Гепатит С методом ПЦР

PDF Пример результата
Доронин Иван Михайлович
Автор статьи

Доронин Иван Михайлович

Заведующий отделом ПЦР и генетики,
Цена 2990 *
Срок исполнения до 6 дн. (рабочие дни)
Код услуги PC38
* - Взятие биоматериала оплачивается отдельно

Анализ крови на гепатит С (HCV) количественно, ПЦР

HCV количественно ПЦР – это анализ, определяющий концентрацию враждебных организму частиц-носителей инфекционного заболевания гепатит С. Гепатит С – острое инфекционное вирусное заболевание, сопровождающееся поражением печени.

Подготовка к исследованию:

  • Забор биоматериала производится в утренее время, необходимое условие – натощак
  • Рекомендуется взятие крови не ранее чем через 4 часа после последнего приема пищи

Характеристики исследования:

  • Тип биоматериала: венозная кровь
  • Синонимы (rus): Определение РНК вируса гепатита С, количественный анализ на гепатит С, РНК вируса гепатита С количественный
  • Синонимы (eng): HCV RNA
  • Методы исследования: полимеразная цепная реакция (ПЦР)
  • Единицы измерения: МЕ/мл
  • Сроки выполнения: 6 дней

Общие сведение о вирусе гепатита С

Вирус гепатита С – РНК-содержащий вирус, который имеет тропность к антигенам клеток печени. При попадании в организм человека он способен проникать в гепатоциты, репродуцироваться в них, что сопровождается развитием воспалительного процесса. Вирус отличается формированием большого количества мутаций в ходе своего репродуктивного цикла, что позволяет ему длительное время обходить иммунитет.

Гепатит С – острое инфекционное вирусное заболевание, сопровождающееся поражением печени. Болезнь может протекать в острой и хронической форме. Патология характеризуется стертым течением – в 95% случаев острая форма ВГС протекает бессимптомно, и лишь в оставшихся 5% может сопровождаться наличием слабовыраженной клинической симптоматики. Отсутствие адекватного лечения в острую стадию способствует тому, что процесс перетекает в хронический.

О хронизации говорят в тех случаях, когда РНК вируса гепатита С выявляется в организме более 3 месяцев. Хронический гепатит С в большинстве случаев также протекает бессимптомно, но это только усугубляет ту опасность, которую он в себе несет. Несмотря на отсутствие симптомов в печени продолжается воспалительный процесс, который становится причиной гибели гепатоцитов. Прогрессирующее разрушение паренхимы печени сопровождается ее замещением соединительной тканью. Когда степень фиброза достигает критического уровня, болезнь впервые начинает себя проявлять, но при этом имеющиеся нарушения являются уже необратимыми – наблюдаются признаки хронической печеночной недостаточности, цирроза печени, а нередко такой вялотекущий процесс может стать и причиной рака гепатоцеллюлярной карциномы.

В каких случаях следует пройти обследование?

Самыми частыми симптомами, при которых врач может назначить анализ ПЦР на РНК вируса, являются:

  • желтушность кожных покровов и слизистых оболочек; 
  • боли различного характера в правом подреберье, усиливающиеся после приема жирной или жареной пищи;  
  • тошнота и рвота; 
  • нарушение стула в виде запоров; 
  • горечь во рту; 
  • беспричинные усталость, слабость, утомляемость, снижение трудоспособности; 
  • признаки поражения печени, выявленные при проведении других методов обследования (повышение уровней общего билирубина за счет прямого, АЛТ, АСТ, щелочной фосфатазы, снижение уровня общего белка крови, увеличение печени по данным УЗИ и т. д.). 

Группа риска по заражению гепатитом С

Обследование на гепатит С рекомендуется всем тем, кто входит в группу риска по заражению заболеванием согласно рекомендациям ВОЗ: 

  • новорожденные, родившиеся от матерей, болеющих гепатитом С; 
  • ВИЧ-инфицированные;
  • медицинские работники;
  • пациенты, регулярно получающие сеансы гемодиализа; 
  • лица, которые ранее или в настоящее время имели практику введения инъекционных наркотиков (даже однократная инъекция, совершенная много лет назад, создает значительный риск заражения); 
  • все люди, которым была произведено переливание крови или ее компонентов; 
  • лица после трансплантации внутренних органов.

Определение анализа на гепатит С

Анализ определяет количественную вирусную нагрузку в крови, количество единиц измерения вируса на определенное количество биоматериала. Анализ выявляет наличие возбудителя вируса гепатита C, сокращенно ВГС.

