательства;
структура клеток быстро разрушается вне организма, поэтому проводят обработку формальдегидом и парафином, в таких условиях ткани фиксированы, поэтому появляется достаточно времени для транспортировки и хранения;
полноценный кусочек ткани исследовать невозможно, из него предварительно нарезают тончайшие слои;
в естественном виде клетки невозможно увидеть под микроскопом, первоначально требуется обработка реагентом с антигенами, красителем, только затем появится возможность для диагностики;
саму диагностику осуществляют посредством новейшего микроскопа, который может приближать фокусировку до максимальной степени, чтобы рассмотреть полноценную структуру каждой клетки и выявить белки;
за счет внесения реагента образуются специфические иммунные комплексы антиген-антитело с меткой на поверхности, через которую происходит их идентификация;
средний период проведения теста составляет 5-7 дней, продолжительное время необходимо для полноценного изучения всей структуры микропрепарата, чтобы не упустить возможность малейшего содержания иммунных комплексов антиген-антитело;
исследование не предназначено для постановки дифференциального диагноза, оно необходимо для отслеживания агрессивности опухоли, оценки качества и корректировки лечения.

Подготовку биоматериала осуществляет врач-лаборант, исследование иммунных комплексов антиген-антитело выполняет цитолог.

Создание микропрепаратов

Для проведения диагностики необходимо подготовить кусочки ткани из опухоли, чтобы создать микропрепарат:

удаление парафина с поверхности ткани, так как вместе с ним обработка различными веществами невозможна;
нарезка образца ткани на слои с тончайшей структурой, для этого применяют специальное оборудование;
размещение каждого нарезанного слоя на отдельное стерильное предметное стекло;
внесение ферментативного реагента, который активирует антигенную активность, которая до этого была подавлена при помощи парафина и формалина;
нанесение протеинового блока, который определяет участки, подлежащие окрашиванию;
внесение реагента, который приводит к образованию специфических иммунных комплексов антиген-антитело, именно их определяют в образце тканей;
повышение температуры образца для ускоренного связывания антител и антигенов;
применение системы детекции в виде дополнительного реагента, чтобы она соединилась с иммунными комплексами, что приведет к образованию специфической метки, подлежащей определению через микроскоп;
инкубация для быстрого соединения с иммунными комплексами;
окрашивание гематоксилином, так клетки становятся видимы визуально;
устранение лишней жидкости из образца;
перекрытия подготовленной ткани покровочным стеклом.

Все клетки и иммунные комплексы зафиксированы, не меняются. Поэтому остается достаточно времени, чтобы цитолог провел диагностику.

Микроскопия

Микроскопия Полученные образцы ткани тщательно изучают под микроскопом, определяя не только наличие или отсутствие специфических белков опухоли HER-2/neu, Ki-67, но и их количество. По этим данным оценивают степень агрессивности злокачественных клеток, их подверженность воздействию гормонов, качество проведенного лечения, потребность в применении дополнительных методов терапии.

Благодаря применению современного микроскопа можно не только отследить параметры визуально, но также выполнить фотофиксацию. То есть фотографируют выявленные данные, чтобы впоследствии была возможность повторно оценить их и сравните с данными нового анализа.

Расшифровка анализа

Итоговые данные исследования по методу ИГХ готовы спустя 7 дней. Заключение квалифицированного врача-патологоанатома содержат показатели:

специфических антител, к которым был определен тропизм исследуемого биоматериала – это явление свидетельствует о типе онкопатологии;
морфологической структуры патологической ткани вида и количества атипичных клеток.

Интерпретацию результатов проводит врач-онколог, окончательный диагноз устанавливается на совокупности итоговых данных комплексного обследования пациента.

Иммуногистохимия: рак желудка

Потапова Оксана Валентиновна