ПЦР анализ на коклюш

Доронин Иван Михайлович
Доронин Иван Михайлович Заведующий отделом ПЦР и генетики,

Общие сведения об анализе


Bordetella pertussisПЦР-анализ Bordetella pertussis (анализ на коклюш, ПЦР-тест на Борте-Жангу) представляет собой лабораторное исследование, целью которого является обнаружение либо опровержение у пациента возбудителя коклюша. Инфицирование человека происходит в результате передачи возбудителя воздушно-капельным путем. Наиболее подвержены заболеванию люди преклонного возраста, непривитые дети, беременные, взрослые.

В основе метода диагностики лежит полимеразная цепная реакция, позволяющая обнаружить в пробе секрета из носоглоточного аспирата либо стандартного мазка, предварительно взятого из зева или носоглотки, грамотрицательные аэробные кокковые бациллы, именуемые Bordetella pertussis.

Тип биоматериала: венозная кровь, мазок из носоглотки, мазок из зева (ротоглотки).

Синонимы (rus): коклюш, паракоклюша, возбудители коклюша

Синонимы (eng): bordetella parapertussis; bordetella pertussis, comprehensive examination.

Метод исследования: Полимеразная цепная реакция.

Сроки выполнения: 10 дней

Предназначение


ПЦР-тест на Борте-Жангу рекомендуется младенцам и взрослым при подозрении на коклюш. Наиболее благоприятный момент выявления возбудителя – период ранней пароксизмальной и катаральной стадий болезни.

Преимущества метода


Анализ на коклюш отличается:
  • высокой информативностью;
  • быстротой получения информативной информации;
  • высокой чувствительностью;
  • возможностью выявления возбудителя при минимальном количестве ДНК возбудителя в исследуемом образце материала.

Зачем нужен ПЦР-анализ мазков на коклюш?

Зачем нужен ПЦР-анализ мазков на коклюш?Предназначением к исследованию является диагностика возбудителя коклюша (преимущественно у младенцев и детей дошкольного возраста, редко – у подростков и взрослых) на этапе ранней пароксизмальной и катаральной стадий болезни.

Диагностика коклюша методом ПЦР способствует обнаружению в аспирате из ротоглотки, носа частиц ДНК патогенна инфекции, а также быстрому, эффективному и максимально достоверному выявлению заболевания на ранней стадии.

Метод ПЦР целесообразно использовать для идентификации B. Pertussis в случае подозрения заражения коклюшем в период ранней параксизмальной (в течение 28  дней с момента возникновения первых симптомов болезни) и катаральной стадий. В это время отмечается максимальная восприимчивость ПЦР. По истечении 1 месяца резистентность ПЦР-диагностики снижается. Это важно при выявлении болезни у старших пациентов, которые часто игнорируют имеющуюся у них симптоматику и поздно обращаются за помощью к врачу (в период пароксизмальной стадии).

Тест на основании ПЦР эффективно используется вакцинированными АКДС. В данном случае наличие в мазках патогена коклюша свидетельствует о транзиторном носительстве, однако не об активном заражении, потому заключение ПЦР-диагностики следует оценивать в совокупности с дополнительными лабораторными исследованиями.

Особенности сдачи материала на исследование


Особенные ограничения по сдаче лабораторного материала отсутствуют, однако существует ограничение по воздержанию от пищи на протяжении нескольких часов перед тестом.

В течение 3-4 часов до исследования не принимать питьё, еду, не производить очистку ротовой полости, зубов, воздержаться от курения и жевания жвачки. Также за несколько часов до взятия мазка из носа исключить промывания, орошения, закапывания лекарствами носовых ходов.  Получение наиболее точных результатов возможно при утреннем отборе образцов на анализ.

Показания


Исследование Bordetella pertussis может быть назначено в случаях:
  • диагностики на предмет подтверждения/опровержения коклюша;
  • когда пациенты обращаются к доктору с симптоматикой выраженного слезотечения, заложенности носа, насморка, лихорадки;
  • осложненного кашля, тяжелого дыхания, свистящих хрипов, рвоты, приступов удушья при вдохе, цианозе кожи лица.

При каких обстоятельствах рекомендуется анализ?

Когда рекомендуется анализ на коклюшАнализ назначается разновозрастным лицам:

  1. При подозрении коклюша, когда у пациентов имеются характерные для заболевания симптомы.
  2. С целью эпидемиологического обследования (диагностики контактировавших с инфицированными коклюшем людей).
  3. Старшего возраста, нуждающимся в диагностике заражения коклюшем в условиях профессиональной деятельности (в частности работникам больниц, учреждений социальной защиты, дошкольных, школьных заведений, пищевой промышленности).
  4. При необходимости установления причин кашля.
  5. С симптоматикой коклюша в катаральной стадии (при ярко выраженной заложенности носа, лихорадке, слёзотечении, насморке).
  6. Которым необходимо обследоваться по причине прямого контакта с переносчиками коклюша.
  7. С признаками болезни в параксизмальной стадии (при наличии приступов сильного кашля, сопровождающихся рвотой, глубоким свистящим вдохом, цианозом кожи лица).
  8. При диагностике коклюша в детских коллективах.

Обратите внимание!  Тест не используется для мониторинга результативности лечения. 

Итоговые результаты анализа всегда нужно оценивать на основании дополнительных медицинских, эпидемиологических, лабораторных сведений.

Особенности анализа методом ПЦР

Соскоб, взятый из носа или зева, даёт возможность получения образца материала из ротоглотки с целью исследования в условиях специфической лабораторной среды. Исследование очень ценно для подтверждения возбудителя коклюша в момент реального времени при проведении тестирования. Информативность метода наиболее высока в первые 14 суток после возникновения первых признаков заражения.

Специфичность анализа равна 100 %. Данный показатель обусловлен применением в реакции характерных непосредственно для коккобациллы Bordetella pertussis праймеров. Позитивные значения теста у лиц с симптоматикой инфицирования респираторного тракта свидетельствуют о подтверждении диагноза «коклюш», исключении иных заболеваний, спровоцированных бактериями и вирусами.

Для ПЦР-диагностики характерна высокая степень чувствительности, превышающая резистентность бактериологических исследований, ПИФ, реакции непрямой гемагглютинации. Несмотря на это, стоит отметить, что резистентность теста прямо пропорционально зависит от возраста больного, курса предшествующей терапии, стадии болезни, на которой был изъят на исследование биоматериал.

Интерпретация анализа


Особенности анализа методом ПЦРТочность диагностики зависит от возраста пациента и стадии заболевания. Наиболее качественным лабораторное исследование будет, если материал для теста сдается в первые 14-25 дней с момента инфицирования.
Положительные значения свидетельствуют о:
  • наличии в организме грамотрицательных аэробных кокковых бацилл Bordetella pertussis;
  • кратковременном носительстве коклюша.

При отсутствии возбудителя (вариант нормы) в человеческом организме итоговый результат теста ПЦР на Борте-Жангу должен быть отрицательным.

Иногда отрицательные значения лабораторного анализа могут быть получены в связи с взятием некачественного исследуемого материала в период реконвалесценции и поздней пароксизмальной стадии заболевания, приемом пациентами антибиотиков. Также ложные значения наиболее часто встречаются у людей преклонного возраста, у пациентов, которые накануне исследования принимали эритромицин.

Обратите внимание!!!
  • Тест на коклюш не используется для оценки результативности качества лечения. 
  • Не всегда итоговые результаты диагностики можно принимать в качестве основного аргумента при постановке диагноза. Для постановки точного заключения требуется комплексное клинико-эпидемиологическое обследование.

Факторы, влияющие на достоверность результатов анализа

Оказывать влияние на искажение результатов диагностики могут:

  • стадия болезни, во время которой проводится анализ (максимально точный и правдивый результат может быть получен лишь в том случае, когда тест проводится в первые 28 дней инфицирования);
  • возраст человека (наиболее достоверные результаты могут быть получены у обследованных детей, возраст которых не превышает 12 месяцев);
  • антибиотикотерапия.

В сравнении с другими методами диагностики на достоверности ПЦР в малой степени сказывается и антибактериальная терапия. Резистентность теста при заборе биоматериала на 4 сутки приёма эритромицина равна 89 %, в то время как бакпосева – 56 %, на 7 сутки – 54 % и 0 % соответственно. Именно поэтому ПЦР-диагностику чаще используют для определения возбудителя коклюша у заболевших в период катаральной стадии.

Причины неправдивых результатов диагностики

Интерпретация анализаРезультатом нормы является отрицательное значение теста, которое подтверждается интерпретацией «не обнаружено». Итоговые результаты оцениваются лечащим врачом. 

Позитивный анализ соотносится с инфицированием коклюшем и с транзиторным носительством.

Негативный результат может быть получен при:

  • отсутствии B. pertussis;
  • некорректном заборе материала на анализ;
  • неподтверждённом диагнозе «коклюш»;
  • сдаче мазка на поздней стадии заражения, в период проведения антибиотикотерапии, у пациентов подросткового возраста и взрослых;
  • заборе образца мокроты в период поздней стадии заболевания (пароксизмальной), на этапе реконвалесценции, а также по окончании антибиотикотерапии у пациентов подросткового и старшего возраста. 

Отсутствие размножения патогена B. pertussis в момент лабораторного тестирования в специальной лабораторной среде может говорить об отсутствии коклюшной инфекции либо о поздней стадии болезни, когда неинформативен бакпосев. В таких случаях инфицированным пациентам дополнительно рекомендуется анализ титра иммуноглобулинов к коккобацилле, вызывающей коклюш.