ПЦР анализ на болезнь легионеров

(рабочие дни):
до 3 дн.
* Взятие биоматериала оплачивается отдельно
Анализы на болезнь легионеров

Тип биоматериала: слизь из нижних дыхательных путей.
Синонимы (rus): бактерии легионеллы, болезнь легионеров
Синонимы (eng): legionella pneumophila, legionella bacteria
Метод исследования: полимеразная цепная реакция.
Сроки выполнения: 3 дня
- наличия материала из гортани, трахеи, бронхов;
- подозрения на заболевание, вызванное L.pneumophila серогруппы, отличной от 1-й;
- летального исхода от пневмонии, происхождение которой не было установлено.
Легионеллёз относится к тяжёлым инфекционным заболеваниям, возникающим на фоне попадания в организм бактерии легионеллы. Как правило, этот патоген активно развивается и растёт в увлажнённой среде (в частности в системах воздушного кондиционирования, ингаляторах, в условиях замкнутого цикла циркуляции воды). Заболевание, спровоцированное патогенном Legionella, впервые было выявлено и описано в 1976 году на фоне сильной вспышки летальной пневмонии, распространившейся в период проведения международной конференции в штате Пенсильвания. На ней присутствовали легионы из Америки, потому инфекция получила название «легионеллёз». Согласно статистике, 75-80 % инфицированных – взрослые пациенты старше 50 лет, из них 60-70 % – представители мужского пола.
Самые распространённые пути заражения Legionella – аэрозольный и воздушно-капельный при вдыхании инфицированных аэрозолей, формирующихся путём водного распыления, образования тумана либо струи. Проникнуть в организм человека инфекция может и вследствие аспирации заряженных кристаллов льда и воды, в частности у пациентов со слабым здоровьем, проходящих лечение в стационаре медучреждений. Время инкубации заболевания длится от 2-х до 10-ти суток (при ряде диагностированных вспышек оно может затягиваться до двух недель). Летальный исход наблюдается при прогрессивной форме воспаления лёгких с расстройством либо асфиксией, а также при полиорганной недостаточности. При отсутствии надлежащего лечения в первую неделю заражения Legionella происходит резкое ухудшение состояния здоровья.
Часто диагностируемой причиной болезни, в т. ч. вспышки, является сам патоген легионеллы. Этот возбудитель, как и связанные с ним другие разновидности, обитает в водоёмах, почве. Для легионеллёза характерны: поражение ЦНС, дыхательных путей, органов выделения, общая интоксикация. При наличии у больного низкого иммунитета, сахарного диабета, хронических форм пневмонии риск заражения легионеллёзной инфекцией многократно возрастает.
Медицинская значимость анализа
Исследование фаринго-трахеальной мокроты проводится методом ПЦР, который позволяет увеличить число ДНК возбудителя с целью лёгкого его обнаружения. В его основе лежит многочисленный рост копий-фрагментов ДНК, характерных для Legionella pneumophila.
Анализ успешно применяется при:
- диагностике пневмонии в совокупности с показателями повышенного риска инфицирования;
- комплексном обследовании на легионеллёз.
Тест ПЦР идеально подходит для определения возбудителя Legionella, так как в условиях стандартных сред он не размножается. Используя его, можно идентифицировать факты носительства, а также прогрессирование инфекции в период острой фазы заболевания.
ПЦР-диагностика индуцированного секрета ценна при детекции инфекций нижнего отдела дыхательных путей. Когда у пациента невозможно получить аспират для анализа, в решении относительно дальнейшей терапии нужно руководствоваться полом, возрастом человека, наличием / отсутствием факторов риска, а также наиболее распространённой формой болезни.
Важно! Качественные ПЦР-системы для выявления бактерии легионеллёза должны быть одобренными ВОЗ и официально зарегистрированными, а медицинские центры, которые с ними работают, – аккредитованными.
Требования к сбору индуцированной мокроты из лёгких
- Забор секрета производится в утренние часы на голодный желудок. Мокрота собирается в стерильную баночку с крышечкой. Такую ёмкость можно купить в аптеке или получить заблаговременно в лабораторном центре.
- В момент очередного откашливания отхаркнуть лёгочный секрет в ёмкость, после чего плотно закрыть крышкой. Хранить баночку открытой нельзя, т. к. в биоматериал может попасть инфекция извне, что приведёт к недостоверному результату.
- Сразу же после сбора секрет следует как можно быстрее доставить в лабораторию для исследования.
- В случае когда у человека затруднено откашливание лёгочного секрета, для разжижения мокроты и облегчения его выхода предварительно нужно выпить муколитический препарат.
Выделение ДНК (РНК) из исследуемого материала
Правила забора фаринго-трахеального секрета на исследование
Для проведения диагностики фаринго-трахеального аспирата с помощью ПЦР потребуется утренний сбор мокроты. Её отбирают в специальный контейнер с плотно фиксирующейся крышкой в диагностическом центре. Главная задача – получение непосредственно мокроты, а не слизи / слюны.
Перед забором биоматериала нужно нормализовать дыхание, чтобы лёгкие наполнились воздухом. Для этого человеку рекомендуется сесть, слегка опустить плечи. Важно сделать глубокий вдох, задержать на несколько секунд дыхание, затем глубоко выдохнуть воздух из лёгких. Выполнить 5 таких вдохов. Сделать в течение суток накануне дня проведения процедуры 2-3 подхода.
Взятие образца аспирата из нижнего отдела дыхательных путей происходит через 2-4 часа с момента последнего употребления пищи. Непосредственно перед исследованием (за 1 час до диагностики) пациенту следует воздержаться от курения, очищения ротовой полости и зубов. За 6 часов до манипуляции запрещено орошать полость рта лекарственными, дезинфицирующими спреями, рассасывать пастилки, закапывать в нос и горло аэрозоли, капли.
Перед забором на анализ аспирата прополоскать ротовую полость тёплой кипячёной водой. В случае когда нос заполнен слизью, перед процедурой следует высморкаться.
Обратите внимание! Так как получение мокроты отхаркиванием у младенцев, новорожденных, детей до 6 лет невозможно, биоматериал для исследования у них получают из верхнего отдела дыхательных путей. Диагностика анаэробных бактерий в таком секрете не проводится, поскольку исследуемый образец контаминирован анаэробами катара дыхательных путей, являющимися частью их естественной микрофлоры.
Амплификация (умножение) участков ДНК
Специфичность ПЦР-диагностики
Анализ эффективности разных методик тестирования представляет собой сложную задачу, т. к. нет единого стандарта диагностики Legionella pneumophila. Популярный BinaxNOW®UAT обнаруживает лишь вид 1-ой серогруппы L. pneumophila, тогда как культуральный тест не используется по причине низкой резистентности.
Метод ПЦР отличается высокой чувствительностью. В отличие от бактериологического анализа этот тип исследования способствует ускорению диагностирования легионеллёзной пневмонии на 3-4 дня. Он даёт возможность найти в анализируемом материале фрагмент ДНК возбудителя, а также выявить поодинокие молекулы бактерии Legionella, которые невозможно обнаружить с помощью других способов.
Чувствительность и быстрота исследования позволяют диагностировать различные виды Legionella в образцах из экологических и клинических источников.
Восприимчивость теста ПЦР в сравнении с культуральными методами составляет 100 %. В то же время, как и культуральный метод, ПЦР может обнаруживать все серогруппы легионеллы.
Визуализация продуктов ПЦР

Насколько достоверный анализ?
Отсутствие деления генетического материала возбудителя в тестируемой пробе не всегда свидетельствует об отсутствии патогена. Иногда встречаются и ложные результаты.
Среди основных причин присутствия бактерии Legionella в человеческом организме выделяют: предшествующую исследованию антибактериальную терапию, наличие паразитов, вирусов, грибов, микобактерий, посторонних загрязнений в диагностируемом образце. В 40-60 % случаях заражения нижнего отдела дыхательных путей инфекция остаётся не выявленной.
Неправдивый результат ПЦР на определение ДНК легионеллы может быть получен в результате загрязнённых реагентов.