ПЦР на выявление вируса ветряной оспы

Доронин Иван Михайлович
Доронин Иван Михайлович Заведующий отделом ПЦР и генетики,

Анализ на выявление вируса ветряной оспы


ПЦР – полимеразная цепная реакция, один из новых молекулярно-биологических методов исследования биологического материала направленный на идентификацию в исследуемом материале инфекционного агента вирусной природы даже в незначительных концентрациях. В настоящее время ПЦР-диагностика является золотым стандартом лабораторной диагностики при некоторых вирусных заболеваниях.

ПЦР на выявление вируса ветряной оспыVaricella zoster относится к семейству вирусов герпеса. Это очень распространённое заболевание, первичная инфекция очень заразна и передаётся от человека к человеку через дыхательные пути. VZV вызывает ветряную оспу у молодых людей и взрослых, которые ранее не подвергались инфицированию. Примерно спустя 14 дней после контакта с вирусом появляется зудящая сыпь, за которой следует образование прыщеобразных папул, которые превращаются в маленькие заполненные жидкостью пузырьки (везикулы). Вскоре везикулы вскрываются, образуют корку, после чего заживают. Этот процесс происходит двумя-тремя волнами или «урожаями» из нескольких сотен везикул в течение нескольких дней.

Как только первоначальная инфекция проходит, вирус становится латентным, сохраняясь в сенсорных нервных клетках. Во время инфекции у человека вырабатываются антитела, которые обычно предотвращают повторное заражение ветряной оспой при последующих контактах. Однако у пожилых пациентов и людей с ослабленным иммунитетом VZV может реактивироваться, мигрируя вниз по нервным клеткам к коже и вызывая опоясывающий лишай (известный как опоясывающий герпес).

Наиболее специфичным и максимально чувствительным способом диагностики варицелла зостер является молекулярно-генетический ПЦР тест. В его основе лежит принцип численного увеличения количества копий характерного для возбудителя инфекции участка ДНК.

Скрининг включает ПЦР диагностику, направленную на выявление ДНК Herpes Zoster и Varicella Zoster в пробах анализируемого биоматериала. Анализ даёт возможность обнаружить вирус даже в том случае, когда его количество в организме незначительно, в частности при бессимптомной персистенции возбудителя.

Диагностическая важность обследования

Ветряная оспа у детейVZV является этиологическим агентом ветряной оспы (varicella) и опоясывающего лишая (herpes zoster). Ветряная оспа вызывается первичной инфекцией варицелла-зостер и чаще всего встречается у детей, тогда как опоясывающий лишай образуется вследствие реактивации латентной инфекции VZV и чаще всего встречается у взрослых старше 50 лет. Вакцинация против варицелла-зостер значительно снижает заболеваемость и тяжесть инфекции.

Поскольку клиническая диагностика ветрянки сложная до момента возникновения первой симптоматики болезни, лабораторное исследование методом ПЦР успешно с этим справляется, приобретая всё большую популярность.

В отличие от культурального и серологического скринингов молекулярно-биологический тест достаточно прост. Он отличается высокой информативностью, специфичностью, быстротой выполнения. С его помощью успешно идентифицируется VZV. 

Скрининг на Varicella zoster позволяет диагностировать вирус опоясывающего герпеса / ветряной оспы в активной, недавней либо давно перенесённой фазе, проверить эффективность иммунизации против возбудителя и риск реактивации VZV до введения иммунодепрессантов.

Генотипирование с помощью ПЦР эффективно для выявления вакциноспецифических штаммов VZV для выявления / подтверждения побочных реакций на вакцинацию.

Показания к диагностике

Исследование показано женщинам при планировании беременности, лицам, контактирующим с зараженными людьми, новорожденным с признаками генетического инфицирования VZV, иммунодефицитной категории лиц с диагностированным воспалением головного мозга неустановленной этиологии.

Заражение опоясывающим лишаём (Herpes Zoster)Кроме того, анализ на Varicella zoster назначается при подозрении:

  1. Инфицирования ветряной оспой.
  2. Заражения опоясывающим лишаём (Herpes Zoster).
  3. Побочных симптомов вакцинации от Varicella zoster.

Данный анализ показан и при диагностике вспышек эпидемии ветрянки, тяжёлых случаев, связанных с госпитализацией или смертью. 

Бывают ситуации, когда клинические признаки сами по себе не являются подтверждающими, особенно у пациентов, получивших одну или две инъекции вакцины против VZV; в таком случае для подтверждения / исключения инфицирования ветрянкой и постановки точного диагноза рекомендуется лабораторное ПЦР-исследование на VZV.

Если у пациента наблюдаются побочные явления после плановой вакцинации, ему также может быть рекомендовано лабораторное исследование с целью выявления возможной инфекции VZV и определения того, вызваны ли осложнения вакцинным штаммом VZV.

ПЦР-тестирование является наиболее быстрым и чувствительным методом подтверждения диагноза ветряной оспы / опоясывающего герпеса. Лучшим образцом для ПЦР-анализа является ткань везикулярных поражений или струпьев (в случае их наличия). При отсутствии последних в качестве биоматериала для диагностики могут использоваться слюна или кровь, но в таком случае повышается вероятность получения ложноотрицательного результата.

Преимущества обследования

ПЦР – полимеразная цепная реакцияСреди достоинств ПЦР-тестирования стоит выделить:

  • доступность;
  • точность;
  • автоматизацию;
  • диагностику в режиме реального времени;
  • эффективность;
  • простоту.

Что можно выявить с помощью данного исследования?

Тест успешно применяется для обнаружения вирусов herpes zoster, varicella zoster, в качестве дифференциальной диагностики (совместно с другими анализами) при подозрении энтеровирусов ECHO и Коксаки, ВПГ, поверхностной пиодермии, уртикарии, укусов различных насекомых, рабиеса, многоформной экссудативной эритемы, дерматита Дюринга, разноцветного лишая, аллергии на лекарственные препараты, вторичного сифилиса.

Когда сдавать тест?

Анализ назначается:

  • при наличии необычных и/или особо серьёзных симптомов, по которым врач хочет провести различие между инфекцией VZV и иными заболеваниями; 
  • в случае необходимости подтверждения иммунизации к вирусу ветряной оспы; 
  • накануне трансплантации органов (редко);
  • в целях профилактики возможного заражения VZV, когда известно, что ребенок, беременная женщина или человек с ослабленным иммунитетом подверглись воздействию вируса ветряной оспы.

Специфика подготовки

Специфика подготовкиОсобых требований по подготовке к диагностике не предусмотрено.

С целью получения достоверного результата рекомендуется сдавать анализ по истечении 4 часов с момента последнего приёма пищи.

Забор образца для исследования должен осуществляться в чистую стерильную пробирку. Количество биоматериала должно строго соответствовать метке на пробирке.

Чтобы проба смешалась с наполнителем, сразу же по завершении забора образца биоматериала и вытаскиванию из держателя пробирки её следует несколько раз перевернуть на 180°. Встряхивать ёмкость запрещено!

Методика исследования


Метод полимеразной цепной реакции основан на многократном увеличении количества копий определённых участков ДНК, который потенциально может носить исследуемый генетический материал. Многократное увеличение копий определённых фрагментов дезоксирибонуклеиновой кислоты или по-другому амплификация позволяет найти в исследуемом материале характерный для конкретного инфекционного агента генетический код. Высокая специфичность или чувствительность методики основана на чётком подборе специфичных для конкретного заболевания диагностических критериев.

Что выявляет ПЦР?

Исследование при помощи полимеразной цепной реакции позволяет выявить практически любую вирусную инфекцию на ранней стадии, пока заболевание находится в латентной или скрытой стадии, т.е. не обладает какими-либо клиническими проявлениями. Высокая специфичность позволяет подтвердить или исключить исследуемое заболевание с высокой точностью и минимальным риском возникновения ложноположительного или ложноотрицательного результата.

Вирус папилломы человека (ВПЧ)ПЦР – диагностика позволяет провести исследование на такие инфекционные заболевания, как:
  • ВИЧ – инфекция;
  • Вирус папилломы человека (ВПЧ);
  • Вирус простого герпеса.

В случае с вирусом ветряной оспы (Varicella zoster virus) для ПЦР-исследования используют следующие виды биологического материала:
  • амниотическая жидкость;
  • капиллярная или венозная кровь;
  • спинномозговая жидкость или ликвор;
  • слюна;
  • соскоб эпидермиса.

Кому необходимо проведение исследования?


Диагностику для исключения или подтверждения инфицирования вирусом простого герпеса, который вызывает ветряную оспу, проводят в первую очередь людям, находившимся в контакте с инфекционными больными. ПЦР диагностика на Varicella zoster virus особенно важна у беременных и пожилых людей, так как они находятся в зоне повышенного риска развития осложнений данного заболевания. 

Интерпретация результатов


Интерпретация результатов анализаЕсли человек не инфицирован вирусом простого герпеса, то результат будет отрицательным. В случае инфицирования, даже малейшие концентрации вируса в организме дадут положительный результат исследования.

Проведённая полимеразная цепная реакция даёт однозначный результат наличия или отсутствия вируса в организме исследуемого человека. Высокая чувствительность метода сводит к минимуму возникновение ложных результатов исследования. 

Заключение анализа необходимо показать лечащему врачу или специалисту-инфекционисту для постановки окончательного клинического диагноза.