Определяется наличие генетического кода вируса (РНК) и его концентрацию. Положительный анализ показывает не только наличие заболевания (как это делает качественный анализ), но и размножение клеток вируса, и его динамику в процессе протекания болезни и ее лечения. Расшифровкой анализа занимаются профильные специалисты – врач-инфекционист или более узкая специализация – врач-гепатолог.

Противопоказанием к проведению анализа являются прием пищи не менее чем за 7-8 часов до забора биоматериала, загрязненный биоматериал, содержание гепарина в крови, наличие ингибиторов белкового или химического происхождения в биоматериале.

В каких случаях делают анализ на гепатит С?

Количественное исследование на гепатит C проводят для определения стратегии и программы лечения гепатита. На момент назначения анализа уже определено, что пациент болен гепатитом C, с помощью данного анализа выясняется, насколько велика вирусная нагрузка на организм. После получения результата врач-инфекционист определяет препараты для лечения и стратегию его проведения.

В процессе лечения вируса количественный анализ проводится для определения эффективности лечения и динамики изменения концентрации вируса в крови пациента.

Методика проведения анализа

Анализ проводится методом полимеразной цепной реакции – ПЦР. Из всех имеющихся на сегодняшний день серологических методов обследования ПЦР является одним из самых достоверных и высокочувствительных. Существует большое количество вариантов его проведения, но суть остается неизменной: выявить необходимый участок генома возбудителя заболевания и многократно скопировать его до таких значений, при которых его возможно выявить и проанализировать. 

Несмотря на вариант ПЦР-исследования, весь метод проходит по следующему алгоритму: 

  • Проводится забор биологического материала (в данном случае – кровь); 
  • Собранный материал помещают в специальный аппарат - амплификатор. Помимо биологического материала, в аппарате содержатся специфические и необходимые для проведения исследования вещества – праймеры и фермент ДНК-полимераза.
  • Амплификатор нагревается до температуры 96 градусов. При этом обе нити ДНК в крови денатурируют и полностью теряют имеющиеся между ними связи – образуются две отдельные нити ДНК; 
  • К строго определенным участкам обеих нитей, которые необходимо обнаружить, присоединяются комплиментарные к ним молекулы – праймеры. Последние анализируют информацию о строении данного участка генома; 
  • Фермент ДНК-полимераза на основании той информации, которую предоставляют праймеры, синтезирует для каждой нити ее вторую пару - амплификация. 

Исходом этого становится то, что из одной молекулы ДНК образуется две. После этого процесс может многократно повторяться, вплоть до образования 40000 новых молекул ДНК. 

Если возбудитель, который планируется обнаружить, РНК-содержащий, то необходимо молекулу РНК предварительно превратить в молекулу ДНК. Для этого собранный материал смешивают с раствором, содержащим праймеры и фермент обратную транскриптазу. Первые присоединяются к нити РНК, собирают информацию об ее структуре и передают ее ферменту. Обратная транскриптаза на основе полученной информации синтезирует вторую комплиментарную нить. Обе нити сливаются между собой, формируя молекулу ДНК. После этого процесс продолжается по вышеописанному алгоритму. 

Если планируется провести количественный анализ, то добавляют флуоресцентные метки, которые также специфичны к строго определенным участкам генома. Их связывание сопровождается выделением светового сигнала. Анализ интенсивности сигнала позволяет определить количество имеющихся копий ДНК или РНК.

Расшифровка результатов анализа

 В советской и впоследствии в российской медицине принято  было изменять вирусную нагрузку в количестве копий вируса на моль крови (копий/моль), в международной практике – международные единицы на миллилитр (МЕ/мл). Эти два стандарта сопоставимы, 1 МЕ/мл примерно равен 4 копии/мл. В крови либо не обнаруживается вирус (результат «не обнаружено»), либо количественное определение концентрации. Показатель менее 15 МЕ/мл сомнителен, находится ниже уровня чувствительности теста, рекомендовано повторить анализ. Результат 15 до 43 МЕ/мл должен быть описан врачами с учетом клинической картины исследуемого пациента. Однозначно достоверный положительный результат может объявляться при получении концентрации 43 до 6,90 Е7 МЕ/мл, означает заболевание человека гепатитов С и является показателем к интенсивному лечению.

Чем количественное ПЦР-исследование отличается от качественного? 

Качественный анализ может отразить только наличие или отсутствие возбудителя в материале. Соответственно и результат исследования носит характер “положительного” либо “отрицательного”. 

В случае количественного анализа можно выявить не только присутствие возбудителя, но и его количество. Добавление флуоресцентных меток позволяет непосредственно посчитать количество генома возбудителя после каждого последующего цикла амплификации. При этом вероятность ложноположительных или ложноотрицательных результатов сводится практически к нулю.