Мутаций гена CFTR (муковисцидоз)

Определение мутаций гена CFTR ассоциированных с муковисцидозом (11 точек), ПЦР

Определение мутаций гена CFTR необходимо для выявление муковисцидоза - заболевания респираторной и пищеварительной системы (поджелудочной железы, печени, желчных путей), урогенитального тракта и потовых желез.

Подготовка к исследованию:

• Перед исследованием необходимо сдать кровь. Если проводится пренатальный скрининг, тогда понадобятся ворсины хориона
• Необходимо подготовить комплекты ПРОБА-РАПИД-ГЕНЕТИКА и ПРОБА-ГС-Генетика

Характеристики исследования:

• Тип биоматериала: лейкоциты цельной крови, пятна высушенной крови, ворсины хориона
• Синонимы (rus): Изучение частоты и спектра мутации гена CFTR
• Синонимы (eng): Study of the frequency and spectrum of mutations in the CFTR gene
• Методы: ПЦР, мультиплексна ПЦР, рестрикционный анализ
• Сроки выполнения: до 7 дней

Кому назначается данное исследование на определение мутаций гена CFTR?

Данный анализ назначается больным на муковисцидоз, а также их братьям и сестрам, поскольку это аутосомно-рецисивное заболевание.бПеред проведением этого анализа подтверждается диагноз с помощью потового теста, в результате которого концентрация хлоридов составляет более 60 ммоль/л. Согласно результатам анализа приступают к полимеразной цепной реакции с исследованием ДНК.

Молекулярно-генетическое тестирование позволяет идентифицировать 65-75 процентов больных, в итоге даже профилактическое обследование при подозрении на муковисцидоз поможет облегчить структуру заболеваемости.

Данное исследование желательно назначать пациентам при наличии такого комплекса:

• Отставание ребенка в физическом развитии;
• есть хроническое заболевание респираторной системы;
• полипы в полости носа, хронический гайморит;
• панкреатит с постоянным рецидивом;
• колит хронического течения;
• холецистит у родственников.

Описание методики анализа мутаций гена CFTR

Проведение анализа включает:

• наличие комплекта для определения мутаций гена CFTR;
• выделение ДНК, используют для этого лейкоциты цельной крови, пятна высушенной крови или ворсины хориона;
• ферментативный гидролиз протеиназой К с очисткой высаливанием, с помощью хлороформной экстракции и осаждения охлажденным этанолом (96%). Также используют набор реактивов для выделения ДНК;
• анализ мутаций с помощью ПЦР.

Расшифровка и результаты анализа

Самой частой мутацией у больных на муковисцидоз является мутация в 13 экзоне гена CFTR. К сожалению, примерно 20% составляют не идентифицированные мутации. Это случается из-за несбалансированной экспрессии аллелей гена.

Расшифровка анализа позволяет определить первичность поражения систем и облегчить течение патологии. Так, для больных с двумя мутациями гена CFTR (1 и 2 класс) характерен ранний возраст начала клинических симптомов со стороны пищеварительной системы. Первоначально возникает расстройство работы желудочно-кишечного тракта, потом добавляется колонизация легких Pseudomona aeruginosa.

Также в не зависимости от типа мутаций с медленными аллелями гена микросомальной эпоксидгидролазы, гомозиготностью по нулевому аллелю – течение заболевания ухудшается и осложняется. В этих больных нарушение работы бронхолегочной системы имеет неблагоприятное течение.

Необходимость проведения анализа

ДНК диагностика муковисцидоза необходима для повышения информативности о заболевании семей. Часто бывает так, что когда ребенок заболевает, в первый момент родители и врачи не понимают причины и генезис заболевания. В данном случае, анализ способствует прямым или косвенным методом идентифицировать мутантные алели в больных детей, родителей, а также в братьев и сестер.