Гистология: Скрининг рака шейки матки

Иммуногистохимическое исследование маркера ранней диагностики дисплазии p16^INK4a + ki-67

Исследование маркера ранней диагностики дисплазии высокой степени p16INK4a + ki-67 проводится для выявления рака шейки матки в самом начале развития болезни. 

Характеристика исследования:

• Тип биоматериала: образец ткани (биоптат) образования шейки матки, помещенный в формалин.
• Синонимы (rus): белок p16INK4a; иммуногистохимическое исследование (ИГХ), онкопротеин.
• Синонимы (eng): Protein p16INK4a; IHC (ImmunoHistoChemistry); oncoprotein; immunohistochemical analysis.
• Метод исследования: гистологический метод
• Сроки выполнения: 7 дней

Рак шейки матки и маркеры

Рак шейки матки - злокачественный процесс в эпителии слизистой цервикального канала. По мере развития опухоль прорастает все слои и может метастазировать в другие органы.

Различают два типа злокачественных процессов шейки матки:

• аденокарцинома - опухоль железистого типа;
• плоскоклеточный рак - опухоль из покровных клеток.

В настоящий момент рак шейки матки  - наиболее частая онкологическая проблема женской половой сферы. Чем раньше процесс выявлен, тем более вероятно радикальное излечение.

Научная медицина выявила закономерность разрастания рака шейки матки и активности белков p16^INK4a и ki-67. Указанные полипептиды участвуют в процессах деления клеток. Опухоли снижают активность белка p16^INK4a, но те образования, которые вызваны папилломавирусами, вызывают значительный всплеск его деятельности. Одной из важнейших причин в формировании рака шеки матки считают именно этот вирус. Второй полипептид ki-67 является маркером интенсивности деления опухолевых клеток. Чем его больше, тем злокачественнее процесс.

Кому проводят иммуногистохимическое исследование?

Существует четыре клинических показания для назначения иммуногистохимического исследования. Метод специфичен, используется только в онкогинекологии.

Иммуногистохимическое исследование назначают при:

• выявлении подозрительного образования в слизистой шейки матки;
• наличии в анамнезе болезней, вызванных папилломавирусами;
• высокой степени дисплазии эпителия шейки матки, выявленной в результате рутинной биопсии;
• выявлении прогрессии рака шейки матки.

Иммуногистохимическое исследование необходимо именно для того, чтобы выявить самый ранний рак шейки матки. При наличии грубого образования, прорастающего все слои и верифицированного обычной биопсией, назначение подобного анализа бессмысленно.

Методика исследования

Проводится стандартная биопсия щипцами участков шейки матки. Предварительно иногда выполняется кольпоскопия. Далее ткань погружается в формалин и направляется в гистологическую лабораторию.

После выполнения микротомирования и наложения ткани на предметное стекло, обрабатывают материал маркированными антителами к белкам p16^INK4a и ki-67. Врач-гистолог изучает под микроскопом, количество окрашенных маркером клеток с этими белками.

Важность исследования

В шейке матки содержатся клетки, которые должны присутствовать в норме для поддержания функциональности ткани. У некоторых пациенток появляются очаги эрозии, дисплазии, что впоследствии может привести к развитию атипичных клеток. В этом случае необходимо проводить иммуногистохимическое исследование маркера ранней диагностики дисплазии. Это тест, который выявляет патологию на ранних этапах развития, когда симптоматика еще не проявляется, но в структуре тканей уже наблюдаются изменения. Важно своевременно провести это исследование, чтобы применить адекватные методы терапии и исключить развитие следующих осложнений:

• кровотечение после любого механического воздействия, например, различных врачебных манипуляций, полового акта;
• затрудненный процесс родоразрешения вследствие нарушения эластичности тканей на фоне образования рубцов вследствие воспаления;
• проникновение и обильное размножение инфекционных микроорганизмов, которые приводят к развитию очагов нагноения;
• формирование злокачественных клеток, которые могут вызвать не только опухоль в области шейки матки, но и развитие метастазов в других областях организма.

Только на основании иммуногистохимического исследования можно обнаружить специфические компоненты, которые свидетельствуют о развитии патологического очага, который может представлять собой дисплазию или злокачественный процесс. Другие методы исследования лишь выявляют риск подобных отклонений, но косвенно. Для постановки дифференциального диагноза требуется именно этот анализ.

Важно помнить, что исследование не проводят в профилактических целях. Его назначают при выявлении дефекта тканей в процессе общего обследования.

Для чего необходим анализ

Через иммуногистохимический анализ изъятых образцов тканей определяют следующие сведения:

• точный клеточный состав тканей, на основании которого можно выявить различные патологии (инфекция, аутоиммунный процесс, воспаление, эрозия, злокачественное перерождение);
• изучение степени распространения патологического очага в динамике, если выявлено хроническое заболевание (так можно определить постепенное восстановление структуры тканей или развитие осложнений с увеличением очага поражения);
• подбор оптимальных методов терапии, которые могут состоять из консервативных или радикальных хирургических тактик;
• отслеживание результата лечения, в этих целях анализ можно проводить в процессе применения методик или после их завершения;
• оценка состояния пациента в период ремиссии, если появляется риск обострения (риск определяют по проявляющейся клинической симптоматике или данным других лабораторно-инструментальных тестов).

Так как исследование выявляет даже ранние этапы развития патологии, его можно проводить при выявлении незначительного патологического очага. Раннее выявление диагноза поможет в подборе методов терапии. В этом случае будет достаточно консервативных тактик. Если же патология выявлена на поздних этапах, может потребоваться хирургическое вмешательство вплоть до полного удаления органа.

Особенности анализа

При выборе иммуногистохимического исследования с целью изучения тканей и их клеток выделяют ряд особенностей:

• образцы тканей получают только через инвазивную процедуру, которую выполняет врач-гинеколог;
• в первоначальной форме клетки в тканях быстро погибают, поэтому проводят обезвоживание, а затем обработку парафином;
• для создания микропрепаратов парафин требуется удалить, так как это временная мера, необходимая при хранении и транспортировке;
• процесс создания микропрепарата сложный и многоступенчатый, врачу необходимо создать специфические иммунные комплексы и окрасить структуру ткани, чтобы появилась возможность просмотра под микроскопом;
• после завершения исследования сохраняют микропрепараты или снимки после фотофиксации, чтобы сравнивать результаты разных анализов и отслеживать динамику развития болезни;
• перед сбором биоматериала требуется провести минимальную подготовку, в процессе которой отказываются от алкоголя за 1 сутки, от пищи за 8 часов, от жидкостей за 3 часа;
• диагностику иммунных комплексов проводят только при помощи современных микроскопов, которые могут приблизить изображение до максимальной степени, чтобы врач изучил полную структуру каждой клетки;
• средний период выполнения анализа составляет 5-7 дней, так как в процессе диагностики изучают структуру каждой клетки, чтобы не упустить патологический очаг;
• из полученного образца ткани создают 3 и более микропрепарата, тогда можно тщательно изучить всю область поражения.

Сбор биоматериала осуществляет гинеколог, подготовку микропрепаратов – лаборант, изучение срезов – цитолог. Как только будет завершена диагностика, результаты передают лечащему врачу или пациенту.

Создание микропрепаратов

Для проведения иммуногистохимического исследования требуется предварительное создание микропрепаратов. Это сложная процедура, которую выполняют по этапам:

• удаление парафина с изъятых тканей, которые затем нарезают на тончайшие слои;
• добавление специфических ферментов, которые возвращают антигенную активность ткани;
• применение протеинового блока, при помощи которого окрашивание происходит только в структуре тканей;
• добавление лабораторного реагента с антителами с последующей инкубацией, чтобы спровоцировать образование иммунных комплексов антиген-антитело;
• добавление дополнительного лабораторного реагента с системой детекции, после чего образец повторно инкубируют;
• внесение лабораторного красителя на основе гематоксилина, который проникает в структуру клеток, поэтому они становятся видимы под микроскопом;
• удаление жидкости;
• внесение микропрепаратов под покровочное стекло.

В таком виде микропрепараты микроскопируют. Сохранить их невозможно, но благодаря современным микроскопам допустимо выполнять фотофиксацию. То есть создают и сохраняют снимки увиденных клеток.

Микроскопия

Для оценки клеточной структуры используют современные микроскопы. Они способны просматривать микропрепараты на различных увеличениях. Первоначально используют дальнее увеличение, чтобы изучить следующие особенности микропрепарата:

• общая структура ткани;
• содержание нормальных или патологических волокон, например, при фиброзе;
• расположение патологического очага при его наличии.

Как только выявлен очаг поражения, выполняют максимальное приближение. Уже на этом этапе оценивают структуру каждой клетки, тщательно изучая мембрану, цитоплазму, органеллы, ядро, ядрышки. Если выявляют атипичные клетки, описывают степень уменьшения их дифференцировки, от чего зависит злокачественность.

Всю выявленную информацию врач-цитолог заносит в лабораторный бланк. Описывают одновременно параметры нормальных и патологических тканей. Если выявлено небольшое количество атипичных клеток, он проводит точный расчет. В случае их большого числа указывают обильное распространение патологического очага.

Результат иммуногистохимического исследования

Заключение дается исключительно лечащему врачу, так как оценивается количество белка p16^INK4a и индекс белка ki-67. Высчитывается соотношение между ними.

При высокой активности белков и большой степени индексации при наличии дисплазии высокой степени следует предполагать развитие малигнизации. Если рак был излечен, а в анализе снова появились изменения белков, то значит, что рак прогрессирует.

По итогам гистологического анализа принимается решение о дальнейшей тактике лечения пациентки. Так как стадия выявления опухоли - ранняя, проводится радикальная терапия, которая заканчивается выздоровлением